Name: intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease
Uploaded: 2017-08-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease at JoVE.com

Эта работа была поддержана ELSE-Kröner-Stiftung и DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft, Немецкий исследовательский фонд) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, совместный исследовательский центр). Особая благодарность Ханс-Хольгер Гёртнер, Audiovisuelles Medienzentrum, Otto-von-Guericke университет Магдебург, Магдебург, Германия, для технической поддержки.

наше исследование проводилось с разрешения государства, Landesverwaltungsamt Галле, Саксония-Анхальт согласно разделу 8 немецкого закона о защите животных. (§ 8, пункте 1 немецкого права для защиты животных от 18.05.2016 - BGBI. I S. 1206, 1313, § 31 TierSchVersV от 13.08.2013).
 Примечание: для эксперимент...

<ol>
	<li>Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pluripotent+stem+cells+for+vascular+therapy.">Development of pluripotent stem cells for vascular therapy.</a> Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).</li><li>Henry, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VIVA+trial:+Vascular+endothelial+growth+factor+in+Ischemia+for+Vascular+Angiogenesis.">The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis.</a> Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+intravenous+injection+of+murine+bone+marrow+derived+monocytes.">Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocytes:+a+novel+strategy+for+in+vivo+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth.</a> Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).</li><li>Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+but+not+collateral+growth+is+associated+with+ischemia+after+femoral+artery+occlusion.">Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion.</a> The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetanus+toxoid-pulsed+monocyte+vaccination+for+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611 (2014).</li><li>. Matrigel Matrix Available from: <a target="_blank" href="https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html">https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html</a> (2017)</li><li>Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-CSF+induces+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+angiogenic+activity+from+human+monocytes.">M-CSF induces vascular endothelial growth factor production and angiogenic activity from human monocytes.</a> Journal of immunology (Baltimore, Md. 1950). 171 (5), 2637-2643 (2003).</li><li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel.">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).</li><li>Woodman, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolin-1+knockout+mice+show+an+impaired+angiogenic+response+to+exogenous+stimuli.">Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli.</a> The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).</li><li>Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+bone+marrow+derived+monocytes:+a+novel+approach+for+augmentation+of+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+femoral+artery+ligation.">Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation.</a> American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).</li><li>Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. o. A., Brouckaert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+and+purification+of+mouse+peripheral+blood+monocytes.">A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes.</a> J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).</li><li>Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+monocytes+by+Ficoll+density+gradient+centrifugation.">Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation.</a> Blut. 43 (6), 367-371 (1981).</li></ol>

Метод, описанный здесь проливает свет на развитие залога артерий, поведение моноцитов в этих судов и процесс arteriogenesis. Шаги для применения этого протокола, легко учиться и может использоваться в других областях науки. Несмотря на эти преимущества есть некоторые недостатки. К примеру мик...

