Name: intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease
Uploaded: 2017-08-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease at JoVE.com

इस काम को और अधिक द्वारा समर्थित किया गया था-Kröner-Stiftung और DFG (ड्यूश Forschungsgemeinschaft, जर्मन रिसर्च फाउंडेशन) SFB ८५४ (Sonderforschungsbereich, सहयोगी अनुसंधान केंद्र) । हंस के लिए विशेष धंयवाद-Holger Gärtner, Audiovisuelles Medienzentrum, ओटो-वॉन-Guericke विश्वविद्यालय मैगडेबर्ग, मैगडेबर्ग, जर्मनी, तकनीकी सहायता के लिए ।

हमारा अध्ययन पशु संरक्षण के लिए जर्मन कानून की धारा 8 के अनुसार Saxony-Anhalt, Landesverwaltungsamt हाले के राज्य की अनुमति के साथ किया गया था । (& #167; 8, 18.05.2016-BGBI से पशु संरक्षण के लिए जर्मन विधि का पैरा 1 । I S. १२०६, १३१३, & #167; 31 TierSchVersV से 13.08...

<ol>
	<li>Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pluripotent+stem+cells+for+vascular+therapy.">Development of pluripotent stem cells for vascular therapy.</a> Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).</li><li>Henry, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VIVA+trial:+Vascular+endothelial+growth+factor+in+Ischemia+for+Vascular+Angiogenesis.">The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis.</a> Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+intravenous+injection+of+murine+bone+marrow+derived+monocytes.">Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocytes:+a+novel+strategy+for+in+vivo+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth.</a> Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).</li><li>Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+but+not+collateral+growth+is+associated+with+ischemia+after+femoral+artery+occlusion.">Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion.</a> The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetanus+toxoid-pulsed+monocyte+vaccination+for+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611 (2014).</li><li>. Matrigel Matrix Available from: <a target="_blank" href="https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html">https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html</a> (2017)</li><li>Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolin-1+knockout+mice+show+an+impaired+angiogenic+response+to+exogenous+stimuli.">Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli.</a> The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).</li><li>Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+bone+marrow+derived+monocytes:+a+novel+approach+for+augmentation+of+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+femoral+artery+ligation.">Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation.</a> American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).</li><li>Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. o. A., Brouckaert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+and+purification+of+mouse+peripheral+blood+monocytes.">A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes.</a> J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).</li><li>Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+monocytes+by+Ficoll+density+gradient+centrifugation.">Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation.</a> Blut. 43 (6), 367-371 (1981).</li></ol>

यहां वर्णित विधि संपार्श्विक धमनियों के विकास पर प्रकाश डालता है, इन जहाजों में monocytes के व्यवहार, और arteriogenesis की प्रक्रिया । इस प्रोटोकॉल को लागू करने के लिए कदम जानने के लिए आसान कर रहे है और विज्ञान के अंय क?...

