Name: ground state depletion super-resolution imaging in mammalian cells
Uploaded: 2017-11-05T08:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل بمنحه من اها إلى R.E.D. (15SDG25560035). المؤلف يود أن ينوه الدكتور فرناندو سانتانا لاستخدام مجهر ثلاثي الأبعاد له "إيكا ريال الديمقراطيين الاشتراكيين"، والدكتور يوهانس الجحيم يرجى توفير جسم FP1.

1-"غسل الزجاج كوفيرسليبس" <ol><li>قبل تجهيز عينة، اليوم تنظيف الزجاج #1.5 كوفيرسليبس سونيكاتينج في حل م 1 من كوه ح 1. يؤدي هذا إلى إزالة أي ملوثات الفلورسنت التي قد تكون موجودة في كوفيرسليبس.
	<ol><li>جيدا شطف كوه من كوفيرسليبس مع الماء المتأين دي-</li>
		<li>بعد تنظيفها في كوه، تخزين كوفيرسليبس ?...

<ol>
	<li>Willig, K. I., Rizzoli, S. O., Westphal, V., Jahn, R., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STED+microscopy+reveals+that+synaptotagmin+remains+clustered+after+synaptic+vesicle+exocytosis.">STED microscopy reveals that synaptotagmin remains clustered after synaptic vesicle exocytosis.</a> Nature. 440 (7086), 935-939 (2006).</li><li>Gustafsson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+structured-illumination+microscopy:+wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution.">Nonlinear structured-illumination microscopy: wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (37), 13081-13086 (2005).</li><li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li><li>Hell, S. W., Kroug, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ground-state-depletion+fluorscence+microscopy:+A+concept+for+breaking+the+diffraction+resolution+limit.">Ground-state-depletion fluorscence microscopy: A concept for breaking the diffraction resolution limit.</a> JAppl Phys B. 60 (5), 495-497 (1995).</li><li>Bretschneider, S., Eggeling, C., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+the+diffraction+barrier+in+fluorescence+microscopy+by+optical+shelving.">Breaking the diffraction barrier in fluorescence microscopy by optical shelving.</a> Phys Rev Lett. 98 (21), 218103 (2007).</li><li>Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+transcriptional+profiling+of+adult+mouse+cardiomyocytes.">Single cell transcriptional profiling of adult mouse cardiomyocytes.</a> J Vis Exp. (58), e3302 (2011).</li><li>Davare, M. A., Horne, M. C., Hell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+phosphatase+2A+is+associated+with+class+C+L-type+calcium+channels+(Cav1.2)+and+antagonizes+channel+phosphorylation+by+cAMP-dependent+protein+kinase.">Protein phosphatase 2A is associated with class C L-type calcium channels (Cav1.2) and antagonizes channel phosphorylation by cAMP-dependent protein kinase.</a> J Biol Chem. 275 (50), 39710-39717 (2000).</li><li>Dempsey, G. T., Vaughan, J. C., Chen, K. H., Bates, M., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+fluorophores+for+optimal+performance+in+localization-based+super-resolution+imaging.">Evaluation of fluorophores for optimal performance in localization-based super-resolution imaging.</a> Nat Methods. 8 (12), 1027-1036 (2011).</li><li>Chozinski, T. J., Gagnon, L. A., Vaughan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twinkle,+twinkle+little+star:+photoswitchable+fluorophores+for+super-resolution+imaging.">Twinkle, twinkle little star: photoswitchable fluorophores for super-resolution imaging.</a> FEBS Lett. 588 (19), 3603-3612 (2014).</li><li>Dempsey, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoswitching+mechanism+of+cyanine+dyes.">Photoswitching mechanism of cyanine dyes.</a> J Am Chem Soc. 131 (51), 18192-18193 (2009).</li><li>Nahidiazar, L., Agronskaia, A. V., Broertjes, J., van den Broek, B., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Imaging+Conditions+for+Demanding+Multi-Color+Super+Resolution+Localization+Microscopy.">Optimizing Imaging Conditions for Demanding Multi-Color Super Resolution Localization Microscopy.</a> PLoS One. 11 (7), e0158884 (2016).</li><li>Ovesny, M., Krizek, P., Borkovec, J., Svindrych, Z., Hagen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ThunderSTORM:+a+comprehensive+ImageJ+plug-in+for+PALM+and+STORM+data+analysis+and+super-resolution+imaging.">ThunderSTORM: a comprehensive ImageJ plug-in for PALM and STORM data analysis and super-resolution imaging.</a> Bioinformatics. 30 (16), 2389-2390 (2014).</li><li>Veeraraghavan, R., Gourdie, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+optical+reconstruction+microscopy-based+relative+localization+analysis+(STORM-RLA)+for+quantitative+nanoscale+assessment+of+spatial+protein+organization.">Stochastic optical reconstruction microscopy-based relative localization analysis (STORM-RLA) for quantitative nanoscale assessment of spatial protein organization.</a> Mol Biol Cell. 27 (22), 3583-3590 (2016).</li><li>Ries, J., Kaplan, C., Platonova, E., Eghlidi, H., Ewers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+versatile+method+for+GFP-based+super-resolution+microscopy+via+nanobodies.">A simple, versatile method for GFP-based super-resolution microscopy via nanobodies.</a> Nat Methods. 9 (6), 582-584 (2012).</li><li>Dixon, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+Ca2+/calmodulin-dependent+coupling+of+voltage-gated+CaV1.2+channels.">Graded Ca2+/calmodulin-dependent coupling of voltage-gated CaV1.2 channels.</a> Elife. 4, (2015).</li><li>Annibale, P., Vanni, S., Scarselli, M., Rothlisberger, U., Radenovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clustering+artifacts+in+photoactivated+localization+microscopy.">Identification of clustering artifacts in photoactivated localization microscopy.</a> Nat Methods. 8 (7), 527-528 (2011).</li><li>Nan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+superresolution+imaging+allows+quantitative+analysis+of+RAF+multimer+formation+and+signaling.">Single-molecule superresolution imaging allows quantitative analysis of RAF multimer formation and signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (46), 18519-18524 (2013).</li><li>Fricke, F., Beaudouin, J., Eils, R., Heilemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One,+two+or+three?+Probing+the+stoichiometry+of+membrane+proteins+by+single-molecule+localization+microscopy.">One, two or three? Probing the stoichiometry of membrane proteins by single-molecule localization microscopy.</a> Sci Rep. 5, 14072 (2015).</li></ol>

