Name: comprehensive protocol to sample and process bone marrow for measuring measurable residual disease and leukemic stem cells in acute myeloid leukemia
Uploaded: 2018-03-05T12:30:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia at JoVE.c

מחקר זה היא נתמכה על ידי החברה לסרטן הולנדי (2013 הפאק הלאומי-6371) וקרן Egbers עבור VONK. אנו מודים קבוצת העבודה AML הולנדי-MRD בזכות שיתוף הפעולה ועל דיונים פוריים שיפור מתמשך, סטנדרטיזציה של AML-MRD.

<ol>
	<li>D&#246;hner, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+AML+in+adults:+2017+ELN+recommendations+from+an+international+expert+panel.">Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel.</a> Blood. 129 (4), 424-447 (2017).</li><li>Zwaan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaborative+Efforts+Driving+Progress+in+Pediatric+Acute+Myeloid+Leukemia.">Collaborative Efforts Driving Progress in Pediatric Acute Myeloid Leukemia.</a> J Clin Oncol. 33 (27), 2949-2962 (2015).</li><li>Cornelissen, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+European+LeukemiaNet+AML+Working+Party+consensus+statement+on+allogeneic+HSCT+for+patients+with+AML+in+remission:+an+integrated-risk+adapted+approach.">The European LeukemiaNet AML Working Party consensus statement on allogeneic HSCT for patients with AML in remission: an integrated-risk adapted approach.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (10), 579-590 (2012).</li><li>Grimwade, D., Freeman, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+minimal+residual+disease+in+acute+myeloid+leukemia:+which+platforms+are+ready+for+&amp;#34;prime+time&amp;#34;?.">Defining minimal residual disease in acute myeloid leukemia: which platforms are ready for &amp;#34;prime time&amp;#34;?.</a> Hematology. 2014 (1), 222-233 (2014).</li><li>Kr&#246;nke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+minimal+residual+disease+in+NPM1-mutated+acute+myeloid+leukemia:+a+study+from+the+German-Austrian+acute+myeloid+leukemia+study+group.">Monitoring of minimal residual disease in NPM1-mutated acute myeloid leukemia: a study from the German-Austrian acute myeloid leukemia study group.</a> J Clin Oncol. 29 (19), 2709-2716 (2011).</li><li>Terwijn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prognostic+impact+of+flow+cytometric+minimal+residual+disease+detection+in+acute+myeloid+leukemia:+data+from+the+HOVON/SAKK+AML+42A+study.">High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: data from the HOVON/SAKK AML 42A study.</a> J Clin Oncol. 31 (31), 3889-3897 (2013).</li><li>van der Velden, V. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+of+flowcytometric+minimal+residual+disease+detection+in+pediatric+acute+myeloid+leukemia+patients+treated+according+to+the+DCOG+ANLL97/MRC+AML12+protocol.">Clinical significance of flowcytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to the DCOG ANLL97/MRC AML12 protocol.</a> Leukemia. 24 (9), 1599-1606 (2010).</li><li>Ossenkoppele, G., Schuurhuis, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRD+in+AML:+time+for+redefinition+of+CR?.">MRD in AML: time for redefinition of CR?.</a> Blood. 121 (12), 2166-2168 (2013).</li><li>Feller, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRD+parameters+using+immunophenotypic+detection+methods+are+highly+reliable+in+predicting+survival+in+acute+myeloid+leukaemia.">MRD parameters using immunophenotypic detection methods are highly reliable in predicting survival in acute myeloid leukaemia.</a> Leukemia. 18 (8), 1380-1390 (2004).</li><li>Terwijn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemic+stem+cell+frequency:+a+strong+biomarker+for+clinical+outcome+in+acute+myeloid+leukemia.">Leukemic stem cell frequency: a strong biomarker for clinical outcome in acute myeloid leukemia.</a> PLoS One. 9 (9), e107587 (2014).</li><li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols.">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li><li>Paietta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+minimal+residual+disease+(MRD)+in+leukemia:+a+changing+definition+and+concept?.">Assessing minimal residual disease (MRD) in leukemia: a changing definition and concept?.</a> Bone Marrow Transplant. 29 (6), 459-465 (2002).</li><li>Loken, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+disease+detected+by+multidimensional+flow+cytometry+signifies+high+relapse+risk+in+patients+with+de+novo+acute+myeloid+leukemia:+a+report+from+Children's+Oncology+Group.">Residual disease detected by multidimensional flow cytometry signifies high relapse risk in patients with de novo acute myeloid leukemia: a report from Children's Oncology Group.</a> Blood. 120 (8), 1581-1588 (2012).</li><li>Zeijlemaker, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+one-tube+assay+for+immunophenotypical+quantification+of+leukemic+stem+cells+in+acute+myeloid+leukemia.">A simple one-tube assay for immunophenotypical quantification of leukemic stem cells in acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 30 (2), 439-446 (2015).</li><li>. Guidance for Collection, Transport and Submission of Specimens for Ebola Virus Testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html">https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html</a> (2017)</li><li>Bachas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+minor+subpopulations+within+the+leukemic+blast+compartment+of+AML+patients+at+initial+diagnosis+in+the+development+of+relapse.">The role of minor subpopulations within the leukemic blast compartment of AML patients at initial diagnosis in the development of relapse.</a> Leukemia. 26 (6), 1313-1320 (2012).</li><li>Ravandi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+minimal+residual+disease+assessed+by+multiparameter+flow+cytometry+is+highly+prognostic+in+younger+patients+with+acute+myeloid+leukemia.">Persistence of minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry is highly prognostic in younger patients with acute myeloid leukemia.</a> Cancer. 123 (3), 426-435 (2017).</li><li>Hourigan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurable+residual+disease+testing+in+acute+myeloid+leukaemia.">Measurable residual disease testing in acute myeloid leukaemia.</a> Leukemia. 31 (7), 1482-1490 (2017).</li></ol>

