Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Wij erkennen Heng Lin Yeap, Chris Paton Petrina Johnson en Clare Doig voor hun bijdragen aan de ontwikkeling van onze kolonie onderhoud methoden en drie Anoniem reviewers voor hun suggesties die bijgedragen aan een verbetering van het manuscript. Ons onderzoek wordt ondersteund door een programma grant en de fellowship te AAH van de National Health en Medical Research Council en een vertaling van de Wellcome Trust verlenen. PAR is een ontvanger van een Australische regering onderzoek opleiding programma beurs.

Bloed voederen van muggen op menselijke proefpersonen werd goedgekeurd door de Universiteit van Melbourne menselijke ethische Commissie (goedkeuring #: 0723847). Alle vrijwilligers die op de hoogte gesteld schriftelijke toestemming.
1. de larvale fokken
Opmerking: Muggen worden gehouden op 26 ± 0,5 ° C en 50-70% relatieve vochtigheid, met een 12:12 h (licht: donker) fotoperiode voor dit onderhoudsprotocol kolonie. Deze voorwaarden zijn vergelijkbaar met de gemiddeld...

Volgens het protocol hier gepresenteerd voor het onderhoud van Wolbachia-besmette Ae. aegypti moeten ervoor zorgen dat gezonde muggen van een constante kwaliteit worden geproduceerd voor experimenten en veld releases open. In tegenstelling tot andere protocollen die het prioriteren van de productie van massale hoeveelheden muggen (zie referentie57), zijn de methoden gericht op het maximaliseren van hun fitness, zowel binnen de generaties door ontspannen steigerend uitvoeringsvoor...

Aedes aegypti muggen zijn verantwoordelijk voor het overbrengen van enkele van de belangrijkste arboviruses in de wereld, met inbegrip van Zika, dengue en chikungunya1. Deze virussen worden een steeds ernstiger bedreiging vormt voor de gezondheid van de mondiale zoals de wijdverspreide distributie van Ae. aegypti in de tropen blijft uitbreiden van2,3,4. Vrouwelijke Ae. aegypti netcongestieproblemen voeden met menselijk bloed5 en dus de neiging om te leven dicht bij de mens, met name in stedelijke gebieden waar populaties dichtste zijn. Door deze nauwe samenwerking met de mens hebben ze ook aangepast om te broeden in kunstmatige habitat, inclusief banden, potten, dakgoten en water tanks6,7. AE. aegypti ook gemakkelijk aan te passen aan laboratorium omgevingen waar zij kunnen worden gehandhaafd zonder speciale eisen na wordt verzameld rechtstreeks uit het veld, in tegenstelling tot sommige andere soorten in de Aedes geslacht8, 9,10. Hun gemak van onderhoud ze wijd studeerde in het laboratorium in een brede waaier van velden heeft gezien, uiteindelijk gericht op het bepalen van de ziekten muggen kan doorgeven.
Traditioneel, afhankelijk arboviral controle sterk van het gebruik van insecticiden te verminderen mug populaties. Echter, er is steeds meer belangstelling in benaderingen waar gemodificeerde muggen zijn gekweekt in het laboratorium en vervolgens vrijgelaten in natuurlijke populaties. Vrijgegeven muggen kunnen genetisch gewijzigd worden11,12,13, biologisch14,15, door middel van bestraling16, chemische behandeling17,18, of met gecombineerde technieken19 onderdrukken van de bevolking van muggen of vervang ze door muggen die vuurvaste arboviral transmissie20.
Wolbachia zijn bacteriën die momenteel worden gebruikt als een agent van de biologische bestrijding voor arboviruses. Verschillende stammen van Wolbachia werden onlangs binnengebracht Ae. aegypti experimenteel met behulp van embryonale microinjection21,22,23,24. Deze stammen verminderen de capaciteit van de arboviruses te verspreiden en te repliceren in de mug, het afnemen van hun transmissie potentiële23,25,26,27,28 . Wolbachia infecties worden doorgegeven van moeder aan nakomelingen, maar bepaalde spanningen steriliteit induceren wanneer geïnfecteerde mannen met niet geïnfecteerde vrouwen22 paren. Wolbachia-geïnfecteerde mannen kunnen daarom worden vrijgegeven in grote hoeveelheden natuurlijke mug populaties, zoals onlangs is aangetoond in andere Aedes -soorten15,29te onderdrukken. Nochtans, aangezien Wolbachia ook remmen arboviral transmissie in Ae. aegypti, muggen kunnen ook worden vrijgegeven ter vervanging van de inheemse bevolking met armere vectoren. Ae. aegypti experimenteel geïnfecteerd met Wolbachia worden nu vrijgegeven in het veld in verschillende landen met behulp van deze laatste benadering14,30,31.
Wolbachia-gebaseerde benaderingen voor arboviral besturingselement afhankelijk van een goed begrip van de interacties tussen Wolbachia, de mug en het milieu. Wolbachia van nature in een breed scala van insecten, en de stammen binnengebracht muggen zijn divers in hun effecten32. Als nieuwe Wolbachia infectie typen in Ae. aegypti24worden binnengebracht, is het noodzakelijk te karakteriseren van elke stam voor hun effecten op de mug fitness, voortplanting en arboviral storing onder een aantal voorwaarden. Strenge experimenten in het laboratorium is dus vereist voor het beoordelen van het potentieel voor Wolbachia stammen om te slagen in het veld.
Open veld releases van Ae. aegypti met Wolbachia infecties kunnen vereisen vaak duizenden tot tienduizenden muggen per release zone worden gehouden elke week14,30,31. Het succes van de eerste releases kan worden verbeterd door het vrijgeven van muggen van een groot formaat om hun vruchtbaarheid33 en paring succes34,35te maximaliseren. Muggen moeten ook worden aangepast aan de omstandigheden die ze in het veld beleeft, maar op lange termijn laboratorium fokken kan er wijzigingen optreden in gedrag en fysiologie die veld prestaties36,37beïnvloeden kon, 38.
Beschrijven we een eenvoudig protocol voor het opfokken van Ae. aegypti in het laboratorium met behulp van basisuitrusting. Dit protocol is geschikt voor zowel wild-type en Wolbachia-besmette muggen, de laatste speciale aandacht vereisen kan omdat sommige Wolbachia spanningen aanzienlijke gevolgen voor de mug levensgeschiedenis traits39, hebben 40. de steigerend voorwaarden voorkomen dat overbevolking en concurrentie voor voedsel te produceren muggen met een consistent formaat, die essentieel is voor de vector competentie en fitness experimenten en zorgt ervoor dat de muggen gezond voor veld release41 zijn . Wij ook voorzorgsmaatregelen te nemen om laboratorium aanpassing en inteelt te minimaliseren door selectieve druk te verminderen en ervoor te zorgen dat de volgende generatie is gesampled uit een grote, random pool. Laboratorium omgevingen zijn duidelijk verschilt van veldomstandigheden echter, en op lange termijn onderhoud ontspannen omstandigheden kan verminderen de geschiktheid van muggen op introductie in het veld37,42,43 . Daarom steken wij vrouwtjes uit laboratorium lijnen voor veld-verzameld mannetjes regelmatig, wat resulteert in kolonies die genetisch vergelijkbaar voor experimentele vergelijkingen en die zijn aangepast aan de doelgroep veld bevolking39. De methoden vereisen geen speciale apparatuur en kunnen worden opgeschaald tot achterzijde tientallen van duizenden personen per week voor veld releases. Het protocol wordt ook de geschiktheid van muggen binnen en tussen generaties, een belangrijke overweging voor insecten die bestemd zijn voor de inrichting in natuurlijke populaties prioriteit. Het protocol is geschikt voor de meeste laboratoria die vereisen onderhoud van Ae. aegypti, met name voor experimentele vergelijkingen waar een consistente kwaliteit van muggen en relatability naar het veld zijn belangrijk.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Aedes aegypti muggen experimenteel geïnfecteerd met Wolbachia zijn in de verspreiding van arboviruses zoals dengue en chikungunya Zika-programma's wordt gebruikt. Wolbachia-geïnfecteerde muggen kunnen worden vrijgegeven in het veld te ofwel verminderen bevolking maten door incompatibele verparingen of te transformeren van populaties met muggen die vuurvaste tot overdracht van het virus. Deze strategieën om te slagen, moeten de muggen vrijkomen in het veld van het laboratorium kunnen concurreren met inheemse muggen. Echter, behoud van de muggen in het laboratorium kan leiden tot inteelt en genetische drift laboratorium aanpassing die kan verminderen hun fitness in het veld en de resultaten van experimenten kan verwarren. Om te testen de geschiktheid van verschillende Wolbachia infecties voor implementatie in het veld, is het noodzakelijk om muggen in een gecontroleerde laboratoriumomgeving over meerdere generaties. Beschrijven we een eenvoudig protocol voor het handhaven van Ae. aegypti muggen in het laboratorium, geschikt voor beide Wolbachia is-besmette en wild-type muggen. De methoden minimaliseren laboratorium aanpassing en uitvoering outcross te verhogen van de relevantie van de experimenten aan veld muggen. Bovendien worden kolonies bijgehouden onder optimale omstandigheden te maximaliseren hun geschiktheid voor open veld releases.

