Name: a convenient method for extraction and analysis with high-pressure liquid chromatography of catecholamine neurotransmitters and their metabolites
Uploaded: 2018-03-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites at JoVE.com

Это исследование было поддержано Национальный фонд Китая науки (No.81172720, № 81673230), социального развития исследований программа Цзянсу провинция науки и технологий Департамента (No. BE2016741), Наука и технологии проект Китая общего управления по надзору за качеством, инспекции и карантина (2015QK055), Открытый проект программы ключевых лаборатории развития ребенка и обучения министерства образования, науки Юго-Восточный университет (ДКСТ-2016-04). Мы искренне признаем Юань песню и Ping Лю, который помогал нам в коллекции образцов.

Было получено информированное согласие от родителей, и было получено одобрение Советом институциональный обзор для изучения. Исследование было проведено в соответствии с кодексом этики Всемирной медицинской ассоциации (Хельсинкской декларации) для экспериментов с участием людей. Ух...

Предложенный метод PFSPE в этом документе может быть значительным и значимые связи его скорость, простота и удобство. Адсорбенты, используемые в протоколе, electrospun нановолокон, имеют высокие коэффициенты поверхности площадь и объем, который адсорбирует аналитов с высокой эффективностью. ?...

Медиаторы катехоламинов и их содержание метаболитов в жидкостях организма может повлиять на нервные функции и влияют на баланс ответ на стимул государств в значительной степени1. Аномалии может вызвать целый ряд заболеваний, таких как pheochromacytoma, ganglioneuroma, нейробластомы и неврологических расстройств1,2. Добыча и определения катехоламинов в жидкостях организма имеет смысл для диагностики соответствующих заболеваний. Однако катехоламинов в биологических образцах существует в низких концентрациях и легко окисляются. Кроме того они являются очень трудно элюировать вследствие большого объема вмешательства в средний3. Таким образом одновременное выявление катехоламинов в биологических жидкостях по-прежнему является проблемой.
Там были показаны что мочевых катехоламинов может быть мерой стресса, и что их уровни важных биологических маркеров, отвечая на тактильной стимуляции обработки новорожденных5отзывов. Согласно исследованиям все дети, которые страдают от преждевременной инцидентов подвергаются риску для мозга травмы4,5,6, и травмы может привести к ненормальной выпуска катехоламинов и связанные с этим вопросы в жидкости. Существуют расширенные магнитного резонанса методы, которые может обнаружить повреждение мозга в ранних фазах7,8. Однако в течение первых 48 часов, Аномальные нервной процесс приведет к постоянной мозговой травмой, что будет очевидным в медицинских изображений11. Кроме того инструмент высокая стоимость и ограниченные ресурсы, наряду с другими факторами, делает невозможным для всех отделениях неонатологии иметь доступ к эти специализированные методы нейро изображений. Однако использование легко доступным и практических биомаркеров (например катехоламинов и их метаболитов) может преодолеть эти недостатки, и показ биомаркера в жидкостей человека могут помочь в ранней диагностике черепно-мозговой травмы и привести к запрос Идентификация новорожденных нуждающихся нейропротекции9. Катехоламинов в моче может быть простой и очевидной индекса, из-за прямой корреляции между количество из них выпущены в жидкости и neuroactivity функции.
Среди биологических жидкостях, спинномозговой жидкости (CSF) и образцы плазмы не легко получить через существующие травматических процедуры, и это также очень трудно избавиться от вмешательства из-за клея белков и других примесей, ведущих к хлопотно и процесс времени выборки, который подходит для повторного обнаружения. Кроме того для детей, это практически невозможно получить образцы в травматических моды. Таким образом, мочеполовых выборки лучше, чем другие формы выборки, как это неинвазивный, легко работать и может быть повторно сделано. Обильные и легко хранить и показать большие преимущества над другими формами биологических образцов мочи.
Основные методы для количественного определения катехоламинов в биологических жидкостях включают radioenzymic анализов10, энзим соединенный иммунной сорбент анализов11,12 вольтамперометрии и тепловой линзы спектрометрии13. Но недостатки существуют, такие сложные операции и трудно обнаружить несколько целей. Сегодня техника доминирующей анализа является высокой производительности жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)14, в сочетании с чувствительной электрохимических15 или Флуориметрическое обнаружения16, из-за его высокой чувствительностью и хорошей селективности. С технологией тандем масс-спектрометрии, например жидкостной хроматографии/масс-спектрометрия (LC/МС) и жидких хроматография/масс спектрометрии/масс-спектрометрии (LC/МС/МС), анализ и количественной оценки нейротрансмиттеров можно достичь высокого точности и конкретности17,18. Однако MS техника требует дорогостоящей аппаратуры, а также существенно квалифицированной рабочей силы, делая метод трудно применять повсеместно в большинстве обычных лабораторий. ВЭЖХ-ECD систем обычно есть в самых обычных и клинических лабораториях и таким образом стать общей и хороший выбор для исследовательских групп для определения химических, но они требуют образца введены в систему, чтобы быть чистым и из микромасштабной объем19. Таким образом она имеет большое значение для очищения и уплотняют образца до анализа. Классический метод для очистки шаг — экстракции жидкости жидкостью14,,1520 и off-line твердофазный добычи, включая активированные глинозема столбец21,22 и diphenylborate (DPBA) комплексообразованию23,24,25,26.