הקוקטיילים נוגדן המשמש עבור האימות של הצינור תאי גזע במוסדות עצמאיים מספר נמסרו באדיבות בידי BD. המחברים אין לחשוף ביחס כתב היד הזה.

בשפע הנתונים אינם זמינים זה להראות הוכחות חיוביות MRD להיות קשור עם הישרדות עניים, ולכן הערכת MRD עשוי לשפר את התוצאה החולה על-ידי מתן מידע prognostic נוסף שעליו קליניים יכולים לקבל החלטות. לפיכך, עקבית המתואמת שיטה להערכת חיסונית-פנוטיפי של MRD חיונית בסופו של דבר לשפר את הטיפול המטופל. זה גם חשוב בעת השוואת מחקרים קליניים על פני אתרים קליניים שונים, אולי בסופו של דבר לעזרה קלינית החלטה משמש נקודת קצה של קליניים עבור ההישרדות פונדקאית ו... הרעיון כי הנחיות מוצק הם מוצדקת למדידות MRD מדויקים ועקביים הובילה פעולה מתואמת של אירופה לוקמיה רשת (ELN) עיצוב עדכני להנחיות. מסמך מקיף זה יהיה שפורסם מאוחר-2017, וישמש כלי עבור רבים בקבוצות לימוד, מעבדות לנוע קדימה.
שלבים קריטיים בתוך פרוטוקול
היבט חשוב, ולא להתעלם לעתים קרובות של MRD ניתוח הוא ההשפעה של איכות מדגם על קביעה מדויקת של MRD. זה ברור יותר כאשר החומר צריך להיות מועבר אל מוסדות אחרים בניסויים קליניים העולמית, נתן את השיקולים מבצעיים נוספים צריכים להילקח בחשבון על הגדרה זו. כדי להפחית את הסיכון של ערבוב לחולה מידע מהירה ומדויקת של המינהל נאותה דגימות היא קריטית. שוב, בשלב זה של התחבורה הטפסים הנכונים ו/או לייבא לתוך בית החולים אלקטרוניים מערכות עם הקצאות ברורה של ניתוח המבוקש נדרש. וציין הבמה ב הטיפול של MRD הדגימה היא קריטית גם מאז זה עשוי להיות רלוונטי עבור החלטות קליניות (למשל אחרי הקורס השני של טיפול) ואם צריך ולכן להגדיר בבירור. השימוש מעושה נתונים (כמו למשל 1 בינואר בכל שנה הלידה) מגביר את הסיכון של ערבוב חולים או ניתוחים. אם נדרש על פי חוק, צריך לשמש דרך תשוחררנה חלופית של הזדהות.
כל דגימות עבור immunophenotyping תעובד מעדיפים בתוך 24 שעות של אוסף. אמנם לא recommendable, מח עצם ודגימות דם היקפיים ניתן עדיין לעבד ולעדכן ניתח כאשר המשכתי עד 72 שעות בטמפרטורת החדר. בנוסף, כל handlings עם החומר הטוב ביותר ניתן לבצע בתנאים סטריליים, אז הקפאה קריוגנית נוסף של תאים ב- biobanks (מקומי) עודנה רלוונטית: מחקרים קליניים רבים יש ניתוחים נוספים להמשיך לחקור תאים לוקמיה לכבד לתכונות מולקולרית, חיסונית-פנוטיפי ו פונקציונלי שיש לבצע בשלב מאוחר יותר. עם זאת הפרטים של biobanking אינם בתוך הטווח של כתב היד הזה.
באמצעות MRD ככלי אבחון מרמז שהוא צריך מעבדה מוכר, לא רק עבור cytometry זרימה, אלא גם לגבי בקרת איכות של MRD ההערכה. זה עשוי לדרוש חלוקת דוגמאות למעבדות ייחוס ספציפית או (מחדש) ניתוח זרימת קבצים עם המדידות MRD צוותים הפניה.
מאמר זה מתאר את הפעולות החשובות ביותר מאוסף מח עצם וביופסיה להגדרה של MRD בדגימות קליניות - דרישת צוות שלם של מומחים עם משימות מסוימות, אחריות, ועם תכופים תקשורת אפקטיבי אפיון וניתוח. מאז כל פעילות היא גורם מכריע ההליך, מומלץ שיהיה קול לוגיסטיים כולל פרוטוקולים בכל מעבדה, גיבוי כוח אדם אשר הוכשרו במיוחד עבור הפעילות. בנוסף, מאז יש כמה מדרגות סובייקטיבי יחסית בחלק מההליכים (במיוחד LAIP ואת ה-LSC aberrant סמן זיהוי), זה חיוני כדי יש דיונים על התוצאה הסופית על ידי הצוות, ויש הדו ח הסופי מורשה על ידי צוות מפקחים. המאמצים הנוכחיים במרדף אחר פיתוח תוכנה מחשב אשר יסייעו לתקנן את הניתוח MRD (LAIP וה-LSC).