عرضت التفجير الأخير للتكنولوجيات التي تسمح لتصوير خارج حدود حيود نوافذ جديدة إلى تعقيدات الثدييات الخلية إشارات في الزمان والمكان. وتشمل هذه التكنولوجيات العاصفة، STED والنخيل، والديمقراطيين الاشتراكيين، سيم وأشكالها (مثلاً، دستورم، فبالم). إبداع العلماء وراء هذه التقنيات قد سمح لن?...

ترجمة ردود فعل الإشارات الخلوية تغير البيئات الداخلية والخارجية لبدء استجابة خلوية. أنها تنظم جميع جوانب الفسيولوجيا البشرية، كأساس لهرمون وناقل عصبي الإفراج عن نبضات القلب، الرؤية، التسميد، والوظائف المعرفية. يمكن تعطيل هذه الشلالات مما يشير إلى عواقب وخيمة في شكل الظروف الفيزيولوجية المرضية بما في ذلك السرطان، باركنسون، ومرض الزهايمر. على مدى عقود، المحققين البيولوجية والطبية استخدمت بنجاح البروتينات الفلورية والمجسات وأجهزة استشعار العوامل البيولوجية مقترنة بالفحص المجهري الأسفار كأدوات أساسية لفهم المنظمة المكانية والزمانية الدقيقة لهذه الخلايا الإشارات.
نقاط قوة التقنيات البصرية مثل ابيفلوريسسينسي، [كنفوكل]، أو انعكاس الداخلية مجموع الأسفار (TIRF) مجهرية من حساسية، والسرعة، والتوافق مع التصوير خلية حية، في حين أن القيد الرئيسي بهم لا يمكن حل القرار حيود محدودة، وهياكل معنى أو مجمعات البروتين أقل من 200-250 نيوتن متر. مع التطور النظري والعملي للقرار فائقة القطعية (مثلاً، حفز الانبعاثات استنفاد مجهرية (STED1)، منظم إضاءة مجهرية (سيم2) أو العشوائية دقة فائقة (مثلاً ، فوتواكتيفاتيد التعريب مجهرية (النخيل3)، أو أرض الدولة نضوب (جيرمن شيبرد4،5))، تم تمديد القرار الأفقي ومحوري في الفحص المجهري الأسفار خارج الحاجز الحيود، بأمر من عشرات نانومتر. وهكذا، أن المحققين لديهم الآن لا مثيل لها القدرة على تصور وفهم كيف يترجم ديناميات البروتين والمنظمة لوظيفة على المستوى الجزيئي بالقرب.
أرض الدولة نضوب مجهرية متبوعاً بالعودة الفردية جزيء (جسديم)، أو ببساطة الديمقراطيين الاشتراكيين كما هو معروف، تلتف الحد حيود بتخفيض العدد من انبعاث فلوروفوريس4،5في وقت واحد. ويستخدم ضوء الليزر ذات الطاقة العالية لتثير عينة المسمى فلوروفوري، قصف الإلكترونات مع الفوتونات وزيادة احتمال أنهم سوف يخضع 'تدور الوجه' وأدخل الثلاثي أو 'الظلام--الدولة' من الدولة متحمس4. وهذا يستنزف فعالية الدولة الأرض، ومن ثم الاسم 'البري استنزاف الدولة'. في حالة الثلاثي، فلوروفوريس لا تنبعث الفوتونات والعينة تظهر باهتة. ومع ذلك، هذه فلوروفوريس ستوتشاستيكالي العودة إلى أرض الدولة ويمكن أن تذهب من خلال عدة فوتون انبعاث انتقالات الحالة متحمس للأرض قبل أن تعود إلى الدولة الثلاثي. مع أقل تلويثاً فلوروفوريس في أي وقت من الأوقات، ينبعث فوتون رشقات نارية من fluorophores الفردية تصبح متميزة مكانياً وزمنياً من المجاورة فلوروفوريس. يمكن احتواء انفجار الفوتونات مع وظيفة غاوسي، centroid المحسوب الذي يتوافق مع موقف فلوروفوري مع دقة ترجمة التي تعتمد على (غ) الفتحة العددية للعدسة، والطول الموجي للضوء المستخدم الإثارة، ومن الأهمية بمكان عدد الفوتونات المنبعثة لكل فلوروفوري. واحد الحد من الديمقراطيين الاشتراكيين أنه، نظراً لمجموعة فرعية فقط من فلوروفوريس بنشاط تنبعث منه في أي وقت، يجب جمع آلاف صور خلال عدة دقائق لبناء خريطة كاملة تعريب. الوقت اكتساب طويلة جنبا إلى جنب مع اشتراط ليزر عالية الطاقة، يعني أن الديمقراطيين الاشتراكيين أكثر ملاءمة لثابت بدلاً من عينات حية.
توضح هذه المقالة، إعداد العينات الثابتة لتصوير مجهرية فائقة القرار بغشاء هيولى (ER)-البروتينات المقيم (للحصول على قائمة من المواد الاستهلاكية الضرورية والمواد الكاشفة انظر الجدول للمواد). أمثلة لكيفية هذا البروتوكول يمكن بسهولة تكييفها لقياس حجم ودرجة تجميع لتر من نوع الجهد-قنوات عن طريق بوابة Ca2 + (Cav1.2) في ساركوليما myocytes القلب، أو المستخدمة لتصور توزيع الخلوية للائحة، وأظهرت. فهم توزيع وتنظيم هذه المكونات الخلوية من الأهمية بمكان فهم الشروع، والترجمة، وفي نهاية المطاف الدالة من كاليفورنيا العديد من2 +-تعتمد الشلالات إرسال الإشارات. على سبيل المثال، Cav1.2 القنوات ذات أهمية أساسية للإثارة-تقلص اقتران, بينما ربما بوساطة مستقبلات Ca2 + الإصدار لائحة تتالي إرسال الإشارات في كل مكان آخر في خلايا الثدييات.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>P250-500</td>
			<td>To clean coverglass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#1.5 coverglass 18 x 18 mm</td>
			<td>Marienfeld Superior</td>