Сердечно-сосудистые заболевания, в том числе ишемической болезни сердца или болезнь периферических артерий, являются наиболее распространенными причинами смерти во всем мире1. Клеточная терапия-это перспективный подход для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, особенно для людей, которые не могут пройти хирургических вмешательств. Существует несколько подходов для использования ячеек или их выделяется веществ как терапевтическое средство2,3, с учетом общей цели улучшения перфузии и поддерживать функции ишемического и underperfused ткани. Одна попытка достичь этой цели – улучшить arteriogenesis, который стимулирует развитие залога артерий. Моноциты являются важным ячейки тип, связанный с обеспечение. Наша группа была сосредоточена на изучение последствий моноцитов в области воспаления4,5, в частности с помощью модели ишемии задних конечностей вызывают ишемию и последующего воспаление6. Моноциты дома в области воспаления и вызвать сложные системные ответы, которые приводят к развитию обеспечение7.
С использованием прижизненной микроскопии мы можем изучить поведение этих клеток в естественных условиях и наблюдать самонаведения вводят моноцитов в области воспаления. Большинство бывших исследования только описывают посмертное анализов, которые держат недостатки, включая введение гистологические артефакты и большое количество животных, необходимых для подготовки. С нашим подходом мы можем исследовать иммунологических процессов и обеспечения формирования через жить изображений в нескольких точках времени.
Помимо разработки сопутствующего артерий в ишемических зонах моноцитов также влияют на рост опухоли. Для расследования этих процессов, мы придать базальной мембраны как матрица, извлеченные из Engelbreth-холм-Рой мыши саркомы, опухоли богаты белков внеклеточного матрикса8и анализировать с помощью прижизненной микроскопии. Эта матрица используется для экрана теста молекул для формирования сети эндотелиальных клеток или противораковых терапий путем ингибирования ангиогенных; в этом случае мы будем оценивать потенциал ангиогенных опухоли моноцитов клетки терапии9,10,11.
Цель настоящего Протокола заключается в демонстрации простой и эффективный способ изучения иммунологических процессов, вызванных ишемии в модели в естественных условиях . Мы можем создавать более реалистичные тестовой среде по сравнению с гистологическим реакционной посмертное мышечной ткани.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1433">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">10% fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:495px;">Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:456px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1% penicillin/streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1mL Omnifix -F insuline syringe</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml syringe&#160;</td>
			<td>Fresenius Kabi AG, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Injectomat- syringe 50 ml with canule</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well-ultra-low-attachement-plates</td>
			<td>Corning Incorporated, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">8- 12 week old, male, C57BL/6, BalbC mice&#160;</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adhesive tape</td>
			<td>TESA SE, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition Software</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF); Version: 2.7.3.9723</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Canules</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>29G, 30G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture dish</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture medium</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Medium199, 10% Fetal calf serum, 1% Antibiotic (penicillin/streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Allegra X-15R centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Depilatory cream</td>
			<td>Veet, Mannheim, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DiO</td>
			<td>Invitrogen Eugene, Oregon, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disinfection agent</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scalpel No.10&#160;</td>
			<td>Feather safety razor Co.Ltd, Osaka, Japan&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Erlenmeyer flask</td>
			<td>GVB, Herzogenrath, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 70%</td>
			<td>Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbr&#252;cken, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine Forceps</td>
			<td>Rubis, Stabio, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flurophor/Rhodamindextran</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA USA</td>
			<td>Katalognummer: D-1819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gloves</td>
			<td>R&#246;sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating pad&#160;</td>
			<td>Labotect GmbH, G&#246;ttingen, Germany&#160;</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hot Plate 062</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human macrophage-colony stimulating factor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td>SRP3110&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humane leucocyte filters</td>
			<td>Blood preservation</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator</td>
			<td>Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Baxter Deutschland GmbH, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (10%)</td>
			<td>Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Berlin , Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leukocyte separation tubes (tubes with filter)&#160;</td>
			<td>Bio one GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Axiovert 40 C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lymphocyte separation medium LSM1077</td>
			<td>GE Healthcare, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium M199&#160;</td>
			<td>PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microbiological work bench</td>
			<td>Thermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hera safe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope slide</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe</td>
			<td>Art. Nr. 1879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope stand with incubator and heating unit</td>
			<td>&#160;Leica DMI 6000, Pecon, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monocyte wash buffer</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>PBS, 0,5% BSA, 2mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse restrainer</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multi-photon microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica SP5 Confocal microscope, Cameleon, Coherent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (0,9%)</td>
			<td>Berlin Chemie AG, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber&#160;</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica HC PL APO 10x/0.4 CS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>ph 7,4 sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>90 % Percoll, 10% 1,5M NaCl, &#961;= 1,064 g cm-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll solution</td>
			<td>GE Healthcare, Bio-Science AB, Uppsala, Sweden</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>10&#181;L/100&#181;L/200&#181;L/1000&#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes serological</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>&#160;Cellstar2ml, 5ml, 10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetting heads</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetus</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polystyrol tube</td>
			<td>Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scissor</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td>Mettler PM4800 Delta Range, Mettler-Toledo GmbH, Gie&#223;en, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suction unit</td>
			<td>Integra bioscience, Fernwald, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Vacusafe comfort</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue solution 0,4 %</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tubes with cap</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>15ml, 50ml Cellstar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (2 %)</td>
			<td>Ceva Tiergesundheit GmbH, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease

Терапевтические цель для периферической артериальной болезни и ишемической болезни сердца является увеличить приток крови к ишемической районах, вызванные гемодинамики стенозом. Сосудистая хирургия является жизнеспособным вариантом в отдельных случаях, но для пациентов без показания для операции, такие как прогрессии для отдыха боль, ишемии нижних конечностей или крупных срывов для жизни и работы, существует несколько возможностей для смягчения их болезни. Клеточная терапия через Моноцит повышенной перфузии путем стимулирования обеспечения формирования является одним из нескольких неинвазивные вариантов.
Наша группа рассматривает arteriogenesis после трансплантации Моноцит в мышей, с использованием модели ишемии задних конечностей. Ранее мы продемонстрировали улучшение перфузии задних конечностей с использованием столбняка стимулирует сингенных Моноцит трансплантации. Помимо последствий для обеспечения формирования роста опухоли могут быть затронуты этой терапии. Расследовать эти эффекты, мы используем базальной мембраны как матричная модель мыши путем впрыскивать внеклеточного матрикса саркомы Engelbreth-холм-Рой в бочку мыши, после окклюзии бедренной артерии.
После исследования искусственных опухоли мы используем прижизненной микроскопии для изучения в vivo опухоли ангиогенеза и Моноцит самонаведения в залог артерий. Предыдущие исследования описал гистологическом Животные модели, которая предполагает последующий анализ в посмертный артефактов. Наш подход визуализирует Моноцит самонаведения районы обеспечение в режиме реального времени последовательностей, легко выполнить и исследует процесс arteriogenesis и опухоли ангиогенеза в естественных условиях.

Прижизненной микроскопии для изучения опухоли и залога судов роста, вызванного моноцитов может помочь выявить новые аспекты в молекулярных механизмах по ангиогенез опухоли и arteriogenesis. Клетки должны быть подготовлены и вводили, тщательно с использованием действия про...

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease at JoVE.com

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Моноциты являются важными посредниками arteriogenesis в контексте болезнь периферических артерий. С помощью базальной мембраны как матрица и прижизненной микроскопии, этот протокол расследует Моноцит самонаведения и связанных с ними опухоли ангиогенеза после инъекции Моноцит в бедренной артерии лигирование мышиных модели.

Прижизненной микроскопии Моноцит самонаведения и связанных с опухоли ангиогенеза в мышиных модели болезнь периферических артерий

