Name: assessment of blood-brain barrier permeability by intravenous infusion of fitc-labeled albumin in a mouse model of neurodegenerative disease
Uploaded: 2017-11-08T14:00:00
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이 작품 "피코 Neuromed"에 의해 지원 되었고 건강 V.M. 게 "검색 전류"의 이탈리아 정부에 의해 자금

IRCCS Neuromed 동물 관리 검토 위원회에 의해 그리고 동물에 대 한 모든 절차 승인 &#34; Istituto 레 디 Sanità &#34; (허가 번호: 1163/2015-홍보) EU 지시문 2010의 지침에 따라 했다 / 63/EU 동물 실험에 대 한.
 1. 경 정 맥에 주입 FITC 민 솔루션의 준비 참고: 모든 실험 했다 매니페스트 (11 주 된) HD R6/2 마우스에 고 나이에 날 라와 일치 하는 성별 야생-타입 (WT) 제어 littermat...

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events.">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13 (9), 1400-1412 (2014).</li><li>Burgess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+human+Greatwall+results+in+G2+arrest+and+multiple+mitotic+defects+due+to+deregulation+of+the+cyclin+B-Cdc2/PP2A+balance.">Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A balance.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (28), 12564-12569 (2010).</li><li>Krueger, M., Hartig, W., Reichenbach, A., Bechmann, I., Michalski, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain+barrier+breakdown+after+embolic+stroke+in+rats+occurs+without+ultrastructural+evidence+for+disrupting+tight+junctions.">Blood-brain barrier breakdown after embolic stroke in rats occurs without ultrastructural evidence for disrupting tight junctions.</a> PLoS One. 8 (2), e56419 (2013).</li><li>Hirano, A., Kawanami, T., Llena, J. 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우리는 여기에 설명 하는 기술 두뇌 질병 조건 하에서 BBB 누설을 탐지 하는 데 주로 유용 합니다. BBB 역 기능은 다양 한 신경학 적 장애4의 일반적인 기능으로 관심을 얻고 있다. 우리는 이전 HD6같은 희귀 신경 질환의 마우스 모델에서 BBB 무결성의 초기 혼란을 설명 하기 위해이 방법을 사용.
이 방법은 정확 하 고 신뢰할 수 있는 결과 제공 ?...

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Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione

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Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

중앙 신경 조직 (CNS) 내의 항상성 적절 한 커뮤니케이션 및 신경 세포의 기능에 대 한 전제 조건입니다. CNS 실질은 단단히 봉쇄 주변에서는 내 피 혈액-뇌 장벽 (BBB), 주변 혈 류와 뇌 간의 인터페이스와이 두 지구1 사이 잡담에 중추적인 역할을 하 여 ,2. Bbb 등급은 복잡 하 고 동적 3 차원 구조는 주로 전문 마이크로-혈관 내 피 세포 (ECs) 세포 접합 단지-단단한 접속점 (TJs)-를 통해 서로 연결 하 고 pericytes에 의해 포위의 구성 신경 엔딩과 사이토 발 프로세스1,2.
생리 적인 조건 하에서 그대로 BBB의 매우 낮은 침투성 그리고 두뇌, 영양소와 다른 분자의 수송의 엄격한 규제를 보장 하 고 CNS에서 발생 하는 변화에서 독특한 보호를 제공 한다는 구성 및 가능성 주변에 대 한 신경 활동에 영향을 줄 수 있는 혈액의 모욕1,2,3.
그러나 BBB 무결성 및 그것의 향상 된 침투성의 많은 신경에 대 한 핵심 기능을 구성 하는 것 오랫동안 알려져 있다 및 신경 장애4 헌팅턴의 질병 (HD)5,6를 포함 하 여 이러한 장애 원인이 현상 여부 질병 과정에서 propagative 이벤트 아직 명확 하지 않습니다. 그러나 BBB 붕괴의 타이밍은 또한 애매 남아,, 우리의 그룹 및 다른 사람에 의해 증거 신흥 방해 BBB 무결성 늦은 이벤트를 질병의 진행, 하지만 오히려 초기 단계6에서,7 을 대표 하지 않는다 , 8, 장기 결과가 있을 수 있습니다.
이 염두에서에 두고, 그것은 성공적으로 대체 하 고 더 많은 타겟 개입의 수를 개발 하 고 질병의 진행 및 뇌 손상 예측에 유용한 전략을 개발 하기 위하여 조 neurodegeneration BBB 붕괴를 공개 하는 것이 중요 이러한 장애의 임상 결과 완화 BBB 장애의 신뢰할 수 있는 이미징, 그러므로, 실험 연구 및 뇌 질환의 임상 관리에 중요 한 중요성의 이다.
이 문서에서 우리는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시-알 부 민 (FITC-알 부 민)을 사용 하 여 HD 마우스 모델에서 BBB 침투성의 평가 대 한 성공적이 고 간단한 절차를 설명 합니다. FITC-민, 일반적으로 뇌 실질에는 장벽을 교차 수 없습니다의 넘쳐 흐름 BBB 누설의 지표로 측정 되었다. 이 기술은 쉽게 적응할 수 있는 쥐 및 다른 병리학 조건 cerebrovasculature 장애9,10특징 이다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin-fluorescin isothiocyanate conjiugate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A9771-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAb anti-Laminin</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB300-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CY3 anti-rabbit made in goat</td>
			<td>MILLIPORE</td>
			<td>AP132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SUPERFROST PLUS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Slips 24 X 50 mm</td>
			<td>Thermo Scientific (DIAPATH)</td>
			<td>61050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kilik Optimal Cutting Temperature (OCT) compound</td>
			<td>Bio Optica</td>
			<td>05-9801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Mounting Media</td>
			<td>VECTOR</td>
			<td>H-1500</td>
			<td>Mounting media with DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iNSu/Light Insulin Disposible Syringe</td>
			<td>RAYS Health &#38;Safety</td>
			<td>INS1ML26G13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G 1/2&#34;</td>
			<td>BD Microlance</td>
			<td>304000</td>
			<td>Needle for Insulin disposible Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>91003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#22 Disposable Scalpel blads</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10022-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Iris scissors 10.5 cm</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps #5745 45&#176; 0.10 x 0.06 mm</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps 10 cm</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps #5 0.1 X 0.06 mm</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical patch</td>
			<td>Medicalis</td>
			<td>34788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile disposable towel drape</td>
			<td>Dispotech</td>
			<td>TVO50VE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic Microscope</td>
			<td>NIKON</td>
			<td>SMZ 745 T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optic Illuminator LED light (C-FLED2)</td>
			<td>NIKON</td>
			<td>1003167</td>
			<td>Optic Illuminator for Stereoscopic Micrscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ni-U Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>932162</td>
			<td>Epifluorescence Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope digital Camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Ri2</td>
			<td>Microscope camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intenslight</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>C-HGFI</td>
			<td>Microscope lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements 64 bit</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>AR 4.40.00</td>
			<td>Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Razor</td>
			<td>Gemei</td>
			<td>GM-3007</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of blood-brain barrier permeability by intravenous infusion of fitc-labeled albumin in a mouse model of neurodegenerative disease

