Name: live cell fluorescence microscopy to observe essential processes during microbial cell growth
Uploaded: 2017-11-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth at JoVE.com

Vi tackar Michael VanNieuwenhze (Indiana University) för gåvan av de FDAAs som används i figur 2 och figur 4. Vi tackar medlemmar i brun lab för feedback under utarbetandet av detta manuskript. Forskning i brun lab på A. tumefaciens celltillväxt och delning stöds av National Science Foundation (IOS1557806).

1. tillväxt av A. tumefaciens stammar
<ol><li>
Odling A. tumefaciens stammar
	<ol>
<li>Använd en steril trä pinne eller Pipettera spets för att Inokulera 1 mL ATGN tillväxt medier (se lista över material för receptet) med en enda koloni av önskad stammen. Obs: För A. tumefaciens utarmning stammar, ATGN bör innehålla 1 mM IPTG som en inducerare att upprätthålla biosyntes av proteinet viktigt.</li>
		<li>Växa de A. tumefaciens stammarna övernattning i...

Detta protokoll innehåller en rad förfaranden för undersökning av A. tumefaciens vildtyp, mutant och utarmning stammar. Det är värt att notera att alla förfaranden i avsnittet protokoll kan lätt anpassas för andra bakteriestammar med ytterligare ändringar att redovisa tillväxt medier, temperaturer och tillväxttakt.
Användningen av target-specifika färgämnen är ett värdefullt verktyg för att tillhandahålla en detaljerad karakterisering av cellcykeln händelser i bakt...

