Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Vi anerkender Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson og Clare Doig for deres bidrag til udviklingen af vores koloni vedligeholdelse metoder og tre anonym korrekturlæsere for deres forslag, som bidrog til at forbedre håndskriftet. Vores forskning er understøttet af et program grant og fellowship til AAH fra National Health og Medical Research Council og en oversættelse tilskud fra the Wellcome Trust. PAR er en modtager af en australske regering forskning uddannelse Program Scholarship.

Blod fodring af myg på forsøgspersoner blev godkendt af University of Melbourne menneskelige etiske komité (godkendelse #: 0723847). Alle frivillige givet informeret skriftligt samtykke.
1. larve opdræt
Bemærk: Myg er afholdt på 26 ± 0,5 ° C og 50-70% relativ luftfugtighed, med en 12:12 h (lys: mørke) lysperiode for denne koloni vedligeholdelsesprotokol. Disse betingelser er svarer til de gennemsnitlige klimaforhold i Cairns, Australien og inden for den optim...

Efter protokollen præsenteret her for vedligeholdelse af Wolbachia-inficerede Ae. aegypti bør sikre, at sunde myg af en ensartet kvalitet er produceret for eksperimenter og åbne felt udgivelser. I modsætning til andre protokoller, der prioriterer produktion af massive mængder af myg (Se reference57), er metoderne, der fokuseret på at maksimere deres fitness, både inden for generationer ved at gennemføre afslappet opdræt betingelser, og på tværs af generationer ved at m...