השינוי ופתרון בעיות
בכל מעבדה יכולה לקבל סידרה של נוגדנים יכול לשמש כדי להגדיר את subpopulations שונים למרות שיש עמוד השדרה מתוקננת של סמנים הוא חיוני עבור תוצאות דומות, כפי שמתואר ההנחיות משוכללת ELN MRD מדידות מסמך התייחס לעיל. הממאירות של הסמנים שבחרת יש כמה בעיות זה יכול להקשות על הניתוח של התוצאות צריכים להילקח בחשבון.
מגבלות של הטכניקה
הזיהוי של הביטוי LAIP סמן סוטה ה-LSC קודם מוערך באבחון, מעקב לאורך זמן (במהלך ואחרי הטיפול) עבור אפיון מדויק של פנוטיפ MRD. בעוד מעל 95% מהחולים ניתן להעריך באמצעות LAIP או ה-LSC (או שניהם), עדיין חלק מהחולים יש LAIPs לא מוגדר או לא CD34 + CD38-LSCs או להציג עם תקיעות שלילי CD34, או שיש אבחון חסרים. במקרים אלה, היא עדיין כדאי לנסות ולמדוד MRD עם פאנל של נוגדנים רחב כמו מספר התאים הזמינים מאפשר ולאחר מכן בחר את הכי אמין (ויתור ההבחנה הכי חזק של תאים לוקמיה) LAIP. בהתחשב בעובדה כי שיעור החולים אשר בסופו של דבר נסיגה לא דומים לגמרי immunophenotype את האבחנה, בשל הטרוגניות המחלה AML, מדידת פאנל רחב של נוגדנים-MRD מומלץ בכל מקרה. אלה משמרות immunophenotypic כוללים פיצוץ התאים LSCs הוכחו להתרחש במהלך טיפול16 , המחלה measureable עשויה להתבסס על אוכלוסיות אלה צפויים כביכול. בשלב זה, אולם, לא נקבע אם כל immunophenotypic תת אוכלוסיות יוביל התדרדרות המחלה, לכן לא מקובל לדווח MRD המותאמים-טיפול המבוסס על תאים אלה בניסויים קליניים. חשוב לציין כי הסיכון של חסר ה-LSC בשל האוכלוסייה משמרות הוא מופחת על ידי הגישה שפופרת אחת שבה הם הסימנים המכונן החשוב ביותר aberrancy של cytometry זרימה אחד (PE) ערוץ14.
משמעות לגבי שיטות קיימות
השיטה המתוארת ב פרוטוקול זה מסתמך על ההגדרה של LAIPs אחד או יותר, אילו תאים עוקבים במהלך הטיפול. החיסרון של שיטה זו הוא כי לאחרונה הוכח כי LAIP עשויים להשתנות במהלך הטיפול. בדרך זו שכמה אוכלוסיות הקרובה עם סמנים aberrant שונים עשויים לפספס. כדי לעקוף את זה, זה יהיה הכי טוב למדוד את כל הסמנים aberrant במקום רק לאלה שנמצאו אבחון. ואז זה יהיה דומה לגישה "שונה מן הרגיל" המשמש מעבדות מספר17.
יישומים עתידיים
לאחרונה, MRD קיבלה תשומת לב נוספת עבור עיצוב חדשניים של ניסיון קליני. בעידן של אפשרויות טיפול מיוחדים, טיפול תרופתי ממוקד, השימוש של MRD כאמצעי התוצאה יהיה להפחית את הזמן הדרוש ליצירת היעילות הקלינית של טיפולים חדשניים, בסופו של דבר המאפשר היכרות מהירה יותר של צורך דחוף טיפולית אפשרויות למרפאה. המשמעות של לוגיסטיקה המתאים וביצוע מעשי של הערכה MRD harmonized מכריעים להצלחת הטיפול העתידי AML כמו ה-FDA בודקת כעת את הכדאיות של שימוש MRD נקודת קצה של הפונדקאית במקום ההישרדות מודד18.

לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) הוא שגידול ממאיר של מח העצם מאופיין על ידי פגמים בתוכנית ההבשלה, עם התפשטות חריגה, הצטברות של תאים מיאלואידים ובתאים, עיכוב של hematopoiesis נורמלי, ולבסוף, מח עצם כישלון . המחלה היא הטרוגנית מאוד ביחס מורפולוגיה, immunophenotype, ציטוגנטיקה, שיבושים מולקולרית וחתימות ביטוי גנים, כמו גם התגובה טיפול, טיפול תוצאה1,2. ניהול הנוכחי כולל אינדוקציה כימותרפיה במטרה להשיג הפוגה מלאה (CR), ואחריו הפוגה שלאחר הטיפול, אשר במידה רבה מונחה על ידי התוצאות של מולקולרית, cytogenetic, immunophenotypic מחקרים והיא מורכבת גם מספר קורסים של כימותרפיה נוספים או השתלת תא גזע (עצמיים או allogeneic)3. למרות המחירים גבוה הפוגה לאחר כימותרפיה אינטנסיבית של עד 90%, הישרדות 5 שנים אצל מבוגרים היא רק כ 30% - 40%, בעיקר עקב ההתפתחות של ההתקפים אשר הם בדרך כלל עמידים בפני כימותרפיה ובכך מאוד קשה לטפל. התוצאה אצל ילדים הוא טוב יותר, למרות בערך שליש גם נסיגה. לכן, גילוי מוקדם של נסיגה מיידית ימלא של צורך רפואי קליניות, להנחות הפוגה שלאחר טיפול4.
מחלה שיורית לאחר טיפול עשוי לשקף את הסכום של כל האבחון, פוסט-אבחון התנגדות מנגנונים/גורמים; ומכאן המדידה שלו עשוי להיות prognostic פלייבק להדרכת טיפול. האפשרות של deﬁning מחלה שיורית (בעבר נקרא מחלה שיורית מינימלית, המכונה עכשיו מדיד כמו מחלה שיורית או MRD) הרבה מתחת קריטריון מורפולוגי של 5% הפיצוץ תאים משתנה הנוף של הסיכון classiﬁcation. נכון לעכשיו שתי השיטות המשמשים בעיקר לזיהוי MRD הם לזרום cytometry ומבוססי -מולקולרי המבוסס על, האחרון המוערך על ידי רוורס טרנסקריפטאז PCR (RT-qPCR)5 , או אף בשלב מוקדם מדי, על ידי הדור הבא רצף (הגדרות). מחקרים רבים גם במבוגרים כמו ילדים כבר הוכיחה כי מגוון גישות MRD מספקים מידע prognostic חזק ב- AML הן לאחר אינדוקציה ואיחוד טיפול6,7, הגדרה חדשה של המחלה נטל ( ממונה ההתר מורפולוגי) עכשיו מתגלה8. הדבר מצביע על כי MRD מוערך על ידי זרימה או טכניקות מולקולריות צריך להיות, למעשה כבר נעשים, תקן סטנדרטי בכל ניסוי קליני ב- AML.
כתב יד זה דן ההליך cytometry זרימה מפורט להצטייד איפיון immunophenotypic לשחזור ומדויקים של MRD דגימות מח עצם, כולל מח עצם הדגימה ועיבוד ההליכים שקדמו cytometry זרימה. הזמינות של דגימות מח עצם באיכות טובה-אבחון ומעקב חיוני להצלחה של מדידה זו על פני אתרים קליניים, ניסויים קליניים. למעשה, שיקולים אנליטי מראש אלו הם גם גישות MRD המתודולוגי מולקולרית (PCR ו המיתרים). Immunophenotypic פלואורסנציה MRD, סמנים aberrantly ביטוי בשילוב עם נורמלי מיאלואידית וסמנים קדמון, לזהות לוקמיה-הקשורים immunophenotype (LAIP)9. MRD מודד את התוצאות של גורמים רבים המשפיעים על התגובה לטיפול, כגון עמידות לתרופות לוקמיה מהותי או נרכשות, pharmacodynamics וקינטיקה של טיפול, מעקב המערכת החיסונית תאימות. לכן, MRD הוא אבחון פוסט חזק מאוד prognostic פרמטר המקושר עם התוצאה הקלינית כאשר dichotomized ברמה ניתוק נקבעים על-ידי ניתוח מאפיין הפעלה מקלט (ROC). בשביל עמיתינו AML למבוגרים של HOVON 42 א לומדים, רמת ניתוק מוגדרת ב- 0.1% של כדוריות הדם הלבנות של תאים חיוביים/סה כ LAIP. באמצעות קריטריון זה לקביעת מצב MRD חיובי לעומת שליליים, קבוצה של חולים ניתן לזהות מי יש שכיחות relapse גרוע במידה משמעותית, ללא נסיגה, הכוללת הישרדות6. בנוסף, אנו מתארים את המדידה של תאים הלוקמיה לא בוגר, עמידים בפני התרופה עם תכונות כמו תאי גזע (תאי גזע CD34 + CD38-לוקמיה, או ה-LSC), אשר מציעה מנבא חזק של המטופל התוצאה10. יחד LAIP, ה-LSC ניגש טופס הגישה MRD זרימה cytometric. הגישה LAIP מתאים בערך 90% של החולים, בעוד כ- 80% מהחולים ניתן ליישם את גישת ה-LSC. ביחד מעל 95% מהחולים ניתן להעריך עבור פרמטר אחד או שניהם.
לבסוף, פרסום זה מספק תיאור מפורט מבצעית כדי להעריך MRD מאת cytometry זרימה. זה כולל: 1) משלים ו/או סטנדרטיזציה של תהליכי דגימה מח עצם, הדרכה תחבורה 2) מדגם 3) תיאור מפורט של זיהוי תאים לוקמיה עם FACS באמצעות מספר לוחות נוגדן כולל גישות צינור תא בודד כדי לאפיין את ה-LSC, 4) ההקמה של FACS מכונות למדידות מתוקננת, 5) תוכניות אנליטי עבור MRD מדידות ו- 6) תוכניות אנליטי לצורך זיהוי ה-LSC.
