Name: a simple approach to induce experimental autoimmune neuritis in c57bl/6 mice for functional and neuropathological assessments
Uploaded: 2017-11-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments at JoVE.com

DGG is een NHMRC Peter Doherty en Multiple sclerose onderzoek Australië (MSRA) vroege carrière Fellow. JLF wordt ondersteund door een MSRA Postdoctoral Fellowship. Dit werk werd gesteund door de Australian National Health en medische onderzoek Raad (NHMRC) project #APP1058647 aan JX verlenen.

alle procedures die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door het Florey-Instituut voor Neurowetenschappen en geestelijkegezondheid (Melbourne hersenen centrum) dier ethisch comité en volg de Australische gedragscode voor het gebruik van dieren voor wetenschappelijk Doeleinden.
 1. EAN inductie Opmerking: EAN kan met succes worden opgewekt bij mannelijke C57BL/6 muizen leeftijd tussen 6-8 weken. Het inductie-protocol duurt 9 dagen in totaal. Dag 0 verwijst naar ...

<ol>
	<li>Newswanger, D. L., Warren, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guillain-Barre+syndrome.">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 69 (10), 2405-2410 (2004).</li><li>Ruiz, E., Ramalle-Gomara, E., Quinones, C., Martinez-Ochoa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+Guillain-Barre+syndrome+mortality+in+Spain+from+1999+to+2013.">Trends in Guillain-Barre syndrome mortality in Spain from 1999 to 2013.</a> Int J Neurosci. 126 (11), 985-988 (2016).</li><li>Walling, A. D., Dickson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guillain-Barre+syndrome.">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 87 (3), 191-197 (2013).</li><li>Gonsalvez, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Functional+and+Neuropathological+Testing+Paradigm+Reveals+New+Disability-Based+Parameters+and+Histological+Features+for+P0180-199-Induced+Experimental+Autoimmune+Neuritis+in+C57BL/6+Mice.">A Functional and Neuropathological Testing Paradigm Reveals New Disability-Based Parameters and Histological Features for P0180-199-Induced Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 76 (2), 89-100 (2017).</li><li>Berg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guillain-Barre+syndrome:+pathogenesis,+diagnosis,+treatment+and+prognosis.">Guillain-Barre syndrome: pathogenesis, diagnosis, treatment and prognosis.</a> Nat Rev Neurol. 10 (8), 469-482 (2014).</li><li>Koller, H., Schroeter, M., Kieseier, B. C., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy--update+on+pathogenesis,+diagnostic+criteria+and+therapy.">Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy--update on pathogenesis, diagnostic criteria and therapy.</a> Curr Opin Neurol. 18 (3), 273-278 (2005).</li><li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+the+motor-sensory+axonal+Guillain-Barre+syndrome.">Pathology of the motor-sensory axonal Guillain-Barre syndrome.</a> Ann Neurol. 39 (1), 17-28 (1996).</li><li>Taylor, W. A., Hughes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+neuritis+induced+in+SJL+mice+by+bovine+P2.">Experimental allergic neuritis induced in SJL mice by bovine P2.</a> J Neuroimmunol. 8 (2-3), 153-157 (1985).</li><li>Zou, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P0+protein+peptide+180-199+together+with+pertussis+toxin+induces+experimental+autoimmune+neuritis+in+resistant+C57BL/6+mice.">P0 protein peptide 180-199 together with pertussis toxin induces experimental autoimmune neuritis in resistant C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Res. 62 (5), 717-721 (2000).</li><li>Miletic, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P0(106-125)+is+a+neuritogenic+epitope+of+the+peripheral+myelin+protein+P0+and+induces+autoimmune+neuritis+in+C57BL/6+mice.">P0(106-125) is a neuritogenic epitope of the peripheral myelin protein P0 and induces autoimmune neuritis in C57BL/6 mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 64 (1), 66-73 (2005).</li><li>Hafer-Macko, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+motor+axonal+neuropathy:+an+antibody-mediated+attack+on+axolemma.">Acute motor axonal neuropathy: an antibody-mediated attack on axolemma.</a> Ann Neurol. 40 (4), 635-644 (1996).</li><li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+nodal+changes+in+the+acute+motor+axonal+neuropathy+pattern+of+the+Guillain-Barre+syndrome.">Early nodal changes in the acute motor axonal neuropathy pattern of the Guillain-Barre syndrome.</a> J Neurocytol. 25 (1), 33-51 (1996).</li></ol>

