Name: comprehensive protocol to sample and process bone marrow for measuring measurable residual disease and leukemic stem cells in acute myeloid leukemia
Uploaded: 2018-03-05T12:30:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia at JoVE.c

Bu araştırma için VONK Hollanda Kanser Derneği (ALPE 2013-6371) ve Egbers Vakfı tarafından desteklenmiştir. Hollandalı AML-MRD çalışma grubu işbirliği için ve verimli tartışmalar sürekli iyileştirme ve AML-MRD standardizasyonu için teşekkür ederiz.

<ol>
	<li>D&#246;hner, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+AML+in+adults:+2017+ELN+recommendations+from+an+international+expert+panel.">Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel.</a> Blood. 129 (4), 424-447 (2017).</li><li>Zwaan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaborative+Efforts+Driving+Progress+in+Pediatric+Acute+Myeloid+Leukemia.">Collaborative Efforts Driving Progress in Pediatric Acute Myeloid Leukemia.</a> J Clin Oncol. 33 (27), 2949-2962 (2015).</li><li>Cornelissen, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+European+LeukemiaNet+AML+Working+Party+consensus+statement+on+allogeneic+HSCT+for+patients+with+AML+in+remission:+an+integrated-risk+adapted+approach.">The European LeukemiaNet AML Working Party consensus statement on allogeneic HSCT for patients with AML in remission: an integrated-risk adapted approach.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (10), 579-590 (2012).</li><li>Grimwade, D., Freeman, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+minimal+residual+disease+in+acute+myeloid+leukemia:+which+platforms+are+ready+for+&amp;#34;prime+time&amp;#34;?.">Defining minimal residual disease in acute myeloid leukemia: which platforms are ready for &amp;#34;prime time&amp;#34;?.</a> Hematology. 2014 (1), 222-233 (2014).</li><li>Kr&#246;nke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+minimal+residual+disease+in+NPM1-mutated+acute+myeloid+leukemia:+a+study+from+the+German-Austrian+acute+myeloid+leukemia+study+group.">Monitoring of minimal residual disease in NPM1-mutated acute myeloid leukemia: a study from the German-Austrian acute myeloid leukemia study group.</a> J Clin Oncol. 29 (19), 2709-2716 (2011).</li><li>Terwijn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prognostic+impact+of+flow+cytometric+minimal+residual+disease+detection+in+acute+myeloid+leukemia:+data+from+the+HOVON/SAKK+AML+42A+study.">High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: data from the HOVON/SAKK AML 42A study.</a> J Clin Oncol. 31 (31), 3889-3897 (2013).</li><li>van der Velden, V. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+of+flowcytometric+minimal+residual+disease+detection+in+pediatric+acute+myeloid+leukemia+patients+treated+according+to+the+DCOG+ANLL97/MRC+AML12+protocol.">Clinical significance of flowcytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to the DCOG ANLL97/MRC AML12 protocol.</a> Leukemia. 24 (9), 1599-1606 (2010).</li><li>Ossenkoppele, G., Schuurhuis, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRD+in+AML:+time+for+redefinition+of+CR?.">MRD in AML: time for redefinition of CR?.</a> Blood. 121 (12), 2166-2168 (2013).</li><li>Feller, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRD+parameters+using+immunophenotypic+detection+methods+are+highly+reliable+in+predicting+survival+in+acute+myeloid+leukaemia.">MRD parameters using immunophenotypic detection methods are highly reliable in predicting survival in acute myeloid leukaemia.</a> Leukemia. 18 (8), 1380-1390 (2004).</li><li>Terwijn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemic+stem+cell+frequency:+a+strong+biomarker+for+clinical+outcome+in+acute+myeloid+leukemia.">Leukemic stem cell frequency: a strong biomarker for clinical outcome in acute myeloid leukemia.</a> PLoS One. 9 (9), e107587 (2014).</li><li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols.">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li><li>Paietta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+minimal+residual+disease+(MRD)+in+leukemia:+a+changing+definition+and+concept?.">Assessing minimal residual disease (MRD) in leukemia: a changing definition and concept?.</a> Bone Marrow Transplant. 29 (6), 459-465 (2002).</li><li>Loken, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+disease+detected+by+multidimensional+flow+cytometry+signifies+high+relapse+risk+in+patients+with+de+novo+acute+myeloid+leukemia:+a+report+from+Children's+Oncology+Group.">Residual disease detected by multidimensional flow cytometry signifies high relapse risk in patients with de novo acute myeloid leukemia: a report from Children's Oncology Group.</a> Blood. 120 (8), 1581-1588 (2012).</li><li>Zeijlemaker, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+one-tube+assay+for+immunophenotypical+quantification+of+leukemic+stem+cells+in+acute+myeloid+leukemia.">A simple one-tube assay for immunophenotypical quantification of leukemic stem cells in acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 30 (2), 439-446 (2015).</li><li>. Guidance for Collection, Transport and Submission of Specimens for Ebola Virus Testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html">https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html</a> (2017)</li><li>Bachas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+minor+subpopulations+within+the+leukemic+blast+compartment+of+AML+patients+at+initial+diagnosis+in+the+development+of+relapse.">The role of minor subpopulations within the leukemic blast compartment of AML patients at initial diagnosis in the development of relapse.</a> Leukemia. 26 (6), 1313-1320 (2012).</li><li>Ravandi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+minimal+residual+disease+assessed+by+multiparameter+flow+cytometry+is+highly+prognostic+in+younger+patients+with+acute+myeloid+leukemia.">Persistence of minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry is highly prognostic in younger patients with acute myeloid leukemia.</a> Cancer. 123 (3), 426-435 (2017).</li><li>Hourigan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurable+residual+disease+testing+in+acute+myeloid+leukaemia.">Measurable residual disease testing in acute myeloid leukaemia.</a> Leukemia. 31 (7), 1482-1490 (2017).</li></ol>