			<td>0107032)</td>
			<td>To grow/process/image cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP3994</td>
			<td>Dilute to 1X with de-ionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td>Aids with cell adhesion to cover glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Aids with cell adhesion to cover glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>11150-059</td>
			<td>Ventricular myocyte culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 11995</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>10437028</td>
			<td>Media supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333</td>
			<td>Media supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-052-CL</td>
			<td>Cell culture solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td>Transient transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca2+-free PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1419-144</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 % Methanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A414-4</td>
			<td>Cell Fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Cell Fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>SLBR6504V</td>
			<td>Cell Fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEAblock</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>37527</td>
			<td>BSA or other blocking solution alternatives exist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X 100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Detergent to permeabilize cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CaV1.2 (FP1)</td>
			<td>Gift</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Commercial anti-CaV1.2 antibodies exist such as Alomone Labs Rb anti-CaV1.2 (ACC-003)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-RFP</td>
			<td>Rockland Inc.</td>
			<td>200-301-379</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 donket anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen (Thermo Scientific)</td>
			<td>A31573</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen (Thermo Scientific)</td>
			<td>A11031</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Prevents microbial growth for long term storage of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C40</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose oxidase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G2133</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6066</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-Mercaptoethylamin hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP2664100</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63689</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-3</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D14-212</td>
			<td>Photoswitching buffer ingredient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Depression slides</td>
			<td>Neolab</td>
			<td>1 &#8211; 6293</td>
			<td>To mount samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Twinsil</td>
			<td>Picodent</td>
			<td>13001000</td>
			<td>To seal coverglass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sec61&#946;-mCherry plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>49155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SR GSD 3D microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Washing block solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>20 % SEAblock in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody incubation solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.5 % Triton-X100, 20 % SEAblock, in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody incubation solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1:1000 in PBS</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ground state depletion super-resolution imaging in mammalian cells