Dit verslag schetst een eenvoudige methode om te induceren EAN met behulp van de P0180-199 peptide in C57BL/6 muizen, waardoor de kwantificering van belangrijke neuropathologische en functionele tekorten in muizen geïnduceerde met EAN. Verschillende bij het protocol van de EAN-inductie hier beschreven is het gebruik van verdoving tijdens het uitvoeren van de immunisatie injecties. Het gebruik van Isofluraan verdoving verbetert sterk de mogelijkheid om ervoor te zorgen dat het totale volume van entmateriaal su...

Melding gemaakt van perifere neuropathieën kunnen genetische oorsprong of verworven, met de verworven neuropathieën hebben beide metabole, ischemische, inflammatoire of giftige neerslagmiddelen. Deze ziekten zijn ook nuttig ingedeeld als axonale of demyelinative oorsprong. De meest voorkomende verworven demyeliniserende melding gemaakt van perifere neuropathieën Acute inflammatoire demyeliniserende polyneuropathie (AIDP zijn, ook bekend als het syndroom van Guillain-Barré, GBS) en chronische inflammatoire demyeliniserende polyneuropathie (CIDP)1, 2 , 3 , 4; beide zijn pathogenetically gekenmerkt door een auto-immune reactie gericht tegen de myelineschede, waardoor demyelinisatie van de perifere zenuwen. In deze ziekten, geactiveerde T-cellen Kruis het bloed zenuw barrière en genereren een immune reactie binnen de PNS. Activering van macrofagen binnen de zenuw dan veroorzaakt demyelinisatie via fagocytische aanval direct noch indirect via secreted inflammatoire mediatoren, resulterend in klinische handicaps zoals verlamming en sensorische dysfunctie5. Terwijl demyelinated axonen de mogelijkheid om te worden remyelinated na demyelinisatie behouden, remyelination wordt vaak vertraagd of onvolledig, resulterend in de gevoeligheid van de naakte axonen tot onherstelbare schade, welke is de belangrijkste oorzaak van permanente klinische handicap. Op dit moment de meest effectieve behandelingen zijn immunomodulerende, maar ondanks hun werkzaamheid, in veel gevallen het herstel is vaak traag en ~ 25% patiënten beleeft resterende functionele tekorten die aanzienlijk hun levenskwaliteit6verminderen, 7.
EAN is een veel gebruikte diermodel van demyeliniserende perifere neuropathie die waardevolle inzichten in de pathogenese en een middelen ter beoordeling van nieuwe therapeutische agenten4heeft. Dit model kan worden opgewekt in verschillende soorten zoals konijnen, ratten, muizen en cavia's, en wordt veroorzaakt door immunisatie met neurogene antigenen. Echter, uiteindelijk de succesvolle EAN-inductie hangt af van een passende immuunrespons voor ziekte optreden. Gezien de soorten (en intersite-species/stam) variaties in immune functie, hebben meerdere combinaties van antigenen en hulpstoffen ontwikkeld om met succes het induceren van EAN. In termen van lymfkliertest genetische hulpmiddelen is de C57BL/6 de meest gebruikte; de traditionele P2 eiwit peptide 57-81 (P257-81) waardoor de ziekte in de voor de ziekte vatbare SJL muis stam8 is echter niet in staat om illegale pathogenese leidt tot functionele tekorten in de stam van de C57BL/6. Gelukkig, overgevoeligheid paradigma's met behulp van de P0106-125 of P0180-199 peptides, geleverd in adjuvans gecombineerd met de injectie van pertussis toxine kunt overwinnen deze barrière, waardoor geavanceerde genetische hulpmiddelen om te worden gebruikt in de lymfkliertest EAN model.
Hier wordt een eenvoudige methode voor de inductie van EAN in de C57BL/6 muizen gepresenteerd. Daarnaast vindt u een gedetailleerde aanpak om te evalueren van de functionele en neuropathologische tekorten die is gekoppeld aan de ziekte. De P0180-199 peptide9 werd gekozen boven de P057-81 alternatieve10. Het P0180-199 model is beschreven voor de productie van minder ernstige klinische symptomen in vergelijking met de alternatieve P057-81 10, en daarom kunnen weerstaan van de invoering van potentieel schadelijke genetische verstoringen, herstellen van chirurgische procedures (zoals osmotische pomp implantatie), en is vatbaar voor loopband gait functie4testen. Echter kunnen de loopband gait functie tests en histologische protocollen beschreven hier gemakkelijk worden toegepast bij de studie van de ziekte in een P057-81 geïnduceerde variant.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>C57BL/6, male, 6-8 weeks old</td>
			<td>Australian Bioresources Cenre, WA, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>List Biological Laboratories, Inc., CA, USA</td>
			<td>#181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1M mouse-isotonic phosphated buffered salined (MT-PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Laboratories will have their own protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Pharmachem, QLD, Australia</td>
			<td></td>
			<td>Laboratories will have their own protocol for administration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P0180&#8211;199 peptide</td>