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Hello, my name is Christian Deffge. I'm a medical doctor at university hospital in Magdeburg and I'm working in the cardiovascular research group of Dr.Herold and Professor Braun-Dullaeus. We investigate the augmentation of collateral growth.Therefore, we use imaging. In this video, we want to explain our methods. Resuspend the cells in serum-free culture medium with a density of one times 10 to the sixth cells per milliliter.Add five microliters of one millimolar DIO and dimethylformamide to one milliliter of the cell suspension and resuspend carefully. Incubate the cell solution at 37 degrees Centigrade for 20 minutes. Centrifugate the cells at 500 g for five minutes.Dislodge the supernatant and resuspend the cells with 37 degrees Centigrade warm FCS supplemented medium. Repeat this step twice. Count the cells with the help of a Neubauer counting chamber and light microscopy.Resuspend the cells with sodium chloride solution. Inject the cells into the tail vein. Matrigel matrix is a reconstituted basement membrane preparation extracted from the squamous sarcoma.It screens test molecules for either endothelial cell network formation or anti-cancer therapies through angiogenic inhibition. Reassess the tumor angiogenic potential of monocytes we strive to use for cell therapy. Add 100 nanogram BFGF, 300 nanogram VEGFA and 26 international units heparin under sterile conditions to the Matrigel.After vortexing the solution, fill it up into one milliliter insulin syringe and store on ice until usage. For better visibility of the subcutaneous Matrigel plaque, shave the skin of the mouse at the injection site. You can use a sharp scalpel or depilatory cream.Lay the animal on the table and hold the skin of the mouse next to the injection site on the flank. Inject 500 microliters of Matrigel subcutaneously. For practical reasons, it is necessary to inject the Matrigel compactly at one location to avoid subcutaneous dispersion.It will be easier to dislodge the Matrigel matrix from the tissue after sacrificing the mouse at the end of the experiment. Practice the monocyte injection with sodium chloride solution before experimentation. If the monocytes cannot be applied systemically, there will be no systemic effect.Within this protocol, we injected 2.5 million monocytes. Try to inject no more than five microliters per gram. Make sure the mouse is warmed with the help of a heating pad while the whole procedure.For systemic application of the cells, you will need a restrainer and one milliliter insulin syringe, a 30 g needle and the monocytes resuspended and sodium chloride solution. Carefully handle the mouse and restrain the animal in the restrainer. Make sure the mouse is not harmed and has adequate space for breathing.Put the restrainer on the heating pad so that the tail can contact the plate. Make sure you disinfect the injection site to avoid an infection. Identify the tail veins which are located on the lateral side of the tail.Turn the tail 90 degrees so the tail vein appears on the upper side of the tail. Try to inject the monocyte solution in a flat angle. Observe the animal for 30 minutes to look for systemic side effects.Place the mouse in its cage after the animal has fully recovered. Place the anesthetized mouse on the prewarmed microscope stage after the microscope has reached stable conditions and the settings have been tested by a dummy. Fix the paws with adhesive tape.Disinfect the skin at the site of the leg or flank that is used for microscopy. Shave the region of interest for better handling and to avoid interference with hair. Keep the region of interest moist.Otherwise, the quality of images and tissue will be compromised. Place the leg between two adjustable stems. Position a cover glass on top of the stems.Start the microscopy and adjust the position of the leg if needed. Microscope settings depend on the software that is used. Please see the protocol for further information.Our data demonstrates that intravital microscopy represents a potent tool for visualization of transplanted monocytes within the blood flow in small animal models. The monocytes must be injected into the venous system to maintain systemic effects and to avoid emboli which can occur if the injection is conducted in the arterial system. If Matrigel is used, injecting slowly to avoid dispersion will help with plaque explantation for further histological examination.Within the Matrigel plaque, we are able to measure vascularization by counting capillaries within different experimental settings. Intravital microscopy findings can be verified by histological examination. We are able to find monocytes detected by intravital microscopy within all tissue sections.If much time is required for the acquisition of images, the amount of rhodamine dextran within the vessel decreases. For better visibility of the vessels, the application of the rhodamine dextran must be repeated. The use of positive probes for cells on Matrigel can help obtain optimal settings.The goal for peripheral arterial disease or ischemic heart disease therapeutics is to increase blood flow to other perfused areas caused by hemodynamic stenosis. Cell therapy via monocyte-enhanced perfusion through the stimulation of collateral formation is a noninvasive option for patients without indications for surgery. In addition to the development of collateral arteries in ischemic areas, monocytes can also influence the growth of tumors.To investigate these processes, we use Matrigel injection in connection with intravital microscopy. Our aim with this protocol is to demonstrate an easy and efficient way to study immunological processes caused by ischemia in an in vivo model. With this new method, we are able to generate a more realistic test environment compared to histological workup of postmortem muscle tissue.

Research

JoVE Journal

Medicine

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Отслойки Модель в Грызуны по субретинальной инжекции гиалуронат натрия

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Мышиной модели артериальный рестеноз: Технические аспекты бедренной Wire травмы

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

Возпроизводимо Артериальная Денудация Травма от ИНФРАРЕНАЛЬНОГО брюшного отдела аорты зажимное в мышиной модели

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Прижизненные микроскопии и Тромб индукция в мочке из безволосой мыши

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

УЗИ руководствуясь внутрисердечной введения мезенхимальных стволовых клеток человека увеличить самонаведения для кишечника для использования в мышиных моделях экспериментальных воспалительные заболевания кишечника

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Количественная визуализация инфильтрата лейкоцитов в мышиной модели фульминантного миокардита методом микроскопии легких листов

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Расширенный визуализации легких самонаведения человека лимфоцитов в экспериментальной модели Vivo аллергические воспаления, основанный на свет лист микроскопия

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Оценка терапевтического ангиогенеза в модели Murine Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

В vitro Модель коронарного ангиогенеза

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...