אנו שואפים להראות לכל ההיבטים של ההליך כולל את הכנת הדוגמא מאז לעיתים רחוקות הנדונה עוד זה נושא חשוב עבור האיכות של התוצאה הסופית. שאיבת מח עצם ביופסיה קליניים הליכים המשמשים להערכת התאים hematopoietic בתוך מח העצם בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. אלה מבוצעות יחד עם ספירת דם (CBC) דם. השיטה אופטימלית עבור שאיבת מח עצם חיונית אבחנה מדויקת ומעקב למדידה MRD. בנוסף, וביופסיה מח העצם מוצלח צריך להכיל מספיק תאים כדי לבצע את LAIP ה-LSC זרימה וניתוח (לפחות 10 מיליון תאים קיימא). כאן, אנו מתארים את שיטת ביצוע שאיבת מח עצם ולספק הנחיות, אשר אמור לגרום נאותה תא הדגימה (והגבלת הפוטנציאל של hemodilution) צריך אבחון מדויק ומחקר נוסף. שיקולים אנליטי מראש אלו הם גם גישות MRD המתודולוגי מולקולרית (PCR ו המיתרים). כל דגימות עבור immunophenotyping תעובד מעדיפים בתוך 24 שעות של אוסף. אמנם לא recommendable, מח עצם ודגימות דם היקפיים ניתן עדיין לעבד ולעדכן ניתח כאשר המשכתי עד 72 שעות בטמפרטורת החדר. בנוסף, כל handlings עם החומר צריכה להתבצע בתנאים סטריליים, על מנת לאפשר הקפאה קריוגנית של תאים סטרילי להערכת המחקר/איכות מאוחר יותר ועוד.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >120995496,060996589 and 013729</td>
			<td >FACS Canto II&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >555360</td>
			<td>CD7 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >DAKO</td>
			<td >F076701</td>
			<td>CD2 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Sanquin</td>
			<td >M1613</td>
			<td>CD36 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >332778</td>
			<td>CD15 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>335039</td>
			<td>CD45RA FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345810</td>
			<td >CD56 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >337899</td>
			<td >CD22 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345785</td>
			<td >CD14 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Miltenyi Biotec</td>
			<td >130-080-801</td>
			<td >CD133 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562566</td>
			<td>Clec12a PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565568</td>
			<td>Tim-3 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >332774</td>
			<td >CD7 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >333142</td>
			<td >CD11b PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >337899</td>
			<td >CD22 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345810</td>
			<td >CD56 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >347222</td>
			<td >CD34 PERCP-CY5.5</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558714</td>
			<td>CD123 PERCP-CY5.5</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Beckman Coulter</td>
			<td>B49221</td>
			<td >CD117 PE-CY7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562854</td>
			<td>CD33 BV421</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345791</td>
			<td >CD19 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >333143</td>
			<td >CD11b APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345800</td>
			<td >CD33 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>345807</td>
			<td>CD38 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >641411</td>
			<td >HLA-DR APC-H7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560532</td>
			<td>CD44 APC-H7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >562596</td>
			<td >CD13 BV421</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>348811</td>
			<td>CD34 PE-CY7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Beckman Coulter</td>
			<td>A96416</td>
			<td >CD45 Krome Orange</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>655873</td>
			<td >CD45 HV500c</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >655051</td>
			<td>CST beads&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >555899</td>
			<td>Pharm lysing solution</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >644204</td>
			<td>Multicolor CompBeads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >655051</td>
			<td>CST beads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td ></td>
			<td>FACSDiva software</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Cytognos</td>
			<td ></td>
			<td >Infinicyt&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Spherotech</td>
			<td>Euroflow RCP-30-5a</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td ></td>
			<td >Tuerk solution</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Spherotech</td>
			<td>BCP-100-5</td>
			<td>Blank Calibration Particles Beads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >HSA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >Azide</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >ddH2O</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

