Name: isolation and respiratory measurements of mitochondria from arabidopsis thaliana
Uploaded: 2018-01-05T13:00:00
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이 연구는 오스트레일리아 연구 위원회 센터의 우수 공장 에너지 생물학 CE140100008는 호주 연구 협의회 미래 친교 (FT130100112) Feodor Lynen 연구 친교 (알렉산더 폰 훔볼트 MWM, 하에 의해 지원 되었다 재단, 독일) js.

이 프로토콜은 애기 thaliana 장기 지속적인 콜 로이드 밀도 그라디언트를 사용 하 여 토양에 성장에서 그대로 미토 콘 드리 아의 절연에 사용 됩니다. 자료의 수집에 따라 모든 절차는 4 ° c.에 실시
1. 매체, 워시 버퍼, 그리고 그라데이션 솔루션을 연 삭의 준비
<ol><li>300 mL (마이너스 하는데와 시스테인) 중간과 표 1 당 2 x 워시 버퍼의 200 mL는 격리 이전 1 일 ?...

<ol>
	<li>Day, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highlights+in+plant+mitochondrial+research.+Methods+in+molecular+biology.">Highlights in plant mitochondrial research. Methods in molecular biology.</a> Plant mitochondria. 1305, v-xvi (2015).</li><li>Millar, A. H., Carrie, C., Pogson, B., Whelan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+function-location+nexus:+Using+multiple+lines+of+evidence+in+defining+the+subcellular+location+of+plant+proteins.">Exploring the function-location nexus: Using multiple lines of evidence in defining the subcellular location of plant proteins.</a> Plant Cell. 21 (6), 1625-1631 (2009).</li><li>Eubel, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-flow+electrophoresis+for+purification+of+plant+mitochondria+by+surface+charge.">Free-flow electrophoresis for purification of plant mitochondria by surface charge.</a> Plant J. 52 (3), 583-594 (2007).</li><li>Murcha, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+import+into+plant+mitochondria:+Signals,+machinery,+processing,+and+regulation.">Protein import into plant mitochondria: Signals, machinery, processing, and regulation.</a> J. Exp. Bot. 65 (22), 6301-6335 (2014).</li><li>Carrie, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+defining+dual-targeted+proteins+in+Arabidopsis.">Approaches to defining dual-targeted proteins in Arabidopsis.</a> Plant J. 57 (6), 1128-1139 (2009).</li><li>Pinto, G., Radulovic, M., Godovac-Zimmermann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+perspectives+in+the+redox+code+-+Mass+spectrometric+proteomics+studies+of+moonlighting+proteins.">Spatial perspectives in the redox code - Mass spectrometric proteomics studies of moonlighting proteins.</a> Mass Spectrom. Rev. , (2016).</li><li>Day, D. A., Neuburger, M., Douce, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+characterisation+of+chlorophyll-free+mitochondria+from+pea+leaves.">Biochemical characterisation of chlorophyll-free mitochondria from pea leaves.</a> Aust. J. Plant Physiol. 12 (3), 219-228 (1985).</li><li>Boersema, P. J., Raijmakers, R., Lemeer, S., Mohammed, S., Heck, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+peptide+stable+isotope+dimethyl+labeling+for+quantitative+proteomics.">Multiplex peptide stable isotope dimethyl labeling for quantitative proteomics.</a> Nat. Protoc. 4 (4), 484-494 (2009).</li><li>Cheah, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Online+oxygen+kinetic+isotope+effects+using+membrane+inlet+mass+spectrometry+can+differentiate+between+oxidases+for+mechanistic+studies+and+calculation+of+their+contributions+to+oxygen+consumption+in+whole+tissues.">Online oxygen kinetic isotope effects using membrane inlet mass spectrometry can differentiate between oxidases for mechanistic studies and calculation of their contributions to oxygen consumption in whole tissues.</a> Anal Chem. 86 (10), 5171-5178 (2014).</li><li>Chrobok, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+metabolic+role+of+mitochondria+during+developmental+leaf+senescence.">Dissecting the metabolic role of mitochondria during developmental leaf senescence.</a> Plant Physiol. 172 (4), 2132-2153 (2016).</li><li>Lee, C. P., Eubel, H., O'Toole, N., Millar, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+proteomics+of+root+and+shoot+mitochondria+and+transcript+analysis+to+define+constitutive+and+variable+components+in+plant+mitochondria.">Combining proteomics of root and shoot mitochondria and transcript analysis to define constitutive and variable components in plant mitochondria.</a> Phytochemistry. 72 (10), 1092-1098 (2011).</li><li>Lee, C. P., Eubel, H., Solheim, C., Millar, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+proteome+heterogeneity+between+tissues+from+the+vegetative+and+reproductive+stages+of+Arabidopsis+thaliana+development.">Mitochondrial proteome heterogeneity between tissues from the vegetative and reproductive stages of Arabidopsis thaliana development.</a> J. Proteome Res. 11 (6), 3326-3343 (2012).</li><li>Millar, A. H., Whelan, J., Soole, K. L., Day, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+regulation+of+mitochondrial+respiration+in+plants.">Organization and regulation of mitochondrial respiration in plants.</a> Annu. Rev. Plant Biol. 62, 79-104 (2011).</li><li>Peters, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+I+-+complex+II+ratio+strongly+differs+in+various+organs+of+Arabidopsis+thaliana.">Complex I - complex II ratio strongly differs in various organs of Arabidopsis thaliana.</a> Plant Mol. Biol. 79 (3), 273-284 (2012).</li><li>Werhahn, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+the+preprotein+translocase+of+the+outer+mitochondrial+membrane+from+Arabidopsis+thaliana:+Identification+of+multiple+forms+of+TOM20.">Purification and characterization of the preprotein translocase of the outer mitochondrial membrane from Arabidopsis thaliana: Identification of multiple forms of TOM20.</a> Plant Physiol. 125 (2), 943-954 (2001).</li><li>Heazlewood, J. L., Howell, K. A., Whelan, J., Millar, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+an+analysis+of+the+rice+mitochondrial+proteome.">Towards an analysis of the rice mitochondrial proteome.</a> Plant Physiol. 132 (1), 230-242 (2003).</li></ol>