التقدم في علم الأحياء المجهري وخلية الفلورسنت ارتباطاً وثيقا، مع تعزيز القدرة على تصور الأحداث الخلوية التي غالباً ما تؤدي إلى قفزات هائلة في فهمنا لكيفية الخلايا الدالة. تطوير وتوافر مجهرية فائقة القرار وسعت إلى حد كبير حدود الدقة البصرية من ~ 250--20 نانومتر. علماء الأحياء لم تعد تقتصر على وصف التفاعلات الجزيئية من حيث كولوكاليزيشن ضمن منطقة حيود محدودة، بل من الممكن الآن لتصور التفاعلات الدينامية للجزيئات الفردية. هنا، فإننا مخطط بروتوكول للتصور والتقدير الكمي للبروتينات الخلوية باستنزاف الأرض-دولة مجهرية لتصوير الخلية الثابتة. نحن نقدم أمثلة من بروتينات الغشاء مختلفة اثنين، وعنصر ترانسلوكون هيولى، sec61β، والمترجمة بغشاء البلازما عن طريق بوابة الجهد Ca L من نوع2 + قناة (CaV1.2). وناقش مجهر محددة المعالم، أساليب التثبيت، وتبديل الصورة وضع المخزن المؤقت، والمزالق والتحديات لمعالجة الصور.

وكما هو موثق في المقدمة، هناك العديد من دقة فائقة مختلفة مجهرية التصوير الطرائق. ويركز هذا البروتوكول، تصوير فائقة القرار الديمقراطيين الاشتراكيين. وترد في الشكل 2 و الشكل 3الصور التمثيلية وخرائط التعريب.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"...

Watch this Scientific Journal Video about Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells at JoVE.com

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

توضح هذه المقالة بروتوكول للكشف عن واحد أو أكثر من البلازما أو بروتينات الغشاء داخل الخلايا باستخدام مجهرية فائقة القرار استنزاف الدولة الأرض (GSD) في خلايا الثدييات. وهنا، نحن نناقش المنافع والاعتبارات المتعلقة باستخدام هذه النهج للتصور والتقدير الكمي للبروتينات الخلوية.

الدولة الأرض استنفاد القرار فائقة التصوير في خلايا الثدييات

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

التصوير خلايا الثدييات على المدى الطويل باستخدام الميكروسكوب واسعة الميدانية

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

فائقة التصوير القرار من ماكينات شعبة الجرثومي

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Depletion of Ribosomal RNA for Mosquito Gut Metagenomic RNA-seq

استنزاف الحمض النووي الريبي الريباسي لMetagenomic الوتر البعوض RNA-يليها

The mosquito gut accommodates dynamic microbial communities across different stages of the insect's life cycle. Characterization of the genetic capacity ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

عينات الاختبار لتحسين STORM فائقة الدقة المجهر

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

إعداد عينة للفحص المجهري للقوة الذرية Virion واحد والتصوير الفلوري فائقة الدقة

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy (f3D-SIM)

Super-resolution Imaging of the Cytokinetic Z Ring in Live Bacteria Using Fast 3D-Structured Illumination Microscopy f3D-SIM

فائقة الدقة التصوير من Cytokinetic Z الدائري في البكتيريا تعيش طريق سريع منظم 3D الإضاءة المجهري (F3D-SIM)

Imaging of biological samples using fluorescence microscopy has advanced substantially with new technologies to overcome the resolution barrier of the ...

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

Imaging Local Ca2+ Signals in Cultured Mammalian Cells

التصوير المحلية الكالسيوم<sup&gt; 2+</sup&gt; الإشارات في خلايا الثدييات مثقف

Cytosolic Ca2+ ions regulate numerous aspects of cellular activity in almost all cell types, controlling processes as wide-ranging as gene transcription, ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

المصدر المفتوح تحليل واحد الجسيمات لسوبر قرار المجهري مع VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

واجهة المستخدم الرسومية لتتبع بمساعدة برنامج تركيز البروتين في النتوءات الخلوية الديناميكية

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

تطبيق القرار فائقة السرعة سرعة الفحص المجهري في هدب الأولية الحية

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...