Myeongho ли и др. использую полимерной смолы, химически модифицированных Корона эфира как адсорбент выборочно извлекать катехоламинов из мочи человека начиная с 2007 года27. Кроме того, в 2006 году он Haibo и др. продемонстрировал снисходительный синтеза подход для boronate сходства извлечения сорбент byutilizing композита на основе nanomagnetic functionalizable nanomagnetic олигомерных полиэдральных силсесквиоксанов (ПОСС) и применяя его к обогащению катехоламинов в мочи человека (норадреналина, адреналина и изопреналин)28. Они также воспользовались наноматериалов для выполнения работы, используя технологию под названием нано electrospinning и формирования полимерных волокнистых материалов в пределах нанометровых размеров элементов. Процесс electrospinning можно настроить диаметр, морфология и пространственной выравнивание продукта, управляя рабочее напряжение и изменения содержания спиннинг решения наряду с другими параметрами29. По сравнению с обычными картриджа SPE, electrospun nanofibers хорошо подходит для извлечения и обогатить целевой аналитов с сложной матрицы, как они оборудованы с высоким соотношением площадь поверхности и объем адсорбировать аналитов с высокой эффективностью, и проявляют более легко контролировать химических свойств поверхности, позволяет удобно прикрепление целевых соединений. Эти свойства делают их хорошим выбором для SPE адсорбентов, значительно снижает твердой фазы и десорбции растворителей сумма30,31,,32-33. Для катехоламинов в образцах мочи electrospun нановолокон, состоящий из apolymeric короны эфира с полистирола (PCE-PS) были использованы выборочно извлекать три катехоламинов ("NE", "E" и "Да")34. В документе отмечается, селективный эфира Корона адсорбированные целей NE, E и да, которая была основана на ее правильной геометрии для привязки катехоламинов через формирование водородных связей. Результаты отображаются материала эфира Корона эффективно, удаление других мешающих соединений, содержащихся в биологических образцах. Вдохновленный настоящего доклада, Роман был разработан метод для селективного извлечения катехоламинов с использованием electrospun композитный нановолокон, состоящий из PCE-ПС
В этом документе метод сообщалось ранее34 была улучшена и работают не только для анализа успешно E, NE и да, но и их метаболитов, MHPG и DOPAC, в моче. Мы также исследовать новые возможности для механизма процесса адсорбции. Метод показывает удовлетворяющих эффективности добычи и избирательности для пяти аналитов, и этот метод был проверен в анализе мочи от риска младенцев с перинатальной повреждения головного мозга и здорового контроля.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>200 &#181;L pipette tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>column to contain nanofibers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCE-PS nanofibers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>material for PFSPE extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>steel rod (about 0.5 mm diameter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>fill the nanofibres into the column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gastight plastic syringe (5 ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>compress solution into the end of the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diphenylborinic acid 2-aminoethyl ester(DPBA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>A-106408</td>
			<td>complex reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>norepinephrine(NE)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>A-9512</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol(MHPG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>H1377</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epinephrine(E)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>100154-200503</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3, 4-Dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>D-9128</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dopamine(DA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>H-8502</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3, 4-dihydroxybenzylamine hydrobromide(DHBA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>858781</td>
			<td>interior label</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich.Inc</td>
			<td>75-05-8</td>
			<td>eluriant and mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphoric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7664-38-2</td>
			<td>eluriant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>uric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>69-93-2</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>creatinine</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>60-27-5</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trisodium citrate</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>6132-04-3</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>12125-02-9</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>SWC0140326</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C2Na2O4</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>62-76-0</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaSO4</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7757-82-6</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urea</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>57-13-6</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7647-01-0</td>
			<td>artifical urine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>77-92-9</td>
			<td>artifical urine and mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA disodium salt</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>34124-14-6</td>
			<td>mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monometallic sodium orthophosphate</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td>artifical urine and mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-heptanesulfonic acid sodium salt</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>22767-50-6</td>
			<td>mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium hydroxide</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>mobile phase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylboronic acid column(PBA column)</td>
			<td>Aglilent</td>
			<td>12102018</td>
			<td>PBA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inertsil&#174; ODS-3 5 &#181;m 4.6&#215;150 mm column</td>
			<td>Dikma</td>
			<td>5020-06731</td>
			<td>HPLC column for seperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHIMADZU SIL-20AC prominence AUTO SAMPLER</td>
			<td>Shimadzu Corporation, Japan</td>
			<td>SIL-20AC</td>
			<td>auto injection for eluriant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHIMADZU LC-20AD High Performance Liquid Chromatography</td>
			<td>Shimadzu Corporation, Japan</td>
			<td>LC-20AD</td>
			<td>HPLC pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHIMADZU L-ECD-60A electrochemical detector</td>
			<td>Shimadzu Corporation, Japan</td>
			<td>L-ECD-60A</td>
			<td>detector for the analytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASAP 2020 Accelerated Surface Area and Porosimetry System</td>
			<td>Micromeritics, USA</td>
			<td></td>
			<td>surface and porosity analyzer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a convenient method for extraction and analysis with high-pressure liquid chromatography of catecholamine neurotransmitters and their metabolites