			<td>Wuxi Nordisk Biotech Co. Lt. SHG, CHN</td>
			<td></td>
			<td>P0180&#8211;199, sequence S&#8211;S&#8211;K&#8211;R&#8211;G&#8211;R&#8211; Q&#8211;T&#8211;P&#8211;V&#8211;L&#8211;Y&#8211;A&#8211;M&#8211;L&#8211;D&#8211;H&#8211;S&#8211;R&#8211;S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat killed Mycobacterium tuberculosis (strain H37RA)</td>
			<td>Difco, MI, USA</td>
			<td>#231141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant (FCA)</td>
			<td>Difco, MI, USA</td>
			<td>#263910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Electron Microscopy Services</td>
			<td>#15710</td>
			<td>Dilute to 4% PFA day of tissue collection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25% glutaraldheyde</td>
			<td>ProSciTech Pty Ltd, QLD, Australia</td>
			<td>#11-30-8</td>
			<td>Dilute to 2.5% glutaraldehyde day of fixation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australia</td>
			<td>SL189</td>
			<td>Create 10% (w/v) stock in 0.1M MT-PBS. Use at 0.03% (v/v).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australia</td>
			<td>SA030</td>
			<td>Use at 30% (w/v).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (OCT) medium</td>
			<td>Sakura Finetek, CA, USA</td>
			<td>#4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Merck Millipore, MA, USA</td>
			<td>#S30-100</td>
			<td>Use as antibody diluent at 10% (v/v) or other concentration determined by own laboratory.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X 100</td>
			<td>Sigma Aldrich, MI, USA</td>
			<td>#90o2-31-1</td>
			<td>Use in antibody diluent at 0.3% (v/v) or other concentration determined by own laboratory.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-amyloid precursor protein (APP)</td>
			<td>Invitrogen (Life Technologies), CA, USA</td>
			<td>S12700</td>
			<td>Used at 1:400 or titrate in own lab.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-contactin-associated protein-1 (Caspr)</td>
			<td>Gift from Prof Elior Peles, Wiezmann Institute of Science, Israel</td>
			<td></td>
			<td>Used at 1:500 or titrate in own lab.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Appropriate Alexa Fluor conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Molecular Probes (Life Technologies), OR, USA</td>
			<td>Various</td>
			<td>Use at 1:200 or titrate in own lab. Choice of species the antibody was raised in and Alexa Fluor chosen is at the discretion of each laboratory.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqueous mounting solution</td>
			<td>Dako (Agilent), CA, USA</td>
			<td>#S3023</td>
			<td>Each laboratory will have their own preference.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mL syringe with 301/2 g needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>#326105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 g needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>#305143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red ink pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any red ink pad or red food dye could be used to mark the animals&#39; feet.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DigiGate apparatus (includes treadmill)</td>
			<td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DigiGate Imaging System</td>
			<td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any timer may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DigiGait 8 Software</td>
			<td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Any appropriate dissecting microscope may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged slides</td>
			<td>Superfrost Plus, Lomb Scientific Pty Ltd</td>
			<td>SF41296SP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyrostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Any suitable cyrostat may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion equipment and dissecting instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Labs will have their own perfusion protoctols.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opaque humified chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Labs may produce their own using an opaque plastic container.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP pene</td>
			<td>GeneTex (USA)</td>
			<td></td>
			<td>Wax pencil, or surface tension may also be used to create a well around the tissue section.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeis LSM780</td>
			<td></td>
			<td>Any confocal microscope with appropriate laser lines may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/Image J</td>
			<td>National Institues of Health</td>
			<td></td>
			<td>Available from www.fiji.sc</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple approach to induce experimental autoimmune neuritis in c57bl/6 mice for functional and neuropathological assessments