Birkaç bağımsız kurumları kök hücre tüpte doğrulama için kullanılan antikor kokteyl lütfen BD tarafından temin edilmiştir. Yazarlar bu makale ile ilgili olarak ifşa gerek yok.

Yeterli veri kullanılabilir MRD pozitifliği ile yoksul hayatta kalma ilişkili olan kanıt gösterin ve bu nedenle MRD değerlendirmesi üzerine klinik kararlar yapılabilir ek prognostik bilgiler sağlayarak hasta sonuç geliştirmek. Dolayısıyla, tutarlı ve uyumlu yöntemi MRD IMMUNO fenotipik değerlendirilmesi için sonuçta hasta tedavi geliştirmek için esastır. Bu da klinik çalışmalar farklı klinik sitelerin karşılaştırırken önemlidir ve sonuçta klinik yardımında yapma ve genel sağkalım için bir vekil klinik uç noktası olarak hizmet veren karar. Katı kurallar doğru ve tutarlı MRD ölçülerini garanti altındadır kavramı uyumlu eylem tasarım teknoloji yönergeleri için Avrupa lösemi ağ (ELN) yol açmıştır. Kapsamlı bu belgenin yayımlanmış geç 2017 olacak ve birçok çalışma grupları ve ilerlemeye laboratuvarlar için vesile olacak.
Protokol içindeki kritik adımlar
MRD analiz önemli ve sık sık gözden kaçan bir yönünü örnek kalite MRD doğru belirlenmesi üzerinde etkisi var. Bu daha belirgin olduğunda bu ayarı dikkate alınması gereken ek operasyonel konuları göz önüne alındığında genel klinik diğer kurumları için taşınması malzeme vardır. Hasta kadar karıştırma riskini azaltmak için bilgi ve örnekleri yeterli yönetim zamanında teslim önemlidir. Yine, aktarım bu aşamada doğru formları ve/veya elektronik hastane sistemleri istenen analiz açık atamalarda içe aktarma işlemi gereklidir. Terapi MRD örnekleme aşamada klinik karar verme (örneğin ikinci ders Terapi sonra) için uygun olmayabilir bu yana da çok önemlidir ve bu nedenle açıkça tanımlanmalıdır. (Örneğin, örneğin 1 Ocak doğum yılı başı) sahte veri kullanımı hasta veya analizler kadar karıştırma riskini artırır. Yasa gereği, alternatif bir anonim yöntem kimlik kullanılmalıdır.
İmmunophenotyping için tüm örnekler koleksiyon tercihen 24 h içinde işlenip. Her ne kadar değil tavsiye, kemik iliği ve periferik kan örnekleri hala işlenen ve analiz en fazla 72 saat ortam sıcaklığında tutulur. (Yerel) biobanks hücrelerinin daha fazla dondurma alakalı kalır bu yüzden buna ek olarak, tüm handlings malzeme ile en iyi steril koşullarda yapılabilir: birçok klinik çalışma ile lösemi hücreleri daha ayrıntılı araştırmaya ek Değerlendirmeler var Moleküler, immün fenotipik ve fonksiyonel özellikleri daha sonraki bir aşamada yapılması için saygı duyuyorum. Ancak biobanking ayrıntılarını bu makale kapsamında değildir.
MRD bir tanı aracı kullanarak bir akredite edilmiş laboratuvara Akış Sitometresi değil sadece, aynı zamanda kalite kontrol MRD değerlendirilmesi ile ilgili olarak ihtiyacı olduğu anlamına gelir. Bu örnekleri belirli referans laboratuvarlar için veya (yeniden) referans takım MRD ölçümleri ile akış dosyalarını çözümleme dağıtmak gerektirebilir.
Bu makalede, kemik iliği aspiratı koleksiyonundan en önemli eylemleri MRD belirlenmesi için etkili uzmanlar özel görevler, sorumluluklar ve sık sık iletişim ile tüm bir ekip gerektiren klinik örneklerinde - için karakterizasyonu ve analiz. Her görev için yordam çok önemli olduğu için bu iletişim kuralları, her bir laboratuvar ve görev için özel olarak eğitilmiş yeterli destek personeli de dahil olmak üzere ses lojistik için tavsiye edilir. Buna ek olarak, nihai sonucu hakkında tartışmalar ekibi tarafından var ve bir ekip tarafından yetkili nihai rapor için gerekli yordamlar (özellikle LAIP ve LSC anormal marker tanıma) nispeten öznel bazı adımlardan kısmen olduğundan, Denetçiler. Şimdiki çabalar (LAIP ve LSC) MRD analiz standartlaştırmak yardımcı olacak bilgisayar yazılım geliştirme devam ediyor.