comprehensive protocol to sample and process bone marrow for measuring measurable residual disease and leukemic stem cells in acute myeloid leukemia

התגובה לקריטריונים לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) באחרונה הוקמה מחדש, עם בחינה מורפולוגיות מנוצל כדי לקבוע אם חולים השיגו הפוגה מלאה (CR). בערך כמחצית מהמטופלים המבוגרים שנכנסו CR הדרדר בתוך 12 חודשים עקב המוצלח תאים שיורית AML במח העצם. כימות של אלה שנותרו תאים לוקמיה, המכונה מחלה שיורית מינימלית או מדיד (MRD), יכול להיות סמן חזקים לחיזוי של הישנות האלה. יתר על כן, ניתוח רטרוספקטיבי של מספר מחקרים הראו כי הנוכחות של MRD במח העצם של AML חולים בקורלציה עם הישרדות המסכן. לא רק היא מכלל האוכלוסייה לוקמיה, בא לידי ביטוי על ידי תאים מחסה של לוקמיה הקשורים החיסון-פנוטיפ (LAIP), הקשורים עם התוצאה הקלינית, אבל אז הוא subpopulation ילדותי תדירות נמוכה של תאי גזע לוקמיה (ה-LSC), אשר שניהם יכולים להיות פיקוח באמצעות cytometry זרימה MRD או MRD כמו גישות. הזמינות של מבחני רגישות המאפשרים זיהוי של תאים לויקמיה שיורית (גזע) על סמך תכונות מחלות ספציפיות או הקשורים למחלה (סמנים מולקולריים חריגה או חריגה immunophenotypes) יש שיפור דרסטי MRD הערכה ב- AML. עם זאת, בהתחשב הטרוגניות הגלום והמורכבות של AML כמחלה, שיטות דגימה מח עצם וביצוע ניתוח MRD ואת ה-LSC צריך להיות בהרמוניה כאשר הדבר אפשרי. כתב יד זה שנתאר מתודולוגיה מפורט נאותה מח עצם וביופסיה דגימה, תחבורה, לטעום להערכת cytometry זרימה צבע רב אופטימלית, ועיבוד gating אסטרטגיות כדי להעריך MRD ואת ה-LSC כדי לסייע בקבלת החלטות טיפוליות עבור חולים AML.

ב- 90% של חולים AML ניתן לזהות LAIP אחד לפחות. על מנת ליצור את אחוזי LAIP + תאים של תאי הפיצוץ פרימיטיבי-אבחון מדויק, ההגדרה המתאימה של השער הפיצוץ הוא קריטי ועליו אימות כמו מטמיעים באיור3. דוגמה של כל מטופל הסתרת סוג מסוים של aberrancy על CD34 + תאים פרימיטיביים הוא מדמיין באיור5. למדידה של MRD-בצע-up, מוקדם יותר מוגדרים LAIP + התאים מגודרת ומוגדר כאחוז של LAIP + תאים של WBC. ומכאן ההגדרה של שער זה חיוני להשיג את התוצאות MRD הנכון. איור 6 מראה חולה נשאר הפוגה מלאה חולה ההתקפים לאחר תוצאות חיוביות MRD (≥ 0.1%) לאחר המחזור השני של טיפול אינדוקציה.
בפרוטוקול הנוכחי מתאים רק להגדרת תאי גזע CD34 + בתאים, מאז אפיון מעמיק של תא זה הראה כי האוכלוסייה CD38 בנמלים את תאי הגזע החזק ביותר כמו שבר. על מנת להפריד מועדון הכדורגל מונפלייה בתוך השבר הזה ה-LSC, משמשים סמנים נוספים. סמני לרוב שנבחר כדי להבחין בין ה-LSC הן CD45RA את הערוץ קומבי מחסה 6 ספציפי ה-LSC הסמנים המסומנת PE. על סמך נוסף קליניים הערכות, רמה ניתוק של ≥ 0.004% הוגדר ה-LSC-חיוביות והיה מקושר עם הישרדות גרוע-אבחון בעוד רמת ניתוק 0.0001% השתמשו ב follw-up10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig1.jpg"> איור 1 : מח עצם השמצות. תורם בריא א) ומטופל ב) AML (סוג של FAB 5). צביעת גימזה מוצג בהגדלה 100 x. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig2.jpg"> איור 2 : תקן חומרי אריזה תמיסות ביולוגיות. פרטים נוספים על החוקים והתקנות שינוע נוזלים ביולוגיים ניתן למצוא ב אתר15 מרכזי עבור מחלות ומניעתן. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig3.jpg"> איור 3 : Gating אסטרטגיה עבור הגדרת התאים הפיצוץ. א) Gating CD45dim, B) Gating CD34 + תקיעות.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig4.jpg"> איור 4 : Gating לימפוציטים. א) תאים כחול הם WBC שמוצג בעלילה FSC/האס, תאי B) ירוק הם לימפוציטים מאופיין CD45גבוהה/SSCנמוכה, C) דוגמאות שליליות עבור CD34, ד) שליליות עבור CD117 ו- E) שליליות עבור CD13, ו) לסוגי תאים שונים מוצגים בו סקירה כללית של האוכלוסייה עץ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig5.jpg"> איור 5 : LAIPs-אבחון AML. A) LAIP מבוסס על צלב השושלת aberrancy (CD7 על התאים מבטאים CD33), B) LAIP מבוסס על בידול אסינכרוני (CD11b על התאים מבטאים CD13), C) LAIP מבוסס על ביטוי לעומת תאים נורמליים (CD34גבוה מאוד על CD13 לבטא תאים), ד). LAIP מבוססת על underexpression לעומת תאים נורמליים (הלע-ד רנמוך CD33 לבטא תאים). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig6.jpg"> איור 6 : LAIP עקב במהלך הטיפול. הגדרת א) LAIP-אבחון (CD34 + / CD13 / CD33-) אובדן LAIP במהלך המעקב לחולה שנותרו הפוגה מלאה רציפה, ב) LAIP הגדרה-אבחון (CD117 / CD7 + CD33 +) ויכולת ההתמדה של LAIP במהלך טיפול בחולה מי הישנות. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig7.jpg"> איור 7 : תאי גזע gating. א) Gating של CD34 שונים + / אוכלוסיות CD38 מבוסס על חרוזים (הוא CD38נמוך מתחת לגבול העליון של החרוזים, בעוד CD38נמוך מאוד מוגדרים נכון התאים שלילי המייצג את ה-LSC, הממוקמים מתחת החציון של החרוזים), ב) 2 דוגמאות של חולים עם ההבחנה בין HSC ה-LSC-המשך טיפול המבוסס על CD45RAneg וביטויקופה CD45RA. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
משלימה קובץ 1. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Sampling_Form_MRD_1.pdf" target="_blank">לחץ כאן והתקן את הקובץ.</a>
משלימה קובץ 2. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Sampling_Form_MRD_2.pdf" target="_blank">לחץ כאן והתקן את הקובץ.</a>
קובץ משלימה 3- <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Supplementary_information_revised_Cloos_et_al_final2018.docx" target="_blank">לחץ כאן והתקן את הקובץ.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia at JoVE.c

