Name: orthotopic ovarian transplantation procedures to investigate the life- and health-span influence of ovarian senescence in female mice
Uploaded: 2018-02-12T13:00:00
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Pesquisa reportada nesta publicação foi apoiada por uma doação generosa de ratos fêmeas de CBA 14 meses do Instituto Nacional do envelhecimento, com idade de colônia de roedores (Nancy Nadon) e pela Universidade do estado de Utah, escola de medicina veterinária, departamento de Animal, leite e ciências veterinárias.

Todos os métodos aqui descritos foram desenvolvidos sob o Conselho de pesquisa nacional orientações encontraram no guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório e foram aprovadas pelo Comitê de uso e Utah estado Universidade institucional Cuidado Animal.
Nota: Procedimentos de transplantação ovariana podem envolver ratos (estirpe CBA/J) de 21 dias de idade de 18 meses de idade. Ratos da cepa CBA/J tornar-se reprodutivamente competentes entre 45 e 60 dias de idade e reprodutivame...

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	<li>National Institutes of Health, Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development, Fertility and Infertility Branch. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Fertility+Status+as+a+Marker+of+Overall+Health'.+"Support+studies+that+investigate+fertility+status+as+a+marker+of+overall+health+for+both+men+and+women".">'Fertility Status as a Marker of Overall Health'. "Support studies that investigate fertility status as a marker of overall health for both men and women".</a> New Research Priorities. , (2016).</li><li>Eisenberg, M. L., Li, S. F., Behr, B., Cullen, M. R., Galusha, D., Lamb, D. J., Lipshultz, L. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+immune+and+renal+function+in+aged+females+by+re-establishment+of+active+ovarian+function.">Restoration of immune and renal function in aged females by re-establishment of active ovarian function.</a> Reprod. Fertil. Dev. , (2017).</li><li>Parkinson, K. C., Peterson, R. L., Mason, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+behavior+and+sensory+function+were+significantly+influenced+by+restoration+of+active+ovarian+function+in+postreproductive+mice.">Cognitive behavior and sensory function were significantly influenced by restoration of active ovarian function in postreproductive mice.</a> Exp. Geront. 92, 28-33 (2017).</li><li>Cargill, S. L., Carey, J. R., Muller, H. G., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+of+ovary+determines+remaining+life+expectancy+in+old+ovariectomized+mice.">Age of ovary determines remaining life expectancy in old ovariectomized mice.</a> Aging Cell. 2 (3), 185-190 (2003).</li><li>Brooks, H. L., Pollow, D. P., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VCD+Mouse+Model+of+Menopause+and+Perimenopause+for+the+Study+of+Sex+Differences+in+Cardiovascular+Disease+and+the+Metabolic+Syndrome.">The VCD Mouse Model of Menopause and Perimenopause for the Study of Sex Differences in Cardiovascular Disease and the Metabolic Syndrome.</a> Physiology. 31 (4), 250-257 (2016).</li><li>Rivera, Z., Christian, P. J., Marion, S. L., Brooks, H. L., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+Capacity+of+Residual+Ovarian+Tissue+in+4-Vinylcyclohexene+Diepoxide-Treated+Mice.">Steroidogenic Capacity of Residual Ovarian Tissue in 4-Vinylcyclohexene Diepoxide-Treated Mice.</a> Biol. Reprod. 80 (2), 328-336 (2009).</li><li>Yuan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+inbred+strains+of+mice:+study+design+and+interim+report+on+median+lifespans+and+circulating+IGF1+levels.">Aging in inbred strains of mice: study design and interim report on median lifespans and circulating IGF1 levels.</a> Aging Cell. 8 (3), 277-287 (2009).</li><li>Mason, J. B., Cargill, S. L., Anderson, G. B., Carey, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Young+Ovaries+to+Old+Mice+Increased+Life+Span+in+Transplant+Recipients.">Transplantation of Young Ovaries to Old Mice Increased Life Span in Transplant Recipients.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 64 (12), 1207-1211 (2009).</li><li>Harrison, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acarbose,+17-alpha-estradiol,+and+nordihydroguaiaretic+acid+extend+mouse+lifespan+preferentially+in+males.">Acarbose, 17-alpha-estradiol, and nordihydroguaiaretic acid extend mouse lifespan preferentially in males.</a> Aging Cell. 13 (2), 273-282 (2013).</li><li>Manay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#945;-Estradiol+Attenuates+Neuron+Loss+in+Ovariectomized+Dtg+A&#946;PP/PS1+Mice.">17&#945;-Estradiol Attenuates Neuron Loss in Ovariectomized Dtg A&#946;PP/PS1 Mice.</a> J. Alzheimers Dis. 23 (4), 629-639 (2011).</li><li>Parker, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+conservation+at+the+time+of+hysterectomy+and+long-term+health+outcomes+in+the+nurses'+health+study.">Ovarian conservation at the time of hysterectomy and long-term health outcomes in the nurses' health study.</a> Obstet Gynecol. 113, 1027-1037 (2009).</li></ol>