일반적으로, 애기에서 미토 콘 드리 아의 분리 5 밀리 그램 보다 큰 수익률 자주 철저 한 연 삭으로 얻을 수 있지만 약 80-100 3-4 주 오래 된 식물에서에서 미토 콘 드리 아의 3 mg을 수익률 나뭇잎. 수확량은 성장 조건에 따라 달라진 다 고 미토 콘 드리 아 구조 노화9동안 잘 유지 될 것으로 보인다 비록 senesce, 나뭇잎으로 극적으로 감소. 좋은 수확량을 얻기 위해 가장 중요 한 기능 ?...

식물 미토 콘 드리 아 연구의 역사는 100 년1다시 갑니다. 그대로 미토 콘 드리 아 처음 1950 년대 초에 고립 되었다 차등 원심 분리를 사용 하 여. 1980 년대에 콜 로이드 밀도 기울기의 출현 삼투성 조정 고통 없이 정화를 미토 콘 드리 아 수 있습니다. 그라데이션 순화 된 미토 콘 드리 아 질량 분석의 감도 때문에, 대부분의 목적을 위해 적당 한 동안 심지어 상대적으로 경미한 오염 물질 검출 될 수 있다 하 고 부적절 하 게 미토 콘 드리 아 위치2를 할당 될 수 있습니다. 둘 다 plastidic 제거 무료 흐름 전기 이동 법의 사용과 peroxisome 오염3, 하지만 무료 흐름 전기 이동 법은 고도로 전문화 된 기술 및 연구의 대부분에 대 한 필요 하지 않습니다. 또한, 그 듀얼 또는 단백질의 여러 대상으로 기억 필요 단백질의 위치를 확인할 때 셀에 발생 합니다. 100 개 이상의 듀얼 타겟된 단백질 엽록체/plastids 그리고 미토 콘 드리 아4, 미토 콘 드리 아를 표적으로 하는 단백질의 숫자에 대 한 설명 그리고 peroxisomes5알려져도 있습니다. 또한, 특정 자극, 예를 들면 산화 긴장에서 단백질의 재 위치 세포 생물학6신흥 테마입니다. 따라서, 단백질의 위치, 공부 하는 생물학의 문맥에서 고려 될 필요가 고 다양 한 접근법을 결정 하 고 위치2확인 사용 됩니다.
미토 콘 드리 아는 일반적으로 균질 하 여 식물 조직에서 분리, 균형 열 출시 미토 콘 드리 아, 세포 벽을 깨는 사이 미토 콘 드리 아를 손상 되지 필요 합니다. 전통적으로, 감자와 콜리플라워, 균질 액체 추출 버퍼 활동을 유지 하기 위해 다양 한 구성 요소를 만들기 위해 가정용 믹서 기/과즙 짜는 기구를 사용 됩니다. 완두콩 잎에서 미토 콘 드리 아의 격리 (젊은 묘 (~ 10 일)를 사용 하 여 미토 콘 드리 아 격리에 대 한 인기 있는 소재 잎 소재는 부드러운 세포를 lyse를 믹서 기를 이용 한다. 애기 thaliana T-DNA insertional 노크 아웃 라인의 가용성, 미토 콘 드리 아 기능 연구를 수행을 정화 수 필요 잎, 뿌리 또는 꽃에서 미토 콘 드리 아를 분리 하는 방법의 개발을 필요한가 조직입니다. 전반적으로 다른 식물에 대 한 개발 방법을 잘7, 최적화 하는 데 필요한 재료의 연 삭 임시 수입으로 일했다. 애기가 다양 한 방법 (아래 참조)에 달성 될 수 있다 및 조직 유형 (촬영 대 루트) 사이 다릅니다. 연속 그라디언트를 사용 하 여 또한 다른 장기에서 미토 콘 드리 아의 밀도로 최적화 될 수 있습니다 또는 발달 단계 의미 그들은 다르게 마이그레이션할 수 있습니다. 따라서, 최대 분리에 대 한 그라데이션 밀도 최고의 분리를 달성 하기 위해 정제 된 수 있습니다.
일단 정화는 미토 콘 드리 아 연구, 단백질 및 tRNA 통풍 관 실험, 효소 활동 분석 실험, 호흡 수 측정 서쪽 오 점 분석 등의 다양 한 사용할 수 있습니다. 고립 된 미토 콘 드리 아 단백질 풍부의 질량 분석 분석에 사용할 수 있습니다. 타겟 단백질, 정의 하지만 중요 한 분석 결과 개발 필요 여러 반응 감시 (MRM) 분석의 정량화에 대 한 수 있습니다. 반면, 디 메 틸 또는 다른 동위 원소 라벨8, 부 량 차이 식별 하는 전체 프로테옴 소설을 생물 학적 통찰력을 발견 하는 데 사용할 수 있습니다 걸쳐 발견 접근법을 제공 합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ADP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8674</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AOX antibody</td>
			<td>from Tom Elthon</td>
			<td></td>
			<td>Elthon et al., 1989</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0157</td>
			<td>Ascorbate Oxidase from Cucurbita sp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A26209</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Bovogen</td>
			<td>BSAS 1.0</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarity western ECL substrate</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1705061</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Criterion Stain-Free Precast Gels 8-16% 18 Wells</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>5678104</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60178</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C3131</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Agar, granulated</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>214530</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiotreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA disodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamborg B-5 Basal Medium</td>
			<td>Austratec</td>
			<td>G398-100L</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamborg Vitamin Solution (1000x)</td>
			<td>Austratec</td>
			<td>G219-100ML</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG (H + L)-HRP Conjugate</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1706516-2ml</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG (H + L)-HRP Conjugate</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1706515-2ml</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7352-100G</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skoog Basal Salt Mixture (MS)</td>
			<td>Austratec</td>
			<td>M524-100L</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myxothiazol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T5580</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N8129</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ndufs4 antibody</td>
			<td>from Etienne Meyer</td>
			<td></td>