Figuur 4 toont de gevolgen van suboptimaal voeding voor de ontwikkeling van het larven Ae. aegypti . Wanneer containers beschikbaar met 0,25 mg voedsel per larve per dag of minder, de ontwikkeltijd verhoogt voor zowel mannen als vrouwen, en is minder synchrone dan in recipiënten voorzien van 0.5 mg van voedsel. Als voldoende voedsel niet gedurende de looptijd van larvale ontwikkeling wordt geleverd, kan dit een negatief effect hebben op het onderhou...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Behoud van Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia

Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia worden vrijgegeven in natuurlijke populaties te onderdrukken van de overdracht van arboviruses. We worden methoden beschreven aan achterzijde Ae. aegypti met Wolbachia infecties in het laboratorium voor experimenten en veld release, voorzorgsmaatregelen nemen om laboratorium aanpassing en selectie te minimaliseren.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Injectie van dsRNA in Vrouw A. aegypti Mosquitos

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Micro-injectie van A. aegypti embryo&#39;s om transgene muggen verkrijgen

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Protocol voor Dengue Infecties in Muggen (A. aegypti) en Infectie Fenotype Bepaling

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Ontleding van Midgut en speekselklieren van de Ae. aegypti Muggen

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

Bouwen aan een betere Mosquito: Het identificeren van de genen Enabling malaria en knokkelkoorts verzet in A. gambiae en A. aegypti muggen

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-gemedieerde Gene Knockdown en<em&gt; In Vivo</em&gt; Urineproductie Assay in het volwassenenonderwijs Vrouw<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Muggen

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologische Recordings en RNA Sequencing van de Smaak Appendages van de Gele-koorts Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Vet orgel cultuur lichaamssysteem in Aedes Aegypti, een Vector van Zika-Virus

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...