Name: the nematode caenorhabditis elegans - a versatile in vivo model to study host-microbe interactions
Uploaded: 2017-10-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions at JoVE.com

Эта работа была выполнена на и поддерживаемых Вустер политехнического института.

1. Подготовка нематода роста среднего (НГМ) <ol><li>за 1 Л СМИ, объединить 20 g агар, 2.5 g источник органический азот (например, bacto Пептон) и 3 г, натрия хлорида в колбе 2 Л. Добавить 975 мл стерильной воды.
	<ol><li>Добавить в баре стерильных перемешать. При использовании автоматического ?...

Методы для assaying C. elegans инфекции и выживания за время жизни воздействия C. albicans , который мы описали могут быть изменены для проверки другой патогена. Жидкий культур другой бактерий или грибов могут сделаны и кормили в C. elegans в подобной манере. Кроме того, может быть assayed после...

C. elegans был использован как организм мощные модели для более чем 50 лет. В 1960 году Южной Африки биолог Сидней Бреннер пионером в использовании C. elegans для изучения развития нервной системы, проложив путь для длинные линии ученых для изучения различных аспектов биологии клетки и животных в нематод. Эта линия включает в себя лауреатов Нобелевской премии, Крейг Мелло и Эндрю огонь для работы их RNAi1, Роберт Horvitz Салстон, Джон за их работу по развитию орган и апоптоз2,3,4и Мартин Чалфи для его работы на Зеленый флуоресцирующий белок5. Хотя эта модель организма традиционно использовались для изучения молекулярных и развития биологии, за последние 15 лет, исследователи начали использовать C. elegans для изучения биологии различных патогенов человека, включая Pseudomonas aeruginosa, золотистый стафилококк, Salmonella entericaи Serratia marcescens6,,78,9,10. Эти исследования показали, что многие механизмы, участвующие во взаимодействии человека возбудитель сохраняются в нематод, но и что существуют некоторые механизмы иммунитета, которые являются уникальными для этой модели организма11,12. В природе C. elegans встречает различных угроз от попадает патогенных микроорганизмов, присутствующих в почве, и это оказывает сильное селективного давления развиваться и поддерживать сложные врожденной иммунной системы в его просвете кишечника. Многие из генов и механизмов в деле защиты кишечника люмен организовали хорошо сохранились элементы, которые также существуют в высших млекопитающих11,13. C. elegans поэтому представляет большой модели для изучения желудочно-кишечных патогенов как Salmonella enterica14, Shigella boydii15или16 вибрион холеры.
Здесь мы подчеркиваем замечательный универсальность C. elegans как хозяин модель для изучения инфекционных агентов, таких как C. albicans. C. elegans как модель хост позволяет для высокой пропускной способности скрининга для вирулентности, что является менее дорогостоящим и трудоемким, чем модель мыши, которой обычно используется для изучения кандидоз42.
В этом исследовании мы показываем, что эта модель и подсказать выживания assay может использоваться надежно для изучает принимающей врожденной иммунной эффекторов важно противодействовать инфекций, возбудителя определяющих факторов вирулентности, диск и фармакологические соединений, которые могут вмешиваться в патогенезе. Отличается от ранее описанных анализов, этот метод обеспечивает средства изучения воздействия возбудителя в течение животного, от личиночной стадии взрослой жизни, а не только взрослой жизни до смерти43,44. В целом, наши C. elegans - C. albicans модель является универсальный и мощный инструмент, который может использоваться не только для изучения генетических основ, которые управляют инфекция и иммунитет, но и для выявления новых соединений для терапевтического вмешательства.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar (granulated, bacterilogical grade)</td>
			<td>Apex BioResearch Products</td>
			<td>20-248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Wire (95% Pt, 32 Gauge)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-1M32P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiovision Zeiss Inverted Microscope</td>
			<td>Axiovision Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-Peptone</td>
			<td>Fisher BioReagants</td>
			<td>BP1420-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans strain Bli-3</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>Bli-3(e767) CB767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP51-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol, Sigma Grade, minimum 99%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8667-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Culture Tubes (20 x 150 mm)</td>
			<td>FIsherBrand</td>
			<td>14-961-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope (NI-150 High Intensity Illuminator)</td>
			<td>Nikon Instrument Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>OP50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism (Survival Curve Analysis Software)</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth (Miller&#39;s)</td>
			<td>Apex BioResearch Products</td>
			<td>11-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium Petri Dishes (35 X 10 mm)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0662-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wildtype C. albicans SC5314</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>SC5314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wildtype C. elegans</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the nematode caenorhabditis elegans - a versatile in vivo model to study host-microbe interactions