			<td>Meyer et al., 2009</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Propyl gallate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3130</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td>Chemical, colloidal density gradient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinylpyrrolidone (PVP40)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PVP40</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium cyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60178</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2256</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Chem-Supply</td>
			<td>SA046</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dithionite</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>157953</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium L-ascorbate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034-100G</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Succinate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2378</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Chem-Supply</td>
			<td>SA030</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1375</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrasodium pyrophosphate (Na4P2O7 &#183; 10H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221368</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans-Blot Turbo RTA Midi Nitrocellulose Transfer Kit</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1704271</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X 100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td>Chemical, detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Western Blocking Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11921681001</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>XS204</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beakers</td>
			<td>Isolab</td>
			<td>50 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Avanti J-26XP</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>3117-9500</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulator</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>1124971</td>
			<td>Attached to oxygen electrode chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical flask</td>
			<td>Isolab</td>
			<td>500 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper</td>
			<td></td>
			<td>3 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed angle rotor</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>JA25.5</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Funnel</td>
			<td>Per Alimenti</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>For filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gradient pourer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>165-4120</td>
			<td>For preparation of gradients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Stirrer ATE</td>
			<td>VELP Scientifica</td>
			<td>F20300165</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miracloth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM475855-1R</td>
			<td>Filtration material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mortar and pestle</td>
			<td>Jamie Oliver</td>
			<td>Granite, 6 Inch</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2view</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Oxygen monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygraph Plus System</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>1187253</td>
			<td>Clark-type oxygen electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paintbrush</td>
			<td>Artist first choice</td>
			<td>1008R-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td>plastic paraffin film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155001</td>
			<td>For preparation of gradients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC peristaltic tubing</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F117930</td>
			<td>For preparation of gradients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>VELP Scientifica</td>
			<td>OCB</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and respiratory measurements of mitochondria from arabidopsis thaliana