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

גילוי של מחלה שיורית מינימלית או מדיד (MRD) הוא סמן prognostic חשוב זיקוק הערכת סיכונים, חיזוי relapse ב לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). אלה מקיף הנחיות והמלצות עם שיטות עבודה מומלצות עבור זיהוי עקבי ומדויק וזיהוי של MRD, עשויים לסייע בקבלת החלטות לטיפול יעיל של AML.

פרוטוקולים מקיפה לדוגמה, מח עצם תהליך למדידת מחלה שיורית מדיד, לוקמיה בתאי גזע לוקמיה מיאלואידית חריפה

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

The overall goal of this protocol is to perform an accurate testing of bone marrow samples from acute myeloid leukemia patients for measurable residual disease including the quantification of leukemia stem cells. This method can provide an accurate assessment of measurable residual disease in bone marrow samples of acute myeloid leukemia patients. The main advantage of this approach is that a close following of the protocol yields highly-reproducible, high-quality results.The implications of this technique extends toward clinical decision-making as it can be used as a read-out of patients'response to treatment. Demonstrating the procedures will be Jeroen Janssen, hematologist, Gerrit Sijm, technician of the diagnostic hematology laboratory and Jennifer Scheick and Sander Snel, technicians of the MRD team. With the patient in the lateral decubitus position, mark the superior posterior iliac spine with a pen and disinfect the skin of the intended biopsy area with 0.5 to 1%chlorhexidine in ethanol in an outward circular motion.After administering a local anesthetic, pick up a 15-gauge 2.8-inch needle with the proximal end in the palm and the index finger against the side of the metal shaft of the needle near the tip for control. Using gentle but firm pressure, introduce the needle with a quick alternating pronating supinating movement through the anesthetized skin toward the iliac spine. When the needle comes into contact with the posterior iliac spine, remove the stilette and attach an empty 10-milliliter syringe to the needle.Gently withdraw the plunger to create negative pressure within the syringe until up to 10 milliliters of bone marrow spicules have been harvested. Do not take more than 10 mils of bone marrow per aspirate to avoid hemodilution. Remove the syringe and place the stilette back onto the needle.Then, eject about two milliliters of the marrow into a watch glass and ensure that enough sample is drawn to be injected into a heparin-coated eight-milliliter tube and immediately invert the tube. To prevent clotting, it is important to invest the anticoagulant-containing tube as soon as the bone marrow is added. For optimal morphological assessment, use a plastic spatula to transfer spicules from the aspirate in the watch glass onto a glass slide, and carefully glide another glass slide on top of the marrow.After drying, stain the spicules with May-Grunwald Giemsa for analysis by light microscopy. Place the bone marrow tube in a plastic holder and place the holder into a plastic container with an ambient gel pack and a completed request form. Before analyzing the bone marrow by flow cytometry, start up the flow cytometer and open the flow cytometry analysis software to create a new experiment with a forward scatter versus side scatter dot plot.For assessment of the size and granularity of the cells, load unlabeled lysed peripheral blood cells from a healthy donor and select the Acquire Cells function. Gate the lymphocytes and adjust the forward and side scatter voltages to reach the appropriate mean target values for the gated cell population. Then, acquire data for at least 10, 000 events.To set up the target florescence channel photo multiplier tube voltages, first use eight-peak rainbow bead calibration particles according to the manufacturer's instructions to acquire 10, 000 events at a low flow rate. Gate the singlet beads in the forward versus side scatter dot plot followed by gating the 7th peak in the FITC-PE dot plot. Gate the resulting bead populations for each fluorophore.Continue the acquisition of the eight-peak rainbow bead suspension and adjust and fine-tune PMT voltages in all fluorescence channels to reach target MFI values according to the manufacturer's instructions. Use Record to collect data of about 2, 000 events and check the MFI for the 7th peak beads. Next, add a sufficient volume of each experimental flourochrome conjugated antibody to stain the beads in the corresponding florescence tubes minus one control and vortex the tubes thoroughly.Create a new blank experiment with the same compensation parameters taking care that the forward scatter threshold is set to 5, 000 and the compensation values of all the flourochromes are zero. To create the compensation controls, select the Create Compensation Control function and load the unstained control tube. Adjust the P1 gate around the singlet bead population and confirm that the P1 gate contains only singlet beads.Right-click the P1 gate and select Apply to All Compensation Controls. Then, record data for all of the single labeled florescence tubes confirming that the P2 gate encompasses the positive population on