Değiştirme ve sorun giderme
Her laboratuar kendi işaretleri standartlaştırılmış bir omurgası olan ELN sanatın devlet yönergeler MRD ölçümler belge için belirtildiği gibi benzer sonuçları elde etmek için gerekli olmasına rağmen farklı altgrupları tanımlamak için kullanılan antikorlar olabilir Yukarıda anılan. Sonuçları analiz yapmak zor ve dikkate alınması gereken bazı sorunlar seçilen veri işaretleyicilerini bakılmaksızın.
Teknik sınırlamaları
LAIP ve LSC anormal marker ifade tanımlaması ilk tanı değerlendirildi ve zaman (sırasında ve tedavi sonrasında) içinde MRD fenotip doğru karakterizasyonu için izlenir. Hastaların % 95'i LAIP veya LSC (veya her ikisi ile) üzerinde değerlendirilebilir, ancak hala bazı hastalar tanımlanmış hiçbir LAIPs veya yok CD34 + CD38 LSCs var veya CD34 negatif patlama ile mevcut veya eksik bir tanı örnek alabilir. Bu gibi durumlarda, deneyin ve MRD antikorlar sağlar ve lösemik hücrelerin en güçlü ayrım en güvenilir (vererek) seçin kullanılabilir hücre sayısı gibi geniş bir panel ile ölçmek için hala değerli LAIP. Dikkate alınarak sonuçta Relaps hastaların bir kısmı tamamen AML hastalığı, heterojen nedeniyle tanı immunophenotype benziyorum değil geniş bir panel MRD, antikorların ölçümü nasıl olsa önerilir. Bu immunophenotypic vardiya blast hücreler ve LSCs ve terapi16 sırasında gerçekleşmesi için göstermiştir ve ölçülebilir hastalığı bu sözde yaklaşan nüfus üzerinde temel alıyor olabilir. Şu anda ancak, bu tüm immunophenotypic alt nüfus hastalık nüks için yol açacak ve bu nedenle MRD özel terapi bildirmek için değil yaygın bir uygulama klinik çalışmalarda bu hücreler dayalı olup olmadığını tespit edilmiştir değil. LSC nüfus vardiya nedeniyle kayıp riski en önemli aberrancy belirleyici işaretler bir Akış Sitometresi (PE) kanal14olan bir tüp yaklaşım tarafından düşürülmüştür unutmamak gerekir.
Mevcut yöntemler açısından önemi
Bu protokol için açıklanan yöntemi bir veya daha fazla LAIPs, hangi hücrelerin tedavisi sırasında uyuşukluk görülebilir takip edilmektedir tanımını kullanır. Bu yöntemin bir dezavantajı bu son zamanlarda LAIP tedavisi sırasında değişebilir gösterilmiştir olduğunu olmasıdır. Bu şekilde bazı yaklaşan nüfusu ile farklı anormal işaretleri özledim. Bu sorunu çözecek, yerine sadece bu tanıyı bulunan tüm anormal işaretleri ölçmek iyi olurdu. Bu daha sonra birkaç laboratuar17tarafından kullanılan "farklı normal" yaklaşımı benzer olacaktır.
Gelecek uygulamaları
Son zamanlarda, MRD roman klinik deneme tasarım için ekstra dikkat aldı. Özel tedavi seçenekleri ve hedeflenen ilaç tedavisi çağında, bir sonuç ölçü olarak MRD kullanımı yeni tedaviler, sonuçta daha hızlı giriş acilen tedavi gerekli izin klinik etkinlik oluşturmak için gereken süreyi azaltır Klinik seçenekleri. Uygun lojistik önemi ve pratik bir uygulayabileceğiniz MRD değerlendirme yürütülmesi gibi FDA şu anda MRD genel sağkalım yerine bir vekil bitiş noktası olarak kullanarak fizibilite araştırmaktadır gelecekteki AML tedavi başarısı için çok önemli 18ölçer.