Experimentele autoimmune neuritis (EAN) is een goed gewaardeerd experimentele model van perifere demyeliniserende auto-immuunziekten. EAN ziekte wordt veroorzaakt door het immuniseren van muizen met neurogene peptiden aan direct een inflammatoire aanval naar onderdelen van het perifere zenuwstelsel (PNS). Recente ontwikkelingen hebben de inductie van EAN in de relatief resistent C57BL/6 muis lijn met behulp van myeline eiwit nul (P0)106-125 of P0180-199 peptiden geleverd in adjuvans gecombineerd met de injectie van pertussis toxine ingeschakeld. De capaciteit voor het opwekken van EAN in de stam van de C57BL/6 kunt voor het gebruik van de vele genetische hulpmiddelen die bestaan op de achtergrond van deze muis en dus de geavanceerde studie van de pathogenese van de ziekte en de ondervraging van de mechanistische actie van roman therapeutics in combinatie met transgene benaderingen. In deze studie tonen we een eenvoudige benadering van EAN met behulp van de P0180-199 peptide in C57BL/6 muizen met succes te induceren. Ook schetsen wij een protocol voor de beoordeling van functionele tekorten die zich bij dit model wordt begeleid door een matrix van neuropathologische kenmerken voordoen. Dit model is dus een krachtig experimenteel model om te bestuderen van de pathogenese van menselijke perifere demyeliniserende neuropathieën en voor het bepalen van de werkzaamheid van potentiële therapieën die gericht zijn op bevordering van myeline reparatie en bescherming tegen schade aan de zenuwen in auto-immuunziekten neuritis.

P0180-199 peptide geïnduceerde EAN in C57BL/6 muizen leidt tot een monofasische ziekte met klinische score begin van 6 dagen post eerste immunisatie (dpi) en maximale score ernst is waargenomen vanaf 25 dpi gevolgd door sommige klinische score verbetering van 40 dpi duur (Figuur 1)4,9. In termen van gait functie, muizen begint te falen bij een eenvoudige lopende taak zo spoedig 6 dpi, en d...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments at JoVE.com

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Dit verslag schetst een eenvoudige benadering om succesvol experimentele autoimmune neuritis (EAN) met behulp van de myeline proteïne nul peptide180-199 (P0) in combinatie met de Freund compleet adjuvans en kinkhoest toxine. We presenteren een verfijnde paradigma staat nauwkeurig de beoordeling van de omvang van functionele tekorten en Neuropathologie die zich voordoen in deze EAN.