हृदय रोगों, कोरोनरी हृदय रोग या परिधीय धमनी रोग सहित, मौत का सबसे आम कारण दुनिया भर में1हैं । सेल थेरेपी विशेष रूप से लोगों को जो शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप से गुजरना करने में सक्षम नहीं हैं के लिए हृदय रोग का इलाज करने के लिए एक आशाजनक दृष्टिकोण है । एक चिकित्सीय उपकरण के रूप में कोशिकाओं या उनके स्रावित पदार्थों का उपयोग करने के लिए कई दृष्टिकोण हैं2,3, छिड़काव में सुधार लाने और कोरोनरी और underperfused ऊतक के समारोह को बनाए रखने के लिए समग्र लक्ष्य के साथ. इस लक्ष्य को प्राप्त करने का एक प्रयास arteriogenesis को बेहतर बनाना है, जो संपार्श्विक धमनियों के विकास को बढ़ाता है । Monocytes collateralization के साथ संबद्ध एक महत्वपूर्ण कक्ष प्रकार हैं । हमारे समूह सूजन4,5के क्षेत्रों में monocytes के प्रभाव पर शोध पर ध्यान केंद्रित किया है, विशेष रूप से hindlimb ischemia मॉडल का उपयोग करने के ischemia और बाद में सूजन6प्रेरित करते हैं । सूजन के क्षेत्रों के लिए घर Monocytes और जटिल प्रणालीगत प्रतिक्रियाओं का कारण है कि collateralization के विकास के लिए नेतृत्व7।
intravital माइक्रोस्कोपी के उपयोग के साथ, हम vivo में इन कोशिकाओं के व्यवहार का अध्ययन और सूजन के क्षेत्रों के लिए इंजेक्शन monocytes के डाक का निरीक्षण कर सकते हैं । सबसे पूर्व अध्ययन केवल पोस्ट मार्टम विश्लेषण, जो ऊतकीय कलाकृतियों और जानवरों की बड़ी संख्या की तैयारी के लिए आवश्यक की एक परिचय सहित नुकसान पकड़ का वर्णन । हमारे दृष्टिकोण के साथ, हम एकाधिक समय बिंदुओं पर लाइव इमेजिंग के माध्यम से प्रतिरक्षा प्रक्रियाओं और संपार्श्विक गठन की जांच कर सकते हैं ।
कोरोनरी क्षेत्रों में संपार्श्विक धमनियों के विकास के अलावा, monocytes भी ट्यूमर के विकास को प्रभावित । इन प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए, हम एक तहखाने झिल्ली की तरह Engelbreth-होल्म-झुंड माउस सार्कोमा, एक extracellular मैट्रिक्स प्रोटीन में अमीर ट्यूमर से निकाले गए सुई इंजेक्षन8, और intravital माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर विश्लेषण । इस मैट्रिक्स या तो endothelial सेल नेटवर्क के गठन या विरोधी angiogenic अवरोध के माध्यम से कैंसर के उपचारों के लिए परीक्षण अणुओं स्क्रीन करने के लिए प्रयोग किया जाता है; इस मामले में, हम सेल थेरेपी9,10,11के लिए monocytes के ट्यूमर angiogenic क्षमता का आकलन करेंगे ।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य एक आसान और कारगर तरीका प्रतिरक्षा एक vivo में मॉडल में ischemia की वजह से प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए प्रदर्शन है । हम पोस्ट मार्टम मांसपेशी ऊतक के ऊतकीय workup की तुलना में एक अधिक यथार्थवादी परीक्षण वातावरण उत्पन्न कर सकते हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1433">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">10% fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:495px;">Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:456px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1% penicillin/streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1mL Omnifix -F insuline syringe</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml syringe&#160;</td>
			<td>Fresenius Kabi AG, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Injectomat- syringe 50 ml with canule</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well-ultra-low-attachement-plates</td>
			<td>Corning Incorporated, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">8- 12 week old, male, C57BL/6, BalbC mice&#160;</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adhesive tape</td>
			<td>TESA SE, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition Software</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF); Version: 2.7.3.9723</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Canules</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>29G, 30G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture dish</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture medium</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Medium199, 10% Fetal calf serum, 1% Antibiotic (penicillin/streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Allegra X-15R centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Depilatory cream</td>
			<td>Veet, Mannheim, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DiO</td>
			<td>Invitrogen Eugene, Oregon, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disinfection agent</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scalpel No.10&#160;</td>
			<td>Feather safety razor Co.Ltd, Osaka, Japan&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Erlenmeyer flask</td>
			<td>GVB, Herzogenrath, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 70%</td>
			<td>Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbr&#252;cken, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine Forceps</td>
			<td>Rubis, Stabio, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flurophor/Rhodamindextran</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA USA</td>
			<td>Katalognummer: D-1819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gloves</td>
			<td>R&#246;sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating pad&#160;</td>
			<td>Labotect GmbH, G&#246;ttingen, Germany&#160;</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hot Plate 062</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human macrophage-colony stimulating factor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td>SRP3110&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humane leucocyte filters</td>
			<td>Blood preservation</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator</td>
			<td>Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Baxter Deutschland GmbH, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (10%)</td>
			<td>Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Berlin , Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leukocyte separation tubes (tubes with filter)&#160;</td>
			<td>Bio one GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Axiovert 40 C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lymphocyte separation medium LSM1077</td>
			<td>GE Healthcare, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium M199&#160;</td>
			<td>PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microbiological work bench</td>
			<td>Thermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hera safe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope slide</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe</td>
			<td>Art. Nr. 1879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope stand with incubator and heating unit</td>
			<td>&#160;Leica DMI 6000, Pecon, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monocyte wash buffer</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>PBS, 0,5% BSA, 2mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse restrainer</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multi-photon microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica SP5 Confocal microscope, Cameleon, Coherent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (0,9%)</td>
			<td>Berlin Chemie AG, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber&#160;</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica HC PL APO 10x/0.4 CS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>ph 7,4 sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>90 % Percoll, 10% 1,5M NaCl, &#961;= 1,064 g cm-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll solution</td>
			<td>GE Healthcare, Bio-Science AB, Uppsala, Sweden</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>10&#181;L/100&#181;L/200&#181;L/1000&#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes serological</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>&#160;Cellstar2ml, 5ml, 10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetting heads</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetus</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polystyrol tube</td>
			<td>Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scissor</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td>Mettler PM4800 Delta Range, Mettler-Toledo GmbH, Gie&#223;en, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suction unit</td>
			<td>Integra bioscience, Fernwald, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Vacusafe comfort</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue solution 0,4 %</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tubes with cap</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>15ml, 50ml Cellstar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (2 %)</td>
			<td>Ceva Tiergesundheit GmbH, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease

परिधीय धमनी रोग और कोरोनरी हृदय रोग के लिए चिकित्सीय लक्ष्य hemodynamic रोग की वजह से कोरोनरी क्षेत्रों के लिए रक्त के प्रवाह में वृद्धि करने के लिए है । संवहनी सर्जरी चयनित मामलों में एक व्यवहार्य विकल्प है, लेकिन सर्जरी के लिए संकेत के बिना रोगियों के लिए इस तरह की प्रगति के लिए आराम दर्द, महत्वपूर्ण अंग ischemia, या जीवन या काम करने के लिए प्रमुख व्यवधान, वहां उनकी बीमारी को कम करने के लिए कुछ संभावनाएं हैं । monocyte के माध्यम से सेल थेरेपी-संपार्श्विक गठन की उत्तेजना के माध्यम से बढ़ाया छिड़काव कुछ गैर इनवेसिव विकल्पों में से एक है ।
हमारे समूह hindlimb ischemia मॉडल का उपयोग चूहों में monocyte प्रत्यारोपण के बाद arteriogenesis की जांच करता है । पहले, हम hindlimb छिड़काव में सुधार का प्रदर्शन किया है टिटनेस का उपयोग-उत्तेजित syngeneic monocyte ट्रांसप्लांटेशन । संपार्श्विक गठन पर प्रभाव के अलावा, ट्यूमर के विकास के रूप में अच्छी तरह से इस चिकित्सा से प्रभावित हो सकता है । इन प्रभावों की जांच करने के लिए, हम माउस के पार्श्व में Engelbreth-होल्म-झुंड सार्कोमा के extracellular मैट्रिक्स इंजेक्शन द्वारा एक तहखाने झिल्ली की तरह मैट्रिक्स माउस मॉडल का उपयोग करें, रोड़ा धमनी के ऊरु के बाद ।
कृत्रिम ट्यूमर अध्ययन के बाद, हम intravital माइक्रोस्कोपी का उपयोग करने के लिए जमानती धमनियों के भीतर vivo ट्यूमर-angiogenesis और monocyte डाक में अध्ययन. पिछले अध्ययनों ने पशु मॉडलों की ऊतकीय परीक्षा का वर्णन किया है, जो पोस्टमार्टम कलाकृतियों को बाद में विश्लेषण की कल्पना करते हैं. हमारे दृष्टिकोण वास्तविक समय अनुक्रम में collateralization के क्षेत्रों के लिए monocyte डाक visualizes, प्रदर्शन करने के लिए आसान है, और vivo मेंarteriogenesis और ट्यूमर angiogenesis की प्रक्रिया की जांच ।