Kemik iliği malignite kusurları olgunlaşma programında anormal proliferasyonu ve birikimi Miyeloid progenitör hücrelerinin normal hematopoiesis ve sonuçta kemik iliği yetmezliği inhibisyonu ile karakterize Akut Miyeloid Lösemi (AML) olduğunu . Morfoloji, immunophenotype, sitogenetik, moleküler anomalileri ve gen ifade imzaları ile ilgili olarak, hem de tedaviye yanıt ve tedavi sonucu1,2için son derece heterojen bir hastalıktır. İndüksiyon kemoterapi tam remisyon (CR), büyük ölçüde moleküler, sitogenetik sonuçlarını tarafından yönlendirilir sonrası iyileşme tedavi ardından elde etmek amacı ile geçerli yönetimi içerir ve immunophenotypic çalışmaları ve aşağıdakilerden oluşur çeşitli kurslar ek kemoterapi veya (Otolog veya allojenik) kök hücre nakli3. Sonra 90 %'e kadar 5 yıllık sağkalım erişkinlerde yoğun kemoterapi sadece yaklaşık % 30-% 40, ağırlıklı olarak gelişimi nedeniyle yüksek remisyon oranları rağmen Genellikle kemoterapi için dayanıklı ve tedavi etmek böylece çok zor olan relapses. Her ne kadar yaklaşık üçte biri de Relaps sonucu çocuklarda iyidir. Bu nedenle, erken teşhis yakın nüks karşılanmamış bir tıbbi ihtiyaç doldurur ve sonrası iyileşme terapi4Kılavuzu.
Terapi tüm tanı ve sonrası tanı direnç mekanizmaları/faktörler toplamına yansıtabilir sonra kalan hastalığı; Bu nedenle onun ölçüm prognostik ve tedavi rehberlik için vesile olabilir. Deﬁning rezidüel hastalığı (minimal rezidüel hastalık ve şimdi da adlandırılır olarak ölçülebilir artık hastalık veya MRD adı) %5 blast hücre morfolojik ölçütü altında olasılığı risk classiﬁcation manzara değişiyor. Şu anda Akış Sitometresi ve moleküler tabanlı, ikinci çoğunlukla MRD algılamak için kullanılan iki yöntem vardır transkriptaz PCR (RT-qPCR)5 tarafından değerlendirildi veya bir erken aşamada rağmen nesil tarafından (NGS) sıralama. Erişkinlerde de çocuk gibi birçok çalışma zaten çeşitli MRD yaklaşımlar AML hem indüksiyon ve Konsolidasyon terapi6,7ve hastalık yükü () yeni bir tanımı sonra güçlü prognostik bilgileri sağlar gösterdi Şimdi8üstün morfolojik CR) ortaya çıkıyor. Bu MRD akış tarafından değerlendirildi ve/veya moleküler teknikleri olması gerektiğini ve aslında zaten, her klinik AML içinde standart hale gelmektedir olduğunu göstermektedir.
Bu el yazması MRD bir doğru ve tekrarlanabilir immunophenotypic karakterizasyonu yapılan kemik iliği örnekleme dahil olmak üzere ve Akış Sitometresi önceki yordamları işleme kemik iliği elde etmek için ayrıntılı Akış Sitometresi yordamı anlatılmaktadır. Kaliteli kemik iliği örnekleri tanı ve takip kullanılabilirliğini klinik siteleri ve klinik çalışmalar arasında bu ölçüm başarısı için çok önemlidir. Aslında, önceden analitik bu hususlar da moleküler (PCR ve NGS) için hayati önem MRD yaklaşımlar vardır. MRD immunophenotypic karakterizasyonu için aberrantly ifade işaretleri normal myeloid ve lösemi ilişkili immunophenotype (LAIP)9tanımlamak için yaratıcı işaretleri ile birleştirilir. MRD içsel veya alınan lösemi ilaç direnci, özellikler ve Kinetik terapi, immün gözetim ve uyum gibi tedaviye yanıt etkileyen pek çok faktör sonuç ölçer. Bu nedenle, MRD klinik sonuç alıcı işletim karakteristik (ROC) analiz tarafından belirlenen bir kesme düzeyde dichotomized ile ilgili bir çok güçlü sonrası tanı prognostik parametresidir. HOVON 42a için bizim yetişkin AML kohort çalışma, cut-off düzeyi %0,1 LAIP pozitif hücreler/toplam beyaz kan hücreleri olarak ayarlanır. Bu ölçüt kullanarak negatif vs olumlu MRD durumu belirlemek için bir grup hastaların önemli ölçüde daha kötü nüks insidansı, nüks-Alerjik ve genel yaşam6olan tespit edilebilir. Buna ek olarak, hasta sonuç10güçlü bir tahmin sunan ölçüm kök hücre gibi özelliklerle (CD34 + CD38-lösemi kök hücre veya LSC), olgunlaşmamış, ilaca dirençli lösemi hücrelerinin açıklar. Birlikte LAIP ve LSC form akış sitometrik MRD yaklaşım yaklaşıyor. LSC yaklaşım hastaların yaklaşık % 80 uygulanabilir iken LAIP hastaların yaklaşık % 90'uygun yaklaşımdır. Hastaların % 95'i değerlendirilen bir parametre veya her ikisi için birlikte bitti.
Son olarak, bu yayın Akış Sitometresi tarafından MRD değerlendirmek için ayrıntılı bir operasyonel açıklama sağlar. Bu içerir: 1) uyum ve/veya kemik iliği örnekleme prosedürleri standardizasyon, 2) örnek ulaşım rehberlik 3) ayrıntılı açıklama lösemik hücre algılama tek hücre tüp yaklaşımlar da dahil olmak üzere çeşitli antikor paneller kullanarak FACS ile LSC'yi 4 karakterize etmek için) FACS up makineleri standart ölçüleri, 5) MRD ölçümleri ve 6 için analitik programları) LSC algılama için analitik programları.