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

The overall goal of this procedure is to successfully induce Experimental Autoimmune Neuritis or EAN in a mouse model for the functional and pathological analysis of the disease process. The EAN model can be used to address key questions relating to peripheral neuropathy. It's also a wonderful model to potentially investigate the efficacy of novel therapeutic agents.The main advantage of this approach is that it provides a simple and objective functional testing paradigm that can be applied when using the EAN model in the mouse. Demonstrating the procedure with me today is Sang Won Yoo, who is an undergraduate student in the neurotrophin and myelin biology lab at the University of Melbourne. Three days before the disease induction, turn on the motor function assessment apparatus and switch on the light button.Pick up the mouse and lower it onto a container of red food dye. Place the mouse into the walking compartment and set the treadmill speed to 15 centimeters per second. Turn on the treadmill and click record to use the gait function imaging system to capture the running motion of the mouse for 36 seconds.After 36 seconds, stop the recording and the treadmill and save the practice run video file of the practice run in the designated folder. One day before the first immunization, use a 0.5 milliliter syringe equipped with a 30-1/2 gauge needle to administer 1.6 micrograms per milliliter of Pertussis toxin in 250 microliters of mouse isotonic PBS IP to anesthetized six to eight-week-old male C57BL/6 mice. Then, score the mice for clinical signs of EAN on a scale from zero to four according to the table and perform a motor function assessment as just demonstrated.The next day, combine equal volumes of freshly prepared solutions of peptide in 0.9%saline and 20 milligrams per milliliter of Mycobacterium tuberculosis in complete Freund's adjuvant in a bead beader and mix the solutions at the maximum speed for one minute at room temperature. Load a syringe equipped with a 23 gauge needle with the inoculum and invert and shake the syringe before evacuating any air within the syringe shaft. Before delivering the inoculum, remove the hair just lateral to the midline between the scapulae and disinfect the exposed skin with 70%ethanol.Then, use a pair of Adson forceps to grasp the skin and deliver 50 microliters of the solution to the Pertussis toxin injected mouse via subcutaneous injection. The next morning, deliver 1.2 micrograms per milliliter of Pertussis toxin in 250 microliters of PBS IP as just demonstrated followed by another 1.2 micrograms per milliliter injection of Pertussis toxin IP 48 hours later. Three days later after the third Pertussis injection, administer another 50 microliters of freshly prepared inoculum at the same injection site as before and monitor the clinical score and motor function of the animals twice a week until the end of the experiment.P0 180-199 peptide-induced EAN in C57BL/6 mice leads to a monophasic disease with a clinical score onset from six days post first immunization and a maximal score severity at 25 days post first immunization, followed by some clinical score improvement at 40 days post first immunization. The mice begin to fail at a simple running task as early as six days post first immunization with little capacity to complete a simple treadmill running task by 35 days post immunization that does not improve in running ability at 55 days post first immunization. The examination of semi-thin sections of the sciatic nerves of peptide-induced EAN mice reveals areas of demyelination compared to sciatic nerves from age-matched healthy controls.High power transmission electron microscopy images allow the identification of specific neuropathological features such as demyelination, damage to the myelin lamella, and signs of axon stress such as mitochondrial swelling. These animals also display acute axonal damage as evidenced by traumatically elevated beta-amyloid precursor protein expression in the sciatic nerves that is not observed in age-matched healthy control tissues. A widening of the nodes and a disruption to the paranodes are also observed.Once mastered, the subcutaneous injections can be performed within about five to 10 minutes per mouse with minimum chance of any injection error. While attempting this procedure, it's really important that you observe the injection site to ensure that all of the inoculum remains within the injection site and that none of it leaks out. Video capture of treadmill gait is great because it enables other parameters to be computed such as swing phase or stride length and these measures may become important when testing the efficacy of novel therapeutics.After watching this video, you should have a really good understanding of how to induce EAN in C57BL/6 male mice. In addition, you should have a really good understanding of how to place subcutaneous injections safely and really accurately ensuring that there is no injecting error. Don't forget that working with needles and inoculum, there is the chance of injury especially when using sharps.So, to avoid any chance of injury, it's a really good idea to always use the forceps and never grasp skin or tissue by hand and also to use single-use syringes, never recapping in the process.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

De Vermicelli en Capellini Handling Tests: Eenvoudige kwantitatieve metingen van behendige voorpootje functie in ratten en muizen

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Experimentele methoden voor het testen van de effecten van Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Tegen Alcohol-geïnduceerde apoptose tijdens de zwangerschap in C57BL / 6 muizen

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Laterale Septal Nucleus- en Striatum-specifieke<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporatie in de C57BL / 6 muis

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventriculaire Injectie van amyloid-β peptiden in normale muizen om acuut induceren Alzheimer-achtige cognitieve tekorten

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Sagittale vlak kinematische ganganalyse in C57BL/6 muizen onderworpen aan MOG35-55 geïnduceerde experimentele Autoimmune encefalomyelitis

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the ...

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

Cochleair implantaatchirurgie en elektrisch opgeroepen auditieve Brainstem Response opnamen in C57BL/6 muizen

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

Een herziene chirurgische aanpak om endolymphatische hydrops in het cavia te induceren

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model

Pre-chiasmatische, enkele injectie van autoloog bloed om experimentele subarachnoïdale bloeding in een rattenmodel te induceren

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely ...

Inductie en evaluatie van experimentele auto-immuunencefalomyelitis bij muizen

Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Auteur in de schijnwerpers: het creëren van een veelzijdig experimenteel auto-immuun encefalomyelitismodel dat relevant is voor zowel mannelijke als vrouwelijke muizen 