Progression genom bakteriell cellcykeln kräver samordning av många processer inklusive membran och cellväggen biosyntes, DNA-replikation och segregation och celldelning. För att fullt förstå komplexiteten av bakteriell cellbiologi, är det nödvändigt att studera dessa väsentliga händelser; dock är detta en icke-trivial uppgift eftersom cellernas viabilitet äventyras när viktiga komponenter i dessa vägar är mutagenized. Epifluorescence mikroskopi tillsammans med target-specifika färgämnen är en kraftfull metod att söka dessa viktiga processer i vildtyp och muterade bakteriestammar.
Peptidoglykan-specifika färgämnen inkluderar fluorescerande antibiotika (vancomycin-FL, bocillin-FL) och lysrör-d-aminosyror (till exempel 7-hydroxycoumarin-3-karboxylsyror syra-3-amino-d-alanin, HADA; 4-chloro-7-nitrobenzofurazan-3-amino-d-alanin , NADA; tetrametylrodamin-3-amino-d-alanin; TADA). I grampositiva bakterier, har användandet av subletala koncentrationer av fluorescerande antibiotika analoger sond platser av peptidoglykan biosyntes varit en effektiv strategi att avslöja peptidoglykan införande mönster1,2, 3,4. Medan fluorescerande vankomycin märkning har använts för att få insikter i peptidoglykan införande mönster i fasta gramnegativa bakterier5, ger det yttre membranet i allmänhet en permeabilitet barriär som hindrar användning av fluorescerande antibiotika som en sond för peptidoglykan biosyntes i levande celler. Däremot etikett korta pulser av lysrör-d-aminosyror eller d-aminosyror med biorthogonal funktionella grupper kovalent regioner i senaste peptidoglykan införande i ett brett utbud av levande bakterieceller6,7. Mönster av peptidoglykan införande som har observerats med syntetisk d-aminosyror inkluderar punktuell och septal (Escherichia coli och Bacillus subtilis), polar och septal (Agrobacterium tumefaciens och Listeria monocytogenes), septal bara (Staphylococcus aureus), och apikala (Streptomyces venezuelae)6,7. Dessa observationer tyder på att bakterier uppvisar varierande mönster av cellväggen biogenes och att användningen av syntetiskt d-aminosyror som sonder för att pröva tillväxt mönster är en värdefull strategi i många bakterier.
Färgämnen som etikett bakteriell kromosomer inkluderar deoxiribonukleinsyra (DNA) specifika mindre groove bindemedlet (4,6-diamidin-2-fenylindol; DAPI) och hög affinitet cyanin färgämnen (grön och Orange; se material lista). DAPI färgning av fasta celler hjälper uppräkning av bakterier från miljöprover8, medan DAPI färgning av levande celler används för att indikera bakteriell livskraft9. Däremot färgämnen cyanin som Orange och grönt är ofta beskrivs som membran impermeant ”döda” cell fläckar att räkna upp icke-viabla celler9. Anmärkningsvärt, när reagenserna används sond av den bakteriella nucleoid morfologi under celltillväxt, DAPI, Orange och grön alla visade sig vara membran diffusionskoefficient och kapabla att märkning levande celler10. I levande E. coli celler, DAPI färgning av DNA visas diffusa på grund av auto-fluorescens från cytoplasman och upprepad exponering av DAPI-färgade celler för ultraviolett (UV) ljus perturbs nucleoid struktur10. Färgning E. coli eller B. subtilis med Orange avslöjar att detta färgämne är membran diffusionskoefficient och ger långvarig fluorescens vid bindning till DNA i levande celler utan att påverka celltillväxt, DNA-replikation eller kromosomsegregering10 . Dessa observationer tyder på att cyanin DNA färgämnen kan användas för att övervaka morfologi av nucleoids under celltillväxt i många bakterier.
Phospholipid-Specific stryl färgämnen såsom N-(3-triethylammoniumpropyl)-4-(6-(4-(diethylamino) fenyl) hexatrienyl) deoxypyri etylenedibromid (4-64; se material lista) är katjoniska föreningar och associera företrädesvis med negativt laddade fosfolipider såsom kardiolipin och phosphatidylglycerol11. Distinkta mönster observeras när 4-64 används för att märka membranet i olika bakterier. I Escherichia coli, 4-64 anrikas i polerna, i band längs laterala väggen, och i de division platserna sen pre-divisional celler12. I Bacillus subtilismöjliggör 4-64 märkning visualisering av lipid spiraler13. I Agrobacterium tumefaciens, 4-64 etiketter det yttre membranet och observeras i en karakteristisk ”hästskon” mönster där tillväxt masten saknar märkning14,15. Dessa observationer tyder på att dessa bakterier uppvisar heterogena lipid investeringsperiodens förekomsten av lipid domäner som bidrar till cellulära asymmetri. Förändringar i 4-64 märkning mönster som förekomsten av diffusa märkning, blebs eller blåsor, invaginations eller membran krympning kan vara informativ i kännetecknar mutanter som påverkar distribution eller biosyntesen av lipider.
Bortom färgning celler, är det nödvändigt att fastställa funktionen av proteiner deltar i viktiga processer. Karakterisering av viktiga proteiner är tekniskt utmanande eftersom det inte går att ta bort viktiga gener och studera de fenotypiska konsekvenserna. Således, alternativa metoder som bryter ned proteinet har dykt upp. Exempelvis kan en viktig gen sättas under kontroll av en inducerbara arrangören i stället för dess infödda tillskyndare. Inducerbara initiativtagare är lyhörda för små molekyler såsom; zink16, isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)17,18,19,20,21, arabinos22, vanillate17,23, och xylos23, därmed transkriptionen av målgenen upphör och proteinet av intresse är förbrukad när induceraren tas bort. Alternativa metoder för nedbrytande viktiga proteiner av intresse inkluderar syntetiska riboswitches24 som använder liten molekyl-RNA interaktioner hindrar transkription av målgener, CRISPR störningar25,26 till block transkription av målgener och inducerbara protein nedbrytning27,28 som använder peptid taggar till målprotein för nedbrytning av de ClpXP-proteashämmaren. Utarmning stammar ger endast en kort tid för karakterisering innan cellerna förlorar bärkraft, mikroskopbilder av celler med tiden under protein utarmning är därför en kraftfull metod för karakterisering. Mikroskopi av levande bakterieceller har faktiskt gjort det möjligt för forskare att få insikter i grundläggande biologiska processer, inklusive mekanismer för cell form underhåll, sekretion och uppdelning29.
A. tumefaciens är en bakteriell växt patogen30 och naturliga genetiska ingenjör31,32. Således, mekanismer relaterade till patogenicitet, inklusive värd-patogen interaktioner33,34,35, sekretion36och värd omvandling30,31, 37 har studerats i större omfattning. För att designa strategier som hindrar A. tumefaciens medierad sjukdom eller förbättra växt förvandling, måste processerna som är avgörande för A. tumefaciens överlevnad förstås bättre. Användningen av target-specifika färgämnen och den senaste utvecklingen av ett protein utarmning strategi för A. tumefaciens18 ger en möjlighet att undersöka väsentliga processer.
Här finns detaljerade protokoll för Mikroskopisk analys av vildtyp och mutant protein utarmning stammar av A. tumefaciens . De två första protokoll beskriva hur man förbereder celler och märka dem med målet-specifika färgämnen. Det tredje protokollet innehåller stegvisa anvisningar för att förbereda agaros pads (figur 1) och imaging bakteriecellerna (figur 2, figur 3, figur 4). Dessa protokoll kan också vara lämplig för andra bakterier med ytterligare anpassningar för olika medier villkor, tillväxttakt, krav på syrgasutrustning och cellstrukturer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bacterial Strains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agrobacterium tumefaciens C58</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>33970</td>
			<td>Watson B, Currier TC, Gordon MP, Chilton MD, Nester EW. 1975. Plasmid required for virulence of Agrobacterium tumefaciens. J Bacteriol 123:255-264.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agrobacterium tumefaciens C58&#916;tetRA::mini-Tn7T-GM-Ptac-ctrA &#916;ctrA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Figueroa-Cuilan W, Daniel JJ, Howell M, Sulaiman A, Brown PJB. 2016. Mini-Tn7 insertion in an artificial attTn7 site enables depeltion of the essentail master regulator CtrA in the phytopathogen Agrobacterium tumefaciens. Appl Environ Microbiol. 82:5015-5025.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media Components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATGN Minimal Medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To 1 L of sterilized water add 50 ml 20X Buffer, 50 ml 20X Salts, 12.5 ml 40% glucose. For plates, add 15 g Bacto Agar to 1 L of water and autoclave. Cool to 55 &#176;C and add 50 ml 20X Buffer, 50 ml 20X Salts, 12.5 ml 40% glucose.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X AT Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add 214 g/L KH2PO4 to water and adjust pH to 7.0 with sodium hydroxide. Autoclave.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X AT Salts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add 40 g/L (NH4)2SO4, 3.2 g/L MgSO4&#8226;7H2O, 0.2 g/L CaCl2&#8226;2H2O, and 0.024 g/L MnSO4&#8226;H2O to water. Autoclave.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(NH4)2SO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#8226;2H2O</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnSO4&#8226;H2O</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>M114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16</td>
			<td>Prepare 40% stock in water. Filter sterilize.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP1423</td>
			<td>Add 15 g to 1 L of water when preparing plates.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optional Media Additives</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>K-120</td>
			<td>Prepare as a 100 mg/ml stock solution in water and filter sterilize. Use at final concentration of 200 &#181;g/ml.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>I2481C5</td>
			<td>Prepare as a 1 M stock solution in water and filter sterilize. Use at final concentration of 1 mM as needed for induction.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-550D</td>
			<td>25 X 75 X 1.0 mm. Clean with Sparkle glass cleaner.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-541-B</td>
			<td>22 X 22 mm. No. 1.5. Clean with Sparkle glass cleaner.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sparkle Glass Cleaner</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>203261385</td>
			<td>Ammonia and alcohol free.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Pure Agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16500-100</td>
			<td>Add to water, PBS, or media to a final concentration of 1 - 1.5%. Melt in microwave and place on 70 C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP399500</td>
			<td>10X solution to be diluted to 1X with sterile water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-999</td>
			<td>Laboratory film used as gasket in agarose pad preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VALAP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add equal weights of lanolin, parafin wax, and petroleum jelly to a conical tube. Heat tube in 70 &#176;C dry, bead or water bath to melt and mix. Apply VALAP while still molten.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lanolin Butter</td>
			<td>SAAQIN</td>
			<td>SQ-LAB-R1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum Jelly</td>
			<td>Target Corp.</td>
			<td>06-17644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Wax</td>
			<td>Crafty Candles</td>
			<td>263012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Target-specific dyes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP231-1</td>
			<td>Use to dilute stock solutions of dyes as needed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FDAAs (NADA, HADA,TADA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>FDAAs can be synthesized or acquired through agreement with Mike VanNieuwenhze (Indiana University). Prepare 100 mM stock solution in DMSO. Use at a final concentration of 5 mM.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>62247</td>
			<td>Prepare 1 mg/ml stock solution in DMSO. Use at final concentration of 1 &#181;g/ml.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYTOX Orange Nucleic Acid Stain</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S11368</td>
			<td>Stock concentration is 5 mM in DMSO. Use at final concentration of 5 &#181;M.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FM4-64</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3166</td>
			<td>Prepare 8 mg/ml stock solution in DMSO. Use at final concentration of 8 &#181;g/ml.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry bath</td>
			<td>Sheldon Manufacturing, Inc.</td>
			<td>52120-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metallic thermal beads</td>
			<td>Lab Armor</td>
			<td>42370-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope equipped with an EMCDD camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Nikon Eclipse TiE equipped with a QImaging Rolera em-c2 1K electron-multiplying charge-coupled-device (EMCCD) camera is used in this work.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell fluorescence microscopy to observe essential processes during microbial cell growth