Biz nihai sonuç kalitesi için önemli bir konu ise bu nadiren anlatılan bu yana numune hazırlama dahil yordamı tüm yönleriyle göstermeyi hedefliyoruz. Kemik iliği aspirasyon ve biyopsi hematopoetik hücrelerin kemik iliği içinde değerlendirmek için kullanılan klinik işlemlerdir. Bunlar bir tam kan sayımı (CBC) ve kan yayması ile birlikte gerçekleştirilir. Kemik iliği aspirasyon için en uygun yöntemi doğru tanı ve takip MRD ölçüm için önemlidir. Buna ek olarak, başarılı kemik iliği aspiratı LAIP ve LSC akışı analizi (en az 10 milyon hücrelerin) gerçekleştirmek için yeterince hücre içermesi gerekir. Burada, kemik iliği yerine getirmek için kullanılan yöntemi açıklamak ve yeterli hücre örnekleme (ve sınırı hemodilution için potansiyel) gerekli doğru teşhis ve ek araştırma için neden yönergeleri sağlar. Önceden analitik bu hususlar da moleküler (PCR ve NGS) için hayati önem MRD yaklaşımlar vardır. İmmunophenotyping için tüm örnekler koleksiyon tercihen 24 h içinde işlenip. Her ne kadar değil tavsiye, kemik iliği ve periferik kan örnekleri hala işlenen ve analiz en fazla 72 saat ortam sıcaklığında tutulur. Buna ek olarak, tüm handlings malzeme ile steril koşullarda, daha sonra araştırma/kalite değerlendirmesi vb için steril hücre dondurma etkinleştirmek için yapılmalıdır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >120995496,060996589 and 013729</td>
			<td >FACS Canto II&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >555360</td>
			<td>CD7 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >DAKO</td>
			<td >F076701</td>
			<td>CD2 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Sanquin</td>
			<td >M1613</td>
			<td>CD36 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >332778</td>
			<td>CD15 FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>335039</td>
			<td>CD45RA FITC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345810</td>
			<td >CD56 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >337899</td>
			<td >CD22 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345785</td>
			<td >CD14 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Miltenyi Biotec</td>
			<td >130-080-801</td>
			<td >CD133 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562566</td>
			<td>Clec12a PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565568</td>
			<td>Tim-3 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >332774</td>
			<td >CD7 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >333142</td>
			<td >CD11b PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >337899</td>
			<td >CD22 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345810</td>
			<td >CD56 PE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >347222</td>
			<td >CD34 PERCP-CY5.5</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558714</td>
			<td>CD123 PERCP-CY5.5</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Beckman Coulter</td>
			<td>B49221</td>
			<td >CD117 PE-CY7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562854</td>
			<td>CD33 BV421</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345791</td>
			<td >CD19 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >333143</td>
			<td >CD11b APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >345800</td>
			<td >CD33 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>345807</td>
			<td>CD38 APC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >641411</td>
			<td >HLA-DR APC-H7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560532</td>
			<td>CD44 APC-H7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td >562596</td>
			<td >CD13 BV421</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>348811</td>
			<td>CD34 PE-CY7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Beckman Coulter</td>
			<td>A96416</td>
			<td >CD45 Krome Orange</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>655873</td>
			<td >CD45 HV500c</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >655051</td>
			<td>CST beads&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >555899</td>
			<td>Pharm lysing solution</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >644204</td>
			<td>Multicolor CompBeads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >655051</td>
			<td>CST beads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td ></td>
			<td>FACSDiva software</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Cytognos</td>
			<td ></td>
			<td >Infinicyt&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Spherotech</td>
			<td>Euroflow RCP-30-5a</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td ></td>
			<td >Tuerk solution</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td >Spherotech</td>
			<td>BCP-100-5</td>
			<td>Blank Calibration Particles Beads</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >HSA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >Azide</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >&#160;&#160;</td>
			<td >ddH2O</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