혈액-뇌 장벽 (BBB) 무결성의 중단은 다른 신경 및 신경 퇴행 성 질환에 대 한 일반적인 기능입니다. 교란된 BBB 항상성 및 뇌 질환의 병 인 사이 상호 작용 추가 조사 필요, 비록 개발 및 BBB 변경 정확 하 게 감지 하는 신뢰할 수 있는 프로시저의 유효성 검사 중요 한 그리고 유용한 도구를 대표 잠재적으로 질병을 예측에 대 한 진행 및 개발 대상 치료 전략.
여기, 우리는 그런 결함 BBB의 침투성에는 천재에 명확 하 게 감지할 수 있는 헌팅턴 질병의 전 임상 마우스 모델에서 발생 하는 신경 상태에서 BBB 누설을 평가 하기 위한 간단 하 고 효율적인 절차를 제시 질병입니다. 특히,는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시 (FITC)-알 부 민, 장애인은 경우에 BBB를 교차 수 있는 마우스 경 정 맥 혈관 이나 parenchymal 지구에 그것의 배급에 심하게 융합은 다음 형광 현미경 검사 법에 의해 결정 됩니다.
뇌 실질에 녹색 형광 민의 축적 탈 BBB 침투성의 색인 기능 그리고 때 quantitated J 이미지 프로세싱 소프트웨어를 사용 하 여 그린 형광 강도로 보고 됩니다.

적절 한 주입 FITC 민의 BBB는 두뇌 parenchymawhen으로 혈 류에서 녹색 형광 추적 프로그램의 넘쳐 흐름에 경 정 맥 결과6손상. 생리 적인 조건 하에서 생긴된 형광 민의 뇌 혈관의 내부에 제한 된 이며 주변 혈관 주위 지역 및/또는 뇌 실질에 신호 감지 (그림 1A, 현미경에는 탑)입니다. 반대로, BBB 신경 병 적인 상황에서 손상 될 때 FITC 민 ?...

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Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

이 연구에서 우리는 신경 퇴행 성 조건 하에서 혈액-뇌 장벽 장애를 평가 하기 위한 간단 하 고 효율적인 절차를 제시. 우리의 목표를 달성 하기 위해 우리는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시 (FITC) 주입-마우스 경으로 알 부 민 정 맥 및 형광 현미경 검사 법에 의해 뇌 실질에 그것의 누설을 평가.