Извлечение и анализ катехоламинов нейротрансмиттеров в биологических жидкостях имеет большое значение при оценке функции нервной системы и сопутствующих заболеваний, но их точное измерение по-прежнему является проблемой. Многие протоколы были описаны для измерения нейромедиатора целого ряда инструментов, включая высокого давления жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Однако есть недостатки, такие сложные операции или трудно обнаружить несколько целей, которых нельзя избежать, и в настоящее время доминирующей анализа техника все еще ВЭЖХ, в сочетании с чувствительной электрохимических или обнаружения Флуориметрическое, из-за его высокая чувствительность и хорошей селективности. Здесь подробный протокол описан для предварительной очистки и обнаружения катехоламинов с жидкостной хроматографии высокого давления с электрохимической обнаружения (ВЭЖХ-ECD) в реальные мочи младенцев, с использованием композитного нановолокон electrospun состоит полимерных Корона эфира с полистирола как адсорбент также известный как метод экстракции (PFSPE) Упакованные волокна твердой фазы. Мы показываем как мочи которые образцы могут быть легко precleaned столбец нановолокно Упакованные твердой фазы, и как можно быстро обогащенный аналитов в образце, десорбированного и обнаруженных на систему РДРВ. PFSPE значительно упрощает предварительной процедуры для биологических образцов, позволяя сокращение времени, расходов и сокращение потерь целей.
В целом это работа иллюстрирует простой и удобный протокол для извлечения твердофазный сочетании ВЭЖХ-ECD системы для одновременного определения трех моноаминооксидазы нейромедиаторов (норадреналина (NE), эпинефрина (E), допамин (да)) и два их метаболитов (3-метокси-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) и 3,4-дигидрокси фенилуксусной кислоты (DOPAC)) в моче новорожденных. Протокол был применен к оценить различия мочевых катехоламинов и их метаболитов между риска младенцев с перинатальной повреждения головного мозга и здорового контроля. Сравнительный анализ показал значительную разницу в мочевыводящих путей MHPG между двумя группами, указав, что метаболитов катехоламинов может быть важным кандидат маркер для ранней диагностики случаев риску повреждения мозга у детей.

Этот протокол является простой и удобный метод PFSPE для предварительной обработки образцов мочи и обогащать пять катехоламинов для обнаружения через систему ВЭЖХ-ECD; Диаграмма процесса показан на рисунке 1. Протокол главным образом включает в себя четы?...

Watch this Scientific Journal Video about A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites at JoVE.com

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

Мы представляем удобный твердофазный извлечения для высокого давления жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в сочетании с электрохимической обнаружения (ECD) для одновременного определения трех моноаминооксидазы нейротрансмиттеров и два их метаболитов в моче новорожденных. Мы также определить метаболит MHPG как потенциального biomarker для ранней диагностики повреждения головного мозга для младенцев.

Удобный метод для извлечения и анализа с высокого давления жидкостной хроматографии и их метаболитов катехоламинов нейротрансмиттеров

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Нецелевые Метаболомики из биологических источников Использование UltraPerformance жидкостной хроматографии высокого разрешения масс-спектрометрии (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

Изоляция и подготовка бактериальных клеточных стенок для композиционного анализа с помощью ультра производительности жидкой хроматографии

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

Сапфир сотовый высокого давления для фазовых равновесий Измерения CO<sub&gt; 2</sub&gt; / Органические / Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. ...

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

Сообщение Колонка дериватизации с использованием реакции потока высокоэффективной жидкостной хроматографии Колонки

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Радиоактивной и Количественная клеточном уровнях фосфоинозитидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании-Flow мерцаний

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

A Method to Manipulate Surface Tension of a Liquid Metal via Surface Oxidation and Reduction

Метод манипулировать поверхностное натяжение жидкого металла с помощью поверхностного окисления и восстановления

Controlling interfacial tension is an effective method for manipulating the shape, position, and flow of fluids at sub-millimeter length scales, where ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

Высокое давление монокристалл дифракция при РХ ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Preparation and Reactivity of a Triphosphenium Bromide Salt: A Convenient and Stable Source of Phosphorus(I)

Preparation and Reactivity of a Triphosphenium Bromide Salt: A Convenient and Stable Source of PhosphorusI

Подготовка и реакционная способность Triphosphenium бромида соли: Удобный и стабильный источник фосфора (I)

We present herein the optimized synthesis of a triphosphenium bromide salt. Apart from being a versatile metathesis reagent, this unusually stable ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

Прямолинейный метод глюкозинолатов экстракции и анализа с высоким давлением жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

Двухступенчатый пиролиза-газ хроматографии метод с масс спектрометрическое обнаружение для идентификации татуировки чернила ингредиенты и контрафактной продукции

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...