comprehensive protocol to sample and process bone marrow for measuring measurable residual disease and leukemic stem cells in acute myeloid leukemia

Akut Miyeloid Lösemi (AML) yanıt kriterleri son zamanlarda yeniden kurulmuş, hastaların tam remisyon (CR) elde etmiş olup olmadığını belirlemek için kullanılan morfolojik muayene ile. Yaklaşık yarısı CR giren erişkin hastaların kemik iliği artık AML hücrelerinde akıbet nedeniyle 12 ay içinde Relaps. Bu lösemi hücreleri, en küçük veya ölçülebilir rezidüel hastalığı olarak (MRD), bilinen kalan Nefelometri bu çabaladıkça tahmin için sağlam bir biyomarker olabilir. Ayrıca, çeşitli çalışmalarda retrospektif analizi MRD huzurunda kemik iliği AML hastalarının zavallı hayatta kalma ile karşılıklı olarak ilişkilendirir göstermiştir. Sadece toplam lösemik nüfus, yansıyan hücreleri tarafından bir lösemi yataklık bağışıklık-fenotip (LAIP), klinik sonuçlar ile ilişkili ilişkili ama böylece olgunlaşmamış düşük frekanslı subpopulation lösemi kök hücre (LSC), bunların her ikisi de olabilir Akış Sitometresi MRD veya MRD benzeri yaklaşımlar üzerinden izlenir. Rezidüel Lösemi (kök) hücre hastalığa özgü veya hastalık ilişkili özelliklerini (anormal moleküler işaretleyiciler veya anormal immunophenotypes) temelinde algılanabilmesi hassas deneyleri kullanılabilirliğini büyük ölçüde geliştirilmiş MRD değerlendirme var AML içinde. Ancak, doğal heterojenite ve AML karmaşıklığı bir hastalık olarak göz önüne alındığında, kemik iliği örnekleme ve MRD ve LSC analizi gerçekleştirmek için yöntemleri mümkün olduğunda uyumlu. Bu el yazması yeterli kemik iliği aspiratı örnekleme için detaylı bir metodoloji açıklayan, taşıma, örnek en iyi çok renkli Akış Sitometresi değerlendirmesi için işleme ve stratejileri MRD ve LSC tedavi karar vermede yardımcı olmak için değerlendirmek için geçişi AML hastalar için.

AML hastalarının % 90 en az bir LAIP tespit edilebilir. LAIP + hücre tanı, ilkel blast hücrelerinin doğru oranlarda oluşturmak için patlama geçidi uygun ayarı çok önemlidir ve doğrulama olarak görüntülenmeyecektir şekil 3' te ihtiyacı var. Aberrancy CD34 + ilkel hücreler üzerinde belirli bir türünü barındıran her hasta örneği şekil 5' te görüntülenir. MRD takip-up, ölçüm için daha önce tanımlanmış LAIP + hücrelere Geçişli ve LAIP + WBC hücrelerin yüzdesi olarak tanımlanan. Bu nedenle bu kapı ayarı doğru MRD sonuçlar elde etmek önemlidir. Şekil 6 tam iyileşme döneminde kalan hasta ve MRD olumlu sonuçlar (≥ % 0.1) yaptıktan sonra relapses bir hasta sonra indüksiyon tedavisinin döngüsünün ikinci gösterir.
Geçerli protokol sadece bu bölümü ayrıntılı karakterizasyonu CD38-nüfus en güçlü kök hücre kesir gibi limanlar göstermiştir bu yana CD34 + hücre, kök hücre tanımlamak uygundur. LSC'yi HSC bu kesir içinde ayırmak için ek işaretleri kullanılır. LSC ayırt etmek için en sık seçilen işaretleri CD45RA ve PE ile etiketli 6 belirli LSC işaretleyicileri saklandığından Kombi kanal'dır. Daha fazla klinik değerlendirme üzerinde bağlı olarak, ≥ %0,004 kesme düzeyini LSC-pozitif tanımlanmıştır ve %0,0001 kesme düzeyini mağaza-up10, kullanılan süre tanı, daha kötü hayatta kalma ile ilişkili olduğu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig1.jpg"> Resim 1 : Kemik iliği smear. A) sağlıklı donör ve B) AML hasta (FAB 5 alt türü). 100 x büyütme oranında gösterilen Giemsa leke. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig2.jpg"> Resim 2 : Düzeltmek biyolojik sıvılar için ambalaj malzemesi. Ve biyolojik sıvı taşıma kuralları hakkında daha fazla bilgi Web sitesi15 merkezleri hastalık kontrol ve Önleme için bulunabilir. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig3.jpg"> Şekil 3 : Blast hücre tanımlamak için strateji geçişi. A) CD45dim, B geçişi) çoğunluğuna CD34 + patlamalar.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig4.jpg"> Şekil 4 : Lenfositler geçişi. A) mavi hücrelerdir gösterilir FSC/SSC mezarlığına B) yeşil hücreleri lenfositler CD45yüksek/SSCdüşüktarafından C ile karakterize WBC) CD34, D) olumsuzluk CD117 ve olumsuzluk E) CD13 için için için olumsuzluk örnekleri F) farklı hücre tipleri içinde gösterilir bir genel nüfus ağaç. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig5.jpg"> Şekil 5 : AML tanı, LAIPs. A) LAIP dayanan soy aberrancy (CD7 CD33 ifade hücreleri üzerinde), B) LAIP dayalı zaman uyumsuz farklılaşma (CD11b CD13 ifade hücreleri üzerinde), C) LAIP overexpression (hücreleri ifade CD34çok yüksek CD13 üzerinde), normal hücrelere kıyasla dayalı D). LAIP (hücreleri ifade HLA-DRdüşük CD33) normal hücrelere kıyasla underexpression temel. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig6.jpg"> Şekil 6 : LAIP takip tedavisi sırasında uyuşukluk görülebilir. Tanı A) LAIP tanımı (CD34 + / CD13 + / CD33-) ve LAIP kaybı sırasında sürekli tam remisyon, tanı B) LAIP tanımı kaldı bir hastada takip (CD117 +/ CD7 +/ CD33 +) ve LAIP sürdürme sırasında bir hastada takip kim kötüleşmiş. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56386/56386fig7.jpg"> Şekil 7 : Kök hücre geçişi. a) Gating farklı CD34 + / CD38 nüfus tabanlı (CD38düşük 's boncuklar,çok düşük LSC'yi temsil eden gerçek negatif hücreleri tanımlanan ve boncuk medyan yer alan CD38 süre üst kenarının aşağıda) boncuk üzerinde B) iki hastalar CD45RAnegatif ve CD45RApos ifade dayalı takip, HSC ve LSC arasında ayrım ile örnekleri. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/56386fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Ek dosya 1. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Sampling_Form_MRD_1.pdf" target="_blank">Downoad için Resimi Tıklayınız.</a>
Ek dosya 2. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Sampling_Form_MRD_2.pdf" target="_blank">Downoad için Resimi Tıklayınız.</a>
Ek dosya 3. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56386/Supplementary_information_revised_Cloos_et_al_final2018.docx" target="_blank">Downoad için Resimi Tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia at JoVE.c