FITC 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

The overall goal of this procedure is to assess the brain-blood barrier permeability in a mouse model of degenerative disorder by intrajugular injection of FITC-labeled albumin. This method can help answer the key questions in the study of brain homeostasis. It can be particularly useful to investigate any possible link between blood-brain barrier damage and neurodegeneration.The main advantage of this technique is that it is fast and easy to perform and can be applied, also, to larger animal models and to other neuro-pathological settings. Demonstrating the surgical procedure of intrajugular injection of FITC-albumen will be Luca Capocci. Salvatore Castaldo will demonstrate the histological sectioning of a brains.And Enrico Amico will demonstrate the procedure for micrograph acquisition. Begin by preparing FITC-albumen solution by dissolving FITC-albumen powder in phosphate buffered saline at 10 milligrams per milliliter. Lay out the autoclaved surgical instruments.Clean the surgical bench with 70%ethanol and place a surgical sterile disposable drape. Then set up the operating stereo microscope. After anesthetizing the mouse with an intraperitoneal injection of an appropriate does of ketamine xylazine solution, monitor animal sedation by giving a gentle toe pinch and ensuring the absence of the withdrawal reflex.Place the anesthetized mouse in a face-up supine position and fix the four legs and the tail on the surgical workbench with adhesive tape. After the mouse is secured, carefully shave the appropriate surgical margin on the neck and disinfect it with povidone-iodine solution in 70%ethanol. Dry the exposed shaved surface with cotton swabs.Next, after making a 1.5 centimeter long longitudinal incision in the mid-clavicular line, starting midway on the thorax and extending to just below the neck, carefully stretch apart connective tissue with forceps under microscopic observation to expose the external jugular vein. Ensure sufficient space on the right and on the left of the jugular vein to facilitate the insertion of the 30 and a half gauge needle for the infusion of the FITC-albumen solution. Inject 100 microliters of 10 milligrams per milliliter FITC-albumen in the right jugular vein over three minutes.This is the most critical step during the procedure. Incorrect insertion of the needle can cause irreversible damage of the vein wall and compromise the entire experiment. Fifteen minutes after injection, after euthanizing the mouse by decapitation, rapidly remove the brain from the skull and immerse it in a volume of pre-chilled isopentane, that is ten times that of the brain, for 15 minutes.Move the isopentane frozen brain into a pre-chilled tube and store it in a 80 degrees Celsius freezer until histological sectioning. Embed frozen brain in optimal cutting temperature compound prior to cryostat sectioning. Cut the brain into 20 micron thick sections with a cryostat and mount them onto microscope glass slides.Perform the FITC-albumin laminin co-staining by using a specific anti-laminin antibody, as previously described. Cover slip slides with mounting medium containing DAPI and leave the slide to dry overnight at four degrees Celsius in the dark. The next day, observe the fluorescence staining under a fluorescence microscope at 20 times magnification, equipped with both FITC and Cy3 filters.Turn on the fluorescence lamp about 10 minutes before use. Turn on the microscope, the connected computer and the digital camera. Run the image analysis software.Use the appropriate objective for optimal signal collection and spatial resolution and select appropriate filters. Acquire a minimum of four, 24-bit color exposures per brain slice. Analyze the fluorescence intensity for each single channel, using the freely available ImageJ software.The following representative fluorescence micrographs of brain cryosections show differential distribution of green fluorescent albumin under both physiological and pathological conditions. The red staining, shown here, represents the vascular marker, laminin, under physiological conditions and under conditions of blood-brain barrier compromise. These merged images show co-localization of green fluorescent albumin and laminin, along with DAPI staining of nuclei in the intact and compromised blood-brain barriers.This graph displays the quantification of the green fluorescence emitted by FITC-albumin, which is reported as the green fluorescence intensity in both healthy and compromised conditions. While attempting this procedure, it's important to remember to freshly prepare each single reagent and predispose the surgical bench. After watching this video, you may have a good understanding of how to assess the permeability of the blood-brain barrier in an animal model of neurodegenerative disease, by measuring the affixation of the green fluorescent albumin into brain parenchyma.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model

마우스 모델에서 정맥 주사 자기 관리를위한 방법

Animal models have been developed to study the reinforcing effects of drugs, including the intravenous self-administration (IVSA) paradigm. The advantages ...

연구

신경과학

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에 대한 후각 분석 실험

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

Vivo에서 혈액-뇌 장벽 침투성 분석 결과 사용 하 여 마우스에 붙일 추적기 표시

Blood-brain barrier (BBB) is a specialized barrier that protects the brain microenvironment from toxins and pathogens in the circulation and maintains ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain

병원 체 또는 의약품 및 두뇌와 그들의 상호 작용에 의해 장벽 횡단 연구를 인간의 혈액-뇌 인터페이스 모델

The early screening of nervous system medicines on a pertinent and reliable in cellulo BBB model for their penetration and their interaction with the ...

A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model

쥐 모델에서 집중 초음파를 사용하여 위치 특정 혈액 뇌 장벽 개방에 대한 벤치 탑 접근

Stereotaxic surgery is the gold standard for localized drug and gene delivery to the rodent brain. This technique has many advantages over systemic ...

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 장애의 유도 및 평가

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...

Drosophila Flies의 변비 분석

Measuring Constipation in a Drosophila Model of Parkinson's Disease

저자 스포트라이트: 파킨슨병의 비운동 증상 탐구 

파킨슨병의 초파리 모델에서 변비 측정

Non-motor symptoms in Parkinson's disease (PD) are common, difficult to treat, and significantly impair quality of life. One prevalent non-motor symptom ...