Cellulära kärnprocesser såsom DNA-replikation och segregering, proteinsyntes, växtcellväggar och celldelning är beroende av funktionen av proteiner som är avgörande för bakteriell överlevnad. En rad mål-specifika färgämnen kan användas som sonder för att bättre förstå dessa processer. Färgning med lipofila färgämnen möjliggör observation av membranstruktur, visualisering av lipid microdomains, och upptäckt av membran blebs. Användning av lysrör-d-aminosyror (FDAAs) sond platserna för biosyntesen av peptidoglykan kan indikera potentiella defekter i cellväggen biogenes eller cell tillväxt mönster. Slutligen, nukleinsyra fläckar kan indikera eventuella defekter i DNA-replikering eller kromosom segregation. Cyanin DNA fläckar etikett levande celler och är lämpliga för time-lapse mikroskopi möjliggör realtid observationer av nucleoid morfologi under celltillväxt. Protokoll för cell märkning kan tillämpas på protein utarmning mutanter att identifiera defekter i membranstruktur, cellväggen biogenes eller kromosomsegregering. Time-lapse mikroskopi kan dessutom användas för att övervaka morfologiska förändringar som en viktig protein tas bort och kan ge ytterligare insikter om proteinfunktion. Till exempel resulterar utarmning av väsentliga celldelning proteiner i filamentation eller förgrening, medan utarmning av cell tillväxt proteiner kan orsaka celler att bli rundare eller kortare. Här finns protokoll för celltillväxt, target-specifik märkning och time-lapse mikroskopi för bakteriell växt patogen Agrobacterium tumefaciens. Tillsammans, target-specifika färgämnen och time-lapse mikroskopi aktivera karakterisering av viktiga processer i A. tumefaciens. Slutligen kan de protokoll som tillhandahålls lätt ändras sond väsentliga processer i andra bakterier.