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

En küçük veya ölçülebilir rezidüel hastalığı (MRD) tespiti risk değerlendirme rafine ve Relaps Akut Miyeloid Lösemi (AML) içinde tahmin için önemli bir prognostik biyomarker olduğunu. Bu sõnõrlar ve önerileri ile tutarlı ve doğru kimlik ve MRD, tespiti için en iyi yöntemler yardımcı etkili AML tedavi karar verme.

Örnek ve işlem kemik iliği ölçülebilir artık hastalık ve akut Myeloid lösemi lösemik kök hücre ölçmek için kapsamlı iletişim kuralı

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

The overall goal of this protocol is to perform an accurate testing of bone marrow samples from acute myeloid leukemia patients for measurable residual disease including the quantification of leukemia stem cells. This method can provide an accurate assessment of measurable residual disease in bone marrow samples of acute myeloid leukemia patients. The main advantage of this approach is that a close following of the protocol yields highly-reproducible, high-quality results.The implications of this technique extends toward clinical decision-making as it can be used as a read-out of patients'response to treatment. Demonstrating the procedures will be Jeroen Janssen, hematologist, Gerrit Sijm, technician of the diagnostic hematology laboratory and Jennifer Scheick and Sander Snel, technicians of the MRD team. With the patient in the lateral decubitus position, mark the superior posterior iliac spine with a pen and disinfect the skin of the intended biopsy area with 0.5 to 1%chlorhexidine in ethanol in an outward circular motion.After administering a local anesthetic, pick up a 15-gauge 2.8-inch needle with the proximal end in the palm and the index finger against the side of the metal shaft of the needle near the tip for control. Using gentle but firm pressure, introduce the needle with a quick alternating pronating supinating movement through the anesthetized skin toward the iliac spine. When the needle comes into contact with the posterior iliac spine, remove the stilette and attach an empty 10-milliliter syringe to the needle.Gently withdraw the plunger to create negative pressure within the syringe until up to 10 milliliters of bone marrow spicules have been harvested. Do not take more than 10 mils of bone marrow per aspirate to avoid hemodilution. Remove the syringe and place the stilette back onto the needle.Then, eject about two milliliters of the marrow into a watch glass and ensure that enough sample is drawn to be injected into a heparin-coated eight-milliliter tube and immediately invert the tube. To prevent clotting, it is important to invest the anticoagulant-containing tube as soon as the bone marrow is added. For optimal morphological assessment, use a plastic spatula to transfer spicules from the aspirate in the watch glass onto a glass slide, and carefully glide another glass slide on top of the marrow.After drying, stain the spicules with May-Grunwald Giemsa for analysis by light microscopy. Place the bone marrow tube in a plastic holder and place the holder into a plastic container with an ambient gel pack and a completed request form. Before analyzing the bone marrow by flow cytometry, start up the flow cytometer and open the flow cytometry analysis software to create a new experiment with a forward scatter versus side scatter dot plot.For assessment of the size and granularity of the cells, load unlabeled lysed peripheral blood cells from a healthy donor and select the Acquire Cells function. Gate the lymphocytes and adjust the forward and side scatter voltages to reach the appropriate mean target values for the gated cell population. Then, acquire data for at least 10, 000 events.To set up the target florescence channel photo multiplier tube voltages, first use eight-peak rainbow bead calibration particles according to the manufacturer's instructions to acquire 10, 000 events at a low flow rate. Gate the singlet beads in the forward versus side scatter dot plot followed by gating the 7th peak in the FITC-PE dot plot. Gate the resulting bead populations for each fluorophore.Continue the acquisition of the eight-peak rainbow bead suspension and adjust and fine-tune PMT voltages in all fluorescence channels to reach target MFI values according to the manufacturer's instructions. Use Record to collect data of about 2, 000 events and check the MFI for the 7th peak beads. Next, add a sufficient volume of each experimental flourochrome conjugated antibody to stain the beads in the corresponding florescence tubes minus one control and vortex the tubes thoroughly.Create a new blank experiment with the same compensation parameters taking care that the forward scatter threshold is set to 5, 000 and the compensation values of all the flourochromes are zero. To create the compensation controls, select the Create Compensation Control function and load the unstained control tube. Adjust the P1 gate around the singlet bead population and confirm that the P1 gate contains only singlet beads.Right-click the P1 gate and select Apply to All Compensation Controls. Then, record data for all of the single labeled florescence tubes confirming that the P2 gate encompasses the positive population on each florescence