Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
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हम हमारे कॉलोनी रखरखाव के तरीकों के विकास के लिए उनके योगदान के लिए Heng लिन Yeap, क्रिस Paton, Petrina जॉनसन और क्लेयर Doig स्वीकार करते हैं, और उनके सुझावों जो पांडुलिपि में सुधार करने में मदद के लिए तीन गुमनाम समीक्षक । हमारे शोध को एक कार्यक्रम अनुदान और राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद से AAH को फैलोशिप और वेलकम ट्रस्ट से एक अनुवाद अनुदान द्वारा समर्थित है । सममूल्य एक ऑस्ट्रेलियाई सरकार के अनुसंधान प्रशिक्षण कार्यक्रम छात्रवृत्ति के एक प्राप्तकर्ता है ।

मानव विषयों पर मच्छरों का रक्त पिलाना विश्वविद्यालय मेलबोर्न मानव आचार समिति (अनुमोदन #: ०७२३८४७) द्वारा अनुमोदित किया गया. सभी स्वयंसेवकों को लिखित सहमति प्रदान की गई ।
१. लार्वा पाहिजे
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Wolbachia-संक्रमित एई. aegypti के रखरखाव के लिए यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल के बाद यह सुनिश्चित करना चाहिए कि एक सुसंगत गुणवत्ता के स्वस्थ मच्छरों प्रयोगों और खुले मैदान रिलीज के लिए उत्पादित कर रहे हैं । अंय ?...