each florescence histogram. To stain the cells for flow cytometric analysis, transport the bone marrow to the laboratory, check the request form to verify patient study number and date of birth and determine what needs to be stained.For MRD, we use a staining panel consisting of four tubes. Here we demonstrate the staining of the LSC panel which consists of one tube. After cell count, transfer the appropriate volume of bone marrow into a new 15-milliliter tube.Add lysis buffer at 10 times the experimental cell volume to lyse the red blood cells. Invert the tube to mix and incubate the cells for 10 minutes at room temperature. At the end of the lysis period, pellet the cells by centrifugation.Resuspend the cells in 15 milliliters of wash buffer at room temperature and harvest the cell pellet again by centrifugation. In the meantime, pipette the appropriate amount of antibody cocktail solution in five-milliliter FACS tubes. Shown here is the panel for the stem cell tube.Resuspend the pellet in wash buffer and add the cell's suspension to the FACS tube containing the monoclonal antibody cocktail solution for a 15-minute incubation in the dark. Then, wash the cells in wash buffer and pellet the cells by centrifugation. After centrifugation, resuspend the pellet in 400 microliters of fresh wash buffer.To analyze the leukemic stem cells, add four microliters of blank beads to the cell suspension that is stained with the stem cell antibody cocktail. Then, read the samples using the previously set parameters acquiring at least four times 10 to the 6th events from the experimental patient samples. To identify the leukemia-associated immunophenotype observed in approximately 90%of acute myeloid leukemia patients, it is crucial that the blast gates are set appropriately as illustrated.Here, examples of data from individual patients harboring different types of aberrancy on the CD34-positive primitive cells are shown. In these graphs, a patient who remains in complete remission and a patient who relapsed after having measurable residual disease positive results after the second cycle of induction therapy can be observed underscoring the need for accurate gate setting prior to sample analysis. The identification and quantification of LSC requires additional analysis of aberrancies specifically on CD34-positive CD38-negative blast cells as shown in these graphs.While performing this protocol, it's very important to have specialized and backup personnel for the bone marrow sampling, the transport, the experimental work and analysis steps of this procedure. This procedure can also be used to perform cytogenetic and molecular analysis to answer additional questions about the correlation between specific cell populations and molecular aberrancies of interest, or to refine the risk group of a patient for predicting clinical outcome. After its development, this technique paved the way for researchers in the field of hematology to explore residual disease in AML patients after treatment.After watching this video, you should have a good understanding how we accurately identify and quantify residual disease by using flow cytometry including the collection and transportation of bone marrow samples of AML patients.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Detailed Protocol for Characterizing the Murine C1498 Cell Line and its Associated Leukemia Mouse Model

פרוטוקול מפורט לאפיון לקו הסלולרי Murine C1498 דגם Associated לוקמיה העכבר שלה

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of ...

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

פרוטוקול תרבית תאי ראפיד פוסט מורטם של Glioma Pontine המפוזר העצמותי (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

הכנה של תאים לוקמיה לימפובלסטית חריפה העיקרית בשלבים שונים של מחזור התא על ידי צנטריפוגלי Elutriation

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up

Flow Cytometry להעריך לוקמיה תאי גזע ראשי לוקמיה מיאלואידית חריפה, החולה-נגזר-xenografts, אבחון, מעקב.

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous, and if not treated, fatal disease. It is the most common cause of leukemia-associated mortality in ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

שיפוץ עצם מדידה ויצירה משולבת של מיקרוסביבה של עצם הגידול באמצעות Calvaria Co-תרבות והימאנורמוטוריקה

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

הזרמת כדוריות הדם של מיני חמצן מיטוכונדריאלי מורטין בגזע ובתאי מחולל ולוקמיה מונחה AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

מידול גידולי עצם ראשוניים וגרורות עצם עם השתלת גידול מוצק השתלת עצם לעצם

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Two Flow Cytometric Approaches of NKG2D Ligand Surface Detection to Distinguish Stem Cells from Bulk Subpopulations in Acute Myeloid Leukemia

שתי גישות ציטומטריות זרימה של גילוי משטח ליגנד NKG2D כדי להבחין בין תאי גזע לבין תת אוכלוסין בתפזורת בלוקמיה מיאלואידית חריפה

Within the same patient, absence of NKG2D ligands (NKG2DL) surface expression was shown to distinguish leukemic subpopulations with stem cell properties ...

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

השתלה תוך צפקית ליצירת לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...