histogram. To stain the cells for flow cytometric analysis, transport the bone marrow to the laboratory, check the request form to verify patient study number and date of birth and determine what needs to be stained.For MRD, we use a staining panel consisting of four tubes. Here we demonstrate the staining of the LSC panel which consists of one tube. After cell count, transfer the appropriate volume of bone marrow into a new 15-milliliter tube.Add lysis buffer at 10 times the experimental cell volume to lyse the red blood cells. Invert the tube to mix and incubate the cells for 10 minutes at room temperature. At the end of the lysis period, pellet the cells by centrifugation.Resuspend the cells in 15 milliliters of wash buffer at room temperature and harvest the cell pellet again by centrifugation. In the meantime, pipette the appropriate amount of antibody cocktail solution in five-milliliter FACS tubes. Shown here is the panel for the stem cell tube.Resuspend the pellet in wash buffer and add the cell's suspension to the FACS tube containing the monoclonal antibody cocktail solution for a 15-minute incubation in the dark. Then, wash the cells in wash buffer and pellet the cells by centrifugation. After centrifugation, resuspend the pellet in 400 microliters of fresh wash buffer.To analyze the leukemic stem cells, add four microliters of blank beads to the cell suspension that is stained with the stem cell antibody cocktail. Then, read the samples using the previously set parameters acquiring at least four times 10 to the 6th events from the experimental patient samples. To identify the leukemia-associated immunophenotype observed in approximately 90%of acute myeloid leukemia patients, it is crucial that the blast gates are set appropriately as illustrated.Here, examples of data from individual patients harboring different types of aberrancy on the CD34-positive primitive cells are shown. In these graphs, a patient who remains in complete remission and a patient who relapsed after having measurable residual disease positive results after the second cycle of induction therapy can be observed underscoring the need for accurate gate setting prior to sample analysis. The identification and quantification of LSC requires additional analysis of aberrancies specifically on CD34-positive CD38-negative blast cells as shown in these graphs.While performing this protocol, it's very important to have specialized and backup personnel for the bone marrow sampling, the transport, the experimental work and analysis steps of this procedure. This procedure can also be used to perform cytogenetic and molecular analysis to answer additional questions about the correlation between specific cell populations and molecular aberrancies of interest, or to refine the risk group of a patient for predicting clinical outcome. After its development, this technique paved the way for researchers in the field of hematology to explore residual disease in AML patients after treatment.After watching this video, you should have a good understanding how we accurately identify and quantify residual disease by using flow cytometry including the collection and transportation of bone marrow samples of AML patients.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Detailed Protocol for Characterizing the Murine C1498 Cell Line and its Associated Leukemia Mouse Model

Fare C1498 Cep Hattı ve İlişkili Lösemi Fare Modeli Karakterizasyonu için Detaylı Protokolü

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of ...

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

Diffüz İçsel Pontine Glioma Hızlı post-mortem Hücre Kültürü için Protokol (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

Birincil Akut lenfoblastik lösemi hücreleri hazırlanmasında farklı hücre döngüsü aşamaları santrifüj Elutriation tarafından

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Yukarı doğru hareket: Bir basit ve esnek Vitro üç boyutlu işgali tahlil iletişim kuralı

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up

Akış Sitometresi lösemi kök hücre birincil Akut Miyeloid Lösemi ve hasta-türetilen-xenografts, tanı ve takip yukarı tahmin etmek için

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous, and if not treated, fatal disease. It is the most common cause of leukemia-associated mortality in ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Calvaria Co-culture ve Histomorfometri Kullanarak Kemik Remodeling ve Tümör-Kemik Mikroortamı yeniden oluşturma

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Murine Hematopoetik Kök ve Progenitor Hücrelerde Mitokondriyal Reaktif Oksijen Türlerinin Akış Sitometrik Analizi ve MLL-AF9 Tahrikli Lösemi

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Two Flow Cytometric Approaches of NKG2D Ligand Surface Detection to Distinguish Stem Cells from Bulk Subpopulations in Acute Myeloid Leukemia

Akut Miyeloid Lösemide Kök Hücreleri Toplu AltÜlmelerden Ayırt Etmek İçin NKG2D Ligand Yüzey Tespitinin İki Akış Sitometrik Yaklaşımı

Within the same patient, absence of NKG2D ligands (NKG2DL) surface expression was shown to distinguish leukemic subpopulations with stem cell properties ...

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...