एडीज aegypti मच्छरों को डेंगू, Zika और chikungunya1सहित दुनिया में सबसे महत्वपूर्ण arboviruses में से कुछ को हस्तांतरित करने के लिए जिंमेदार हैं । इन वायरस वैश्विक स्वास्थ्य के लिए एक बढ़ती खतरा होते जा रहे है एई. aegypti के बड़े पैमाने पर उष्णकटिबंधीय में वितरण के रूप में विस्तार करने के लिए जारी है2,3,4। महिला एई. aegypti तरजीह मानव रक्त5 पर फ़ीड और इस तरह मनुष्य को करीब निकटता में रहते हैं, विशेष रूप से शहरी क्षेत्रों में जहां आबादी सबसे घने हैं । मानव के साथ इस बंद के सहयोग से वे भी कृत्रिम निवास में टायर, बर्तन, गटर और पानी के टैंक6,7सहित नस्ल के लिए अनुकूलित किया है । Ae. aegypti भी आसानी से प्रयोगशाला के वातावरण के लिए अनुकूल है जहां वे किसी विशेष आवश्यकताओं के बिना बनाए रखा जा सकता है के बाद सीधे क्षेत्र से एकत्र किया जा रहा है, एडीज जीनस8में कुछ अंय प्रजातियों के विपरीत, 9,10. रखरखाव के अपने आसानी उंहें खेतों की एक विस्तृत रेंज में प्रयोगशाला में व्यापक रूप से अध्ययन देखा है, अंततः बीमारियों को नियंत्रित करने के लिए लक्ष्य मच्छरों संचारित कर सकते हैं ।
परंपरागत रूप से, arboviral नियंत्रण मच्छर की आबादी को कम करने के लिए कीटनाशकों के उपयोग पर काफी निर्भर करता है । हालांकि, वहां दृष्टिकोण में रुचि बढ़ रही है जहां संशोधित मच्छरों प्रयोगशाला में पीछे है और फिर प्राकृतिक आबादी में जारी है । जारी मच्छरों आनुवंशिक रूप से संशोधित किया जा सकता है11,12,13, जैविक रूप से14,15, विकिरण के माध्यम से16, रासायनिक उपचार17,18, या संयुक्त तकनीक के साथ19 या तो मच्छरों की आबादी को दबाने या उंहें मच्छरों कि arboviral संचरण20के लिए दुर्दम्य है के साथ बदलें ।
Wolbachia बैक्टीरिया है कि वर्तमान में arboviruses के लिए एक जैविक नियंत्रण एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा रहा है। Wolbachia के कई उपभेदों हाल ही में एई में पेश किया गया । aegypti प्रयोग भ्रूण microinjection21,22,23,24। इन उपभेदों arboviruses की क्षमता को कम करने के लिए प्रसार और मच्छर में दोहराने, उनके संचरण क्षमता कम23,25,26,27,28 . Wolbachia संक्रमण मां से वंश के लिए प्रेषित कर रहे हैं, लेकिन कुछ उपभेदों जब संक्रमित पुरुषों के साथ22संक्रमित महिलाओं को बाँझता प्रेरित । Wolbachia-संक्रमित पुरुषों इसलिए बड़ी मात्रा में प्राकृतिक मच्छर आबादी को दबाने के लिए जारी किया जा सकता है, के रूप में हाल ही में अंय एडीज प्रजातियों में प्रदर्शन किया15,29। हालांकि, के बाद से Wolbachia भी एई. aegyptiमें arboviral संचरण बाधित, मच्छरों को भी गरीब वैक्टर के साथ मूल आबादी की जगह जारी किया जा सकता है । Ae. aegypti Wolbachia के साथ प्रयोग संक्रमित अब कई देशों में इस बाद दृष्टिकोण का उपयोग कर14,30,31में क्षेत्र में जारी किया जा रहा है ।
arboviral नियंत्रण के लिए Wolbachia-आधारित दृष्टिकोण Wolbachia, मच्छर और पर्यावरण के बीच बातचीत की एक ध्वनि समझ पर भरोसा करते हैं । Wolbachia कीड़ों की एक व्यापक रेंज में स्वाभाविक रूप से होते हैं, और मच्छरों में शुरू उपभेदों उनके प्रभाव३२में विविध रहे हैं । के रूप में नए Wolbachia संक्रमण प्रकार Ae. aegypti24में पेश कर रहे हैं, यह मच्छर स्वास्थ्य पर अपने प्रभाव के लिए प्रत्येक तनाव विशेषताएं, प्रजनन और शर्तों की एक श्रेणी के तहत arboviral हस्तक्षेप आवश्यक है । प्रयोगशाला में कठोर प्रयोग इसलिए क्षेत्र में सफल होने के लिए Wolbachia उपभेदों के लिए क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए आवश्यक है ।
खुला क्षेत्र Wolbachia संक्रमण के साथ एई. aegypti की विज्ञप्ति अक्सर हजारों के लिए की आवश्यकता कर सकते है मच्छरों की रिहाई क्षेत्र प्रति हजारों के लिए प्रत्येक सप्ताह14,30,31येते । प्रारंभिक रिलीज की सफलता के लिए एक बड़े आकार के मच्छरों को रिहा करके सुधार किया जा सकता है उनके fecundity३३ और संभोग सफलता३४,३५अधिकतम । मच्छरों भी शर्तों वे क्षेत्र में अनुभव होगा के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए, लेकिन लंबी अवधि के पालन प्रयोगशाला व्यवहार और शरीर विज्ञान जो क्षेत्र के प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता है में परिवर्तन का कारण हो सकता है३६,३७, ३८.
हम बुनियादी उपकरणों का उपयोग कर प्रयोगशाला में एई. aegypti पालन के लिए एक सरल प्रोटोकॉल का वर्णन । इस प्रोटोकॉल दोनों जंगली प्रकार और Wolbachiaसंक्रमित मच्छरों के लिए उपयुक्त है, जिसके बाद विशेष ध्यान की आवश्यकता होती है के रूप में कुछ Wolbachia उपभेदों मच्छर जीवन पर पर्याप्त प्रभाव है-इतिहास लक्षण३९, ४०. पालन शर्तों भीड़ और भोजन के लिए प्रतिस्पर्धा से बचने के लिए एक सुसंगत आकार के मच्छरों का उत्पादन है, जो वेक्टर क्षमता और फिटनेस प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण है, और यह सुनिश्चित करता है कि मच्छरों क्षेत्र के लिए स्वस्थ है रिलीज४१ . हम यह भी सावधानी बरतने के लिए प्रयोगशाला अनुकूलन और चयनात्मक दबाव को कम करने और यह सुनिश्चित करना है कि अगली पीढ़ी के एक बड़े, यादृच्छिक पूल से नमूना है द्वारा रिश् ते कम करने के लिए ले । हालांकि, प्रयोगशाला वातावरण स्पष्ट रूप से क्षेत्र की स्थितियों से अलग हैं, और आराम की स्थिति के तहत लंबी अवधि के रखरखाव के क्षेत्र में रिलीज पर मच्छरों की फिटनेस को कम कर सकता है३७,४२,४३ . इसलिए हम प्रयोगशाला लाइनों से महिलाओं के क्षेत्र के लिए पार-पुरुषों के एकत्र समय, कालोनियों कि प्रयोगात्मक तुलना के लिए आनुवंशिक रूप से समान है और जो लक्ष्य क्षेत्र जनसंख्या३९के लिए अनुकूलित कर रहे है में जिसके परिणामस्वरूप । तरीकों किसी भी विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है और क्षेत्र विज्ञप्ति के लिए प्रति सप्ताह व्यक्तियों के हजारों के रियर दसियों के लिए बढ़ाया जा सकता है । प्रोटोकॉल भी मच्छरों की फिटनेस को प्राथमिकता के भीतर और पीढ़ियों के पार, प्राकृतिक आबादी में स्थापना के लिए किस्मत में कीड़ों के लिए एक महत्वपूर्ण विचार । प्रोटोकॉल सबसे प्रयोगशालाओं कि एई. aegyptiके रखरखाव की आवश्यकता के लिए उपयुक्त है, विशेष रूप से प्रयोगात्मक तुलना के लिए जहां मच्छरों की एक सुसंगत गुणवत्ता और क्षेत्र के लिए संबंधित है महत्वपूर्ण हैं ।