monocytes द्वारा ट्रिगर ट्यूमर और संपार्श्विक पोत विकास की परीक्षा के लिए Intravital माइक्रोस्कोपी ट्यूमर angiogenesis और arteriogenesis के आणविक तंत्र में नए पहलुओं को प्रकट करने में मदद कर सकते हैं । कोशिकाओं और तैय?...

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Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Monocytes परिधीय धमनी रोग के संदर्भ में arteriogenesis के महत्वपूर्ण मध्यस्थ हैं । एक तहखाने झिल्ली की तरह मैट्रिक्स और intravital माइक्रोस्कोपी का प्रयोग, इस प्रोटोकॉल monocyte धमनी ऊरु बंधाव मॉडल में murine इंजेक्शन के बाद monocyte डाक और ट्यूमर से संबंधित angiogenesis की जांच ।

परिधीय धमनी रोग के एक Murine मॉडल में Monocyte डाक और ट्यूमर से संबंधित Angiogenesis की Intravital माइक्रोस्कोपी

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Hello, my name is Christian Deffge. I'm a medical doctor at university hospital in Magdeburg and I'm working in the cardiovascular research group of Dr.Herold and Professor Braun-Dullaeus. We investigate the augmentation of collateral growth.Therefore, we use imaging. In this video, we want to explain our methods. Resuspend the cells in serum-free culture medium with a density of one times 10 to the sixth cells per milliliter.Add five microliters of one millimolar DIO and dimethylformamide to one milliliter of the cell suspension and resuspend carefully. Incubate the cell solution at 37 degrees Centigrade for 20 minutes. Centrifugate the cells at 500 g for five minutes.Dislodge the supernatant and resuspend the cells with 37 degrees Centigrade warm FCS supplemented medium. Repeat this step twice. Count the cells with the help of a Neubauer counting chamber and light microscopy.Resuspend the cells with sodium chloride solution. Inject the cells into the tail vein. Matrigel matrix is a reconstituted basement membrane preparation extracted from the squamous sarcoma.It screens test molecules for either endothelial cell network formation or anti-cancer therapies through angiogenic inhibition. Reassess the tumor angiogenic potential of monocytes we strive to use for cell therapy. Add 100 nanogram BFGF, 300 nanogram VEGFA and 26 international units heparin under sterile conditions to the Matrigel.After vortexing the solution, fill it up into one milliliter insulin syringe and store on ice until usage. For better visibility of the subcutaneous Matrigel plaque, shave the skin of the mouse at the injection site. You can use a sharp scalpel or depilatory cream.Lay the animal on the table and hold the skin of the mouse next to the injection site on the flank. Inject 500 microliters of Matrigel subcutaneously. For practical reasons, it is necessary to inject the Matrigel compactly at one location to avoid subcutaneous dispersion.It will be easier to dislodge the Matrigel matrix from the tissue after sacrificing the mouse at the end of the experiment. Practice the monocyte injection with sodium chloride solution before experimentation. If the monocytes cannot be applied systemically, there will be no systemic effect.Within this protocol, we injected 2.5 million monocytes. Try to inject no more than five microliters per gram. Make sure the mouse is warmed with the help of a heating pad while the whole procedure.For systemic application of the cells, you will need a restrainer and one milliliter insulin syringe, a 30 g needle and the monocytes resuspended and sodium chloride solution. Carefully handle the mouse and restrain the animal in the restrainer. Make sure the mouse is not harmed and has adequate space for breathing.Put the restrainer on the heating pad so that the tail can contact the plate. Make sure you disinfect the injection site to avoid an infection. Identify the tail veins which are located on the lateral side of the tail.Turn the tail 90 degrees so the tail vein appears on the upper side of the tail. Try to inject the monocyte solution in a flat angle. Observe the animal for 30 minutes to look for systemic side effects.Place the mouse in its cage after the animal has fully recovered. Place the anesthetized mouse on the prewarmed microscope stage after the microscope has reached stable conditions and the settings have been tested by a dummy. Fix the paws with adhesive tape.Disinfect the skin at the site of the leg or flank that is used for microscopy. Shave the region of interest for better handling and to avoid interference with hair. Keep the region of interest moist.Otherwise, the quality of images and tissue will be compromised. Place the leg between two adjustable stems. Position a cover glass on top of the stems.Start the microscopy and adjust the position of the leg if needed. Microscope settings depend on the software that is used. Please see the protocol for further information.Our data demonstrates that intravital microscopy represents a potent tool for visualization of transplanted monocytes within the blood flow in small animal models. The monocytes must be injected into the venous system to maintain systemic effects and to avoid emboli which can occur if the injection is conducted in the arterial system. If Matrigel is used, injecting slowly to avoid dispersion will help with plaque explantation for further histological examination.Within the Matrigel plaque, we are able to measure vascularization by counting capillaries within different experimental settings. Intravital microscopy findings can be verified by histological examination. We are able to find monocytes detected by intravital microscopy within all tissue sections.If much time is required for the acquisition of images, the amount of rhodamine dextran within the vessel decreases. For better visibility of the vessels, the application of the rhodamine dextran must be repeated. The use of positive probes for cells on Matrigel can help obtain optimal settings.The goal for peripheral arterial disease or ischemic heart disease therapeutics is to increase blood flow to other perfused areas caused by hemodynamic stenosis. Cell therapy via monocyte-enhanced perfusion through the stimulation of collateral formation is a noninvasive option for patients without indications for surgery. In addition to the development of collateral arteries in ischemic areas, monocytes can also influence the growth of tumors.To investigate these processes, we use Matrigel injection in connection with intravital microscopy. Our aim with this protocol is to demonstrate an easy and efficient way to study immunological processes caused by ischemia in an in vivo model. With this new method, we are able to generate a more realistic test environment compared to histological workup of postmortem muscle tissue.