Мы демонстрируем метода с помощью Caenorhabditis elegans как модель для изучения взаимодействия микроорганизмов. Микробы вводятся через диетические, делая основное расположение для заболеваний ЖКТ. Нематоды intestine структурно и функционально имитирует млекопитающих кишечника и прозрачна, что делает поддаются микроскопическое исследование колонизации. Здесь мы покажем, что патогенные микроорганизмы могут вызвать болезни и смерти. Мы в состоянии определить микробных мутантов, которые показывают изменения вирулентности. Ее сохраняется врожденный ответ биотических стрессов делает C. elegans отличной системой зонда грани принимающей innate иммунных взаимодействий. Мы показывают, что хосты с мутациями в гене двойной оксидазы нельзя производить реактивнооксигенных видов и не могут противостоять микробов оскорбление. Мы далее продемонстрировать универсальность представленных выживания assay, показывая, что он может использоваться для изучения последствий ингибиторы роста микроорганизмов. Этот assay может также использоваться для обнаружения Факторы вирулентности грибковых как цели в области развития новых противогрибковых агентов, а также обеспечить возможность для дальнейшего выявления хост микробных взаимодействий. Дизайн этот assay хорошо поддается высокой пропускной способности всего генома экранов, в то время как способность червей крио сохранить для будущего использования делает его экономически эффективным и привлекательным целом животных модель для изучения.

Патогенез пробирного (рис. 1), используя C. albicans и C. elegans ранее был описан в нашей лаборатории17,18 и19,других лабораторий20. Мы демонстрируем ограниченой использования C. elegans для и?...

Watch this Scientific Journal Video about The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions at JoVE.com

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Нематоды Caenorhabditis Elegans - универсальный в Vivo модель для изучения хост микробных взаимодействий

Здесь мы представляем нематоды Caenorhabditis elegans как универсальный хост модель для изучения взаимодействия микроорганизмов.

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Research

JoVE Journal

Genetics

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

Генетическая Манипуляция растений Возбудитель<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; По изучению Грибковые биологии и растений микробных взаимодействий

Gene deletion plays an important role in the analysis of gene function. One of the most efficient methods to disrupt genes in a targeted manner is the ...

Conjugative Mating Assays for Sequence-specific Analysis of Transfer Proteins Involved in Bacterial Conjugation

Конъюгативных Спаривание Анализы для последовательности конкретного анализа переноса белков, участвующих в конъюгации бактерий

The transfer of genetic material by bacterial conjugation is a process that takes place via complexes formed by specific transfer proteins. In Escherichia ...

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

Лазерная Microirradiation учиться в Vivo клеточных реакций на повреждение ДНК простых и сложных

DNA damage induces specific signaling and repair responses in the cell, which is critical for protection of genome integrity. Laser microirradiation ...

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Манипуляция плоидности в Caenorhabditis elegans

Mechanisms that involve whole genome polyploidy play important roles in development and evolution; also, an abnormal generation of tetraploid cells has ...

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

Метод Set реплики: Высок объём подход к количественной мерой Caenorhabditis elegans продолжительность жизни

The Replica Set method is an approach to quantitatively measure lifespan or survival of Caenorhabditis elegans nematodes in a high-throughput manner, thus ...

In Vitro Biochemical Assays using Biotin Labels to Study Protein-Nucleic Acid Interactions

В vitro биохимические анализы с использованием биотина этикетки для изучения белково-нуклеиновой кислоты взаимодействия

Protein-nucleic acid interactions play important roles in biological processes such as transcription, recombination, and RNA metabolism. Experimental ...

An In Vitro Approach to Study Mitochondrial Dysfunction: A Cybrid Model

An In Vitro Approach to Study Mitochondrial Dysfunction: A Cybrid Model

Подход in vitro к изучению митохондриальной дисфункции: модель Cybrid

Deficiency of the mitochondrial respiratory chain complexes that carry out oxidative phosphorylation (OXPHOS) is the biochemical marker of human ...

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Измерение Caenorhabditis elegans Чувствительность к агонисту рецепторов ацетилхолина Левамизол

At the neuromuscular junction (NMJ), the binding of the excitatory neurotransmitter acetylcholine (ACh) to postsynaptic receptors leads to muscle ...

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Исследование недорогих методов измерения продолжительности жизни и продолжительности здоровья у Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Измерение эмбриональной жизнеспособности и размера расплода у Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as ...