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

एडीज aegypti मच्छरों प्रयोग से संक्रमित Wolbachia जैसे डेंगू, chikungunya और Zika के रूप में arboviruses के प्रसार को नियंत्रित करने के लिए कार्यक्रमों में उपयोग किया जा रहा है । Wolbachiaसंक्रमित मच्छरों के क्षेत्र में जारी किया जा सकता है या तो असंगत संभोग के माध्यम से जनसंख्या आकार को कम करने के लिए या मच्छरों कि वायरस संचरण के लिए दुर्दम्य है के साथ आबादी को बदलने । इन रणनीतियों के लिए सफल होने के लिए, प्रयोगशाला से क्षेत्र में जारी मच्छरों देशी मच्छरों के साथ प्रतिस्पर्धी होना चाहिए । हालांकि, प्रयोगशाला में मच्छरों को बनाए रखने के लिए रिश् तों में परिणाम कर सकते हैं, आनुवंशिक बहाव और प्रयोगशाला अनुकूलन जो क्षेत्र में अपनी फिटनेस को कम कर सकते हैं और प्रयोगों के परिणामों को पाया जा सकता है । क्षेत्र में तैनाती के लिए विभिन्न Wolbachia संक्रमण की उपयुक्तता का परीक्षण करने के लिए, यह कई पीढ़ियों भर में एक नियंत्रित प्रयोगशाला वातावरण में मच्छरों को बनाए रखने के लिए आवश्यक है । हम प्रयोगशाला में एई. aegypti मच्छरों को बनाए रखने के लिए एक सरल प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, जो Wolbachia-संक्रमित और जंगली प्रकार के मच्छरों दोनों के लिए उपयुक्त है । तरीकों प्रयोगशाला अनुकूलन को कम करने और क्षेत्र मच्छरों के लिए प्रयोगों की प्रासंगिकता को बढ़ाने के लिए पार करने को लागू. इसके अतिरिक्त, कालोनियों इष्टतम शर्तों के तहत खुला क्षेत्र रिलीज के लिए अपनी फिटनेस को अधिकतम करने के लिए बनाए रखे हैं ।

चित्रा 4 एई. aegypti लार्वा के विकास पर इष्टतम पोषण के प्रभाव को दर्शाता है । जब कंटेनरों ०.२५ प्रति दिन या उससे कम के प्रति लार्वा भोजन की मिलीग्राम के साथ प्रदान की जाती हैं, दोनों ?...

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Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia से संक्रमित एडीज aegypti मच्छरों को बनाए रखने

एडीज aegypti Wolbachia से संक्रमित मच्छरों arboviruses के संचरण को दबाने के लिए प्राकृतिक आबादी में जारी किया जा रहा है । हम प्रयोगों और क्षेत्र के रिलीज के लिए प्रयोगशाला में Wolbachia संक्रमण के साथ रियर एई. aegypti तरीकों का वर्णन, प्रयोगशाला अनुकूलन और चयन को कम करने के लिए सावधानियों ले ।

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

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