미토 콘 드리 아에는 필수적인 세포 식물, 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (NADH), 플 라빈 아데닌 등 감소 화합물의 산화에서 아데노신 3 인산 염 (ATP)의 가장 주목할 만한 생산에서에서 수많은 대사 경로에 관여 디뉴클레오티드 (FADH2)입니다. 애기 thaliana 게놈의 완전 한 주석으로 가장 널리 사용 되는 식물 모델 시스템, 따라서 필요 기관 (잎, 뿌리, 또는 꽃)의 다양 한에서 미토 콘 드리 아를 정화 도구를 활용 하는 데 필요한 그것을 설립 했다 그 지금 애기 미토 콘 드 리아 생물학을 공부 하기 위해 사용할 수 있습니다. 다음 일련의 차등 원심 분리 단계 연속 콜 로이드 밀도 그라디언트를 사용 하 여를 정화 하 고 더는 원유 미토 콘 드리 아 펠 릿 생산 방식의 다양 한을 사용 하 여 조직의 균질 하 여 미토 콘 드리 아 격리 원심 분리입니다. 콜 로이드 밀도 자료 이후 여러 원심 분리 단계에서 제거 됩니다. 100g의 신선한 잎 조직에서 시작, 미토 콘 드리 아의 2-3 mg 얻어질 수 있다 정기적으로. 이 미토 콘 드리이 아 호흡 실험 다양 한 기판 및 억제제를 사용 하 여 결정 수를 100-250 nmol O2 분-1 mg 총 미토 콘 드리 아 단백질-1 (NADH 의존 율)의 전형적인 속도 표시 기판에 산화 되는 대안 및 시 토 크롬 터미널 oxidases의 용량. 이 프로토콜 연속 콜 로이드 밀도 기울기 및 정화 식물 미토 콘 드리 아의 효율적인 호흡 측정을 사용 하 여 애기 thaliana 잎에서 미토 콘 드리 아의 격리 방법을 설명 합니다.

이 프로토콜을 사용 하 여, SDS 페이지와 immunoblotting 다른 미토 콘 드리 아 단백질을 감지할 수 있었습니다. 그림 3A에서 같이, 물 문화 조직에서 분리 된 단백질은 희미 한 밴드 (2 µ g) 검출 충분 합니다. 신호 강도 로드 금액에 비례하여 증가 합니다. 절연 판 (그림 3B), 높은 가벼운 스트레스에 대 한 응답에 성장 하는 조직에서 미?...

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Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

절연 및 호흡 측정의 미토 콘 드리 아 애기 thaliana 에서

미토 콘 드리 아 식물 세포의 단지 작은 백분율은, 그들은 연구의 범위에 대 한 정화 될 필요가 있다. 미토 콘 드리 아 균질, 매우 순화 된 미토 콘 드리 아 분수를 차동 및 밀도 그라데이션 원심 분리 뒤 다양 한 식물 기관에서에서 격리할 수 있습니다.

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biochemistry

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Unit 1

Mitochondria and Energy Production

SCIENTISTS IN ACTION

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

고립 된 미토 콘 드리 아 및 경작된 한 세포에 있는 미토 콘 드 리아 칼슘 유입의 분석

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

연구

생화학

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

HEK 세포에서 Mitoribosome의 신속한 격리

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

Isolation of F1-ATPase from the Parasitic Protist Trypanosoma brucei

Isolation of F1-ATPase from the Parasitic Protist Trypanosoma brucei

F1의 절연-ATPase 기생 원생 생물 Trypanosoma brucei 에서

F1-ATPase is a membrane-extrinsic catalytic subcomplex of F-type ATP synthase, an enzyme that uses the proton motive force across biological membranes to ...

Preparation of Chloroplast Sub-compartments from Arabidopsis for the Analysis of Protein Localization by Immunoblotting or Proteomics

단백질 지 방화 Immunoblotting 또는 단백질의 분석에 대 한 애기에서 엽록체 하위 구획의 준비

Chloroplasts are major components of plant cells. Such plastids fulfill many crucial functions, such as assimilation of carbon, sulfur and nitrogen as ...

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간에서 조직 세포 외 소포의 격리

Extracellular vesicles (EVs) can be released from many different cell types and detected in most, if not all, body fluids. EVs can participate in ...

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미토 콘 드리 아 호흡기 사슬 슈퍼 복합체의 분리 및 분석을 위한 하이브리드 클리어/블루 천연 전기 영동

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The use of an authentic RNA template is critical to advance the fundamental knowledge of viral RNA synthesis that can guide both mechanistic discovery and ...