Aedes aegypti myg er ansvarlige for fremsendelse af nogle af de vigtigste arboviruses i verden, herunder dengue, Zika og chikungunya1. Disse vira er ved at blive en stigende trussel mod den globale sundhed, som den omfattende udbredelse af Ae. aegypti i troperne fortsætter med at udvide2,3,4. Kvindelige Ae. aegypti lever fortrinsvis af menneskeblod5 og dermed tendens til at leve tæt på mennesker, navnlig i byområderne, hvor befolkningen er mest tætte. Gennem dette nære forhold til mennesker har de også tilpasset til at yngle i kunstige levesteder, herunder dæk, gryder, tagrender og vand kampvogne6,7. AE. aegypti tilpasses også let laboratorium miljøer hvor de kan opretholdes uden særlige krav efter at være indsamlet direkte fra marken, i modsætning til nogle andre arter i Aedes slægten8, 9,10. Deres nem vedligeholdelse har set dem studerede bredt i laboratoriet i en bred vifte af områder, i sidste ende sigter mod at styre sygdomme myg kan overføre.
Traditionelt, arboviral kontrol er stærkt afhængig af anvendelsen af insekticider til at reducere mosquito befolkninger. Men der er stigende interesse i tilgange hvor modificerede myg er opdrættet i laboratoriet og derefter frigives i naturlige populationer. Frigivne myg kan være ændret genetisk11,12,13, biologisk14,15, gennem bestråling16, kemisk behandling17,18, eller med kombineret teknikker19 for at undertrykke befolkningerne i myg eller erstatte dem med myg, der er refraktære over for arboviral transmission20.
Wolbachia er bakterier, der i øjeblikket bliver brugt som en biologisk kontrol agent for arboviruses. Flere stammer af Wolbachia blev for nylig introduceret i Ae. aegypti eksperimentelt ved hjælp af embryonale mikroinjektion21,22,23,24. Disse stammer reducere kapaciteten af arboviruses at formidle og replikere i myg, faldende deres transmission potentielle23,25,26,27,28 . Wolbachia infektioner overføres fra mor til afkom, men visse stammer fremkalde sterilitet, når inficerede mænd parre sig med ikke-inficerede hundyr22. Wolbachia-inficerede hanner kan derfor blive frigivet i store mængder til at undertrykke naturlige mosquito befolkninger, som for nylig demonstreret i andre Aedes arter15,29. Da Wolbachia også hæmme arboviral transmission i Ae. aegypti, udgivet myg kan også erstatte indfødte befolkning med dårligere vektorer. Ae. aegypti inficeret eksperimentelt med Wolbachia udgives nu i feltet i flere lande, der anvender denne sidstnævnte tilgang14,30,31.
Wolbachia-baserede tilgange til arboviral kontrol stole på en god forståelse af samspillet mellem Wolbachia, myg og miljø. Wolbachia forekommer naturligt i en bred vifte af insekter, og stammer indføres i myg er forskellige i deres virkninger32. Som ny Wolbachia infektion typer er indført i Ae. aegypti24, er det nødvendigt at karakterisere hver stamme for deres effekt på myg fitness, reproduktion og arboviral interferens under en række betingelser. Streng eksperimenter i laboratoriet er derfor forpligtet til at vurdere mulighederne for Wolbachia stammer til at lykkes i feltet.
Feltet åben udgivelser af Ae. aegypti med Wolbachia infektioner kan ofte kræve tusinder eller titusinder af myg pr. udgivelse zone skal opdrættes hver uge14,30,31. Succesen med indledende udgivelser kan forbedres ved at frigive myg i en stor størrelse for at maksimere deres frugtbarhed33 og parring succes34,35. Myg bør også tilpasses til de betingelser, de vil opleve i feltet, men langsigtede laboratorium opdræt kan forårsage ændringer i adfærd og fysiologi, som kunne påvirke feltet ydeevne36,37, 38.
Vi beskriver en simpel protokol til opdræt af Ae. aegypti i laboratoriet ved hjælp af grundlæggende udstyr. Denne protokol er velegnet til både wild-type og Wolbachia-inficerede myg, hvor sidstnævnte kan kræve særlig opmærksomhed som nogle Wolbachia stammer har betydelige virkninger på myg livshistorie træk39, 40. opdræt betingelserne undgå overbefolkning og konkurrence for mad til at producere myg af en ensartet størrelse, som er afgørende for vektor kompetence og fitness eksperimenter, og sikrer, at myg er sundt for feltet release41 . Vi også tage forholdsregler for at minimere laboratorium tilpasning og indavl ved at reducere selektiv pres og at sikre, at den næste generation er samplet fra en stor, tilfældige swimmingpool. Men laboratoriet miljøer er tydeligt adskiller sig fra marken, og langsigtet vedligeholdelse under afslappede forhold kunne reducere fitness af myg ved udgivelse i felt37,42,43 . Vi krydser derfor hunner fra laboratoriet linjer til field-indsamlede hanner med jævne mellemrum, hvilket resulterer i kolonier, der er genetisk ens for eksperimenterende sammenligninger og der er tilpasset til target field befolkning39. Metoderne, der kræver ikke nogen specialiseret udstyr og kan skaleres til bageste tiere tusinde individer pr. uge for feltet udgivelser. Protokollen også prioriterer fitness af myg inden for og på tværs af generationer, en vigtig overvejelse for insekter til etablering i naturlige populationer. Protokollen er velegnet til de fleste laboratorier, der kræver vedligeholdelse af Ae. aegypti, især for eksperimenterende sammenligninger hvor en ensartet kvalitet af myg og relatability til feltet er vigtigt.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Aedes aegypti myg eksperimentelt inficeret med Wolbachia udnyttes i programmer til at kontrollere spredningen af arboviruses såsom dengue, chikungunya og Zika. Wolbachia-inficerede myg kan blive frigivet i feltet enten reducere befolkningen størrelser gennem uforenelig parringer eller omdanne populationer med myg, der er refraktære over for virus transmission. For disse strategier kan lykkes, skal myg frigives i feltet fra laboratoriet være konkurrencedygtige med indfødte myg. Dog kan fastholde myg i laboratoriet resultere i indavl, genetisk drift og laboratorium tilpasning, som kan reducere deres fitness i feltet og kan forvirre resultater af eksperimenter. For at teste egnetheden af forskellige Wolbachia infektioner til indsættelse i feltet, er det nødvendigt at opretholde myg i et kontrolleret laboratoriemiljø på tværs af flere generationer. Vi beskriver en enkel protokol for at opretholde Ae. aegypti myg i det laboratorium, som er velegnet til både Wolbachia-inficerede og wild-type myg. Metoderne minimere laboratorium tilpasning og gennemføre outcrossing for at forøge relevansen af eksperimenter til feltet myg. Derudover bevares kolonier under optimale betingelser for at maksimere deres egnethed til friland udgivelser.

Figur 4 viser suboptimal ernæring indvirkning på udviklingen af Ae. aegypti larver. Når beholdere leveres med 0,25 mg af mad per larve pr. dag eller mindre, udviklingstiden stigninger for både mænd og kvinder, og er mindre synkron end i containere forsynet med 0,5 mg af mad. Hvis tilstrækkelig mad ikke er fastsat i hele varigheden af larve udvikling, kunne det have en negativ indvirkning på vedligeholdelsesplanen. Langsom-udvikle individer er ...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Opretholdelse af Aedes aegypti myg inficeret med Wolbachia

Aedes aegypti myg inficeret med Wolbachia frigives i naturlige populationer at undertrykke transmission af arboviruses. Vi beskriver metoder til bageste Ae. aegypti med Wolbachia infektioner i laboratoriet for eksperimenter og felt udgivelse, at tage forholdsregler for at minimere laboratorium tilpasning og udvalg.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-medieret Gene Knockdown og<em&gt; In Vivo</em&gt; Diurese Assay i Voksen Kvinde<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Myg

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiske Recordings og RNA-sekventering af smags- Vedhæng i gul-feber Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fedt kroppen organsystem kultur i Aedes Aegypti, en vektor af Zika Virus

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...