Target-specifik märkning av vildtyp A. tumefaciens celler För att illustrera att cellmorfologi påverkas inte av tvätta stegen eller behandling med 1% DMSO (som används för att späda ut de fluorescerande färgerna), celler var avbildas direkt från kultur (figur 2A, längst till vänster panel), efter tvättning cellerna av centrifugering som beskrivs i punkt 1.2 (figur...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth at JoVE.com

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

Svårt att förstå funktionen av viktiga processer i bakterier. Fluorescensmikroskopi med målet-specifika färgämnen kan ge viktiga insikter i mikrobiell cell tillväxt och cellcykeln progression. Här används Agrobacterium tumefaciens som en modell bakterie att lyfta fram metoder för levande cell avbildning för karaktärisering av väsentliga processer.

Levande cellen fluorescensmikroskopi för att iaktta nödvändiga processer under mikrobiell celltillväxt

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Levande cell imaging av F-aktin Dynamics via Fluorescent Speckle Mikroskopi (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Cell Electrofusion Visualized with Fluorescence Microscopy

Cell elektrosvetsade visualiseras med fluorescensmikroskopi

Cell electrofusion is a safe, non-viral and non-chemical method that can be used for preparing hybrid cells for human therapy. Electrofusion involves ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live avbildning av Apoptotic Cell Utförsäljning under<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualisering Stromule frekvens med fluorescensmikroskopi

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Undersökning av mitotiska och Meiotic fission jäst nukleär dynamik genom fluorescens Live-cell Microscopy

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging av livscykeln för bakteriell Predator Bdellovibrio bacteriovorus med hjälp av Time-Lapse Fluorescens mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Quantitative Analysis of Aspergillus nidulans Growth Rate using Live Microscopy and Open-Source Software

Quantitative Analysis of Aspergillus nidulans Growth Rate using Live Microscopy and Open-Source Software

Kvantitativ analys av Aspergillus nidulans tillväxttakt med hjälp av livemikroskopi och programvara med öppen källkod

It is well established that colony growth of filamentous fungi, mostly dependent on changes in hyphae/mycelia apical growth rate, is macroscopically ...

Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy

Mätning av cellkantsutsprångsdynamik under spridning med hjälp av livecellmikroskopi

The development and homeostasis of multicellular organisms rely on coordinated regulation of cell migration. Cell migration is an essential event in the ...