Research

JoVE Journal

Medicine

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

सोडियम Hyaluronate के subretinal इंजेक्शन द्वारा कृंतक में रेटिना टुकड़ी मॉडल

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

धमनी restenosis के एक murine मॉडल: ऊरु वायर चोट के तकनीकी पहलुओं

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

एक murine मॉडल में अधोमूत्र पिंडीय उदर महाधमनी clamping द्वारा प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य धमनी अनाच्छादन चोट

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Intravital माइक्रोस्कोपी और एक हेयरलैस माउस के कान के सिरे में thrombus प्रेरण

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

अल्ट्रासाउंड निर्देशित Intracardiac इंजेक्शन मानव Mesenchymal स्टेम कोशिकाओं प्रयोगात्मक सूजन आंत्र रोगों के Murine मॉडल में उपयोग के लिए आंत को डाक बढ़ाने के लिए

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

लाइट शीट माइक्रोस्कोपी द्वारा फुलमिंटेंट माईकार्डाइटिस के मरीन मॉडल में ल्यूकोसाइट फैलाने का मात्रात्मक विज़ुअलाइज़ेशन

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

माउस के Isometric सिकुड़ना माप Mesenteric धमनी का उपयोग तार Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

फेफड़ों के उन्नत इमेजिंग के एक प्रयोगात्मक में एक प्रायोगिक में मानव लिम्फोसाइटों पर आधारित एलर्जी सूजन के प्रकाश शीट माइक्रोस्कोपी के आधार पर

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

हिंडलिम्ब इस्किमिया के एक Murine मॉडल में चिकित्सीय एंजियोजेनेसिस का आकलन

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

कोरोनरी एंजियोजेनेसिस के विट्रो मॉडल में

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...