Ovariectomia e transplante de ovários intactos e células germinativas empobrecido foram realizados em camundongos, variando de 21 dias a 18 meses de idade. Ao realizar uma ovariectomia onde é desejável manter a bursa ovariana intacta, deve ter cuidado quando a incisão do tecido bolsas serosas. Em camundongos, mais de seis meses de idade, muito da bursa torna-se sobreposto com a almofada de gordura, o que limita as áreas que podem ser usadas para acesso. Nestes casos, muitas vezes é vantajoso abrir a bursa, perto d...

A influência de reprodução sobre a saúde e a vida útil é muitas vezes erroneamente pensado tão restrito apenas para o período que engloba a competência reprodutiva. Enquanto o estilo de vida e fenótipos associados a fase reprodutivamente competente da esperança de vida são facilmente diferenciados das fases pré e postreproductive, status reprodutivo influencia a saúde em todas as fases da vida span. O período de competência reprodutiva é muitas vezes referido como a esperança de vida reprodutiva, diferenciando-se do tempo de vida cronológico. Esta terminologia se presta a uma separação artificial das duas denominações duração quando, na realidade, ambos são estreitamente vinculados entre si com eventos que afetam um, mais frequentemente do que não, que afetam o outro também.
Provas da última década indicam que status reprodutivo de um indivíduo é associado com um risco aumentado de desenvolver condições de saúde crônica1. Um estudo documentou uma associação entre a expectativa de vida mais curta e falha reprodutiva de uma coorte de homens2. A associação é ainda mais impressionante em mulheres. Doença cardiovascular é rara em mulheres pré-menopausicas3, mas insuficiência ovariana aumenta doenças cardiovasculares bruscamente na menopausa4 e em mulheres jovens com falência ovariana prematura5. Perda de6 e osso de resistência de insulin aumento na menopausa7 e quase dois terços dos americanos com a doença de Alzheimer são mulheres8. Bem alterações na sinalização ovariana marcam a transição de um estado de pré-menopausa, resistentes a doenças, para um estado pós-menopausa, doença sobrecarregados. Esta transição estável, apresenta uma oportunidade para identificar mecanismos que aceleram os riscos de doença no envelhecimento.
Recentemente, transplante de tecido ovariano criopreservado tem sido usado para restaurar a fertilidade em mulheres que se submetem a procedimentos médicos que podem pôr em risco as células da linha germinal, tais como quimioterapia. Transplante de tecido ovariano também pode ser usado para produzir prole viável em animais com infertilidade com base não-ovarianos, incluindo ratos transgénicos9. Transplante de ovário é um método eficiente para separar a influência da função reprodutora ou envelhecimento reprodutivo do envelhecimento cronológico por si.
O papel de apoio bem estabelecido para hormônios ovarianos em muitos aspectos da saúde feminina implica a perda de produção de hormônio de ciclismo ativamente as células germinativas, como a principal causa de riscos de doença aumento na menopausa. Enquanto o valor dos hormônios ovarianos na saúde feminina é inquestionável, substituir esses hormônios na peri e pós-menopausa tem sido confiável na restauração dos benefícios de saúde apreciado por jovens mulheres com ovários jovens. Estes benefícios de saúde confiável são restaurados pelo heterocrónico transplante de ovários jovens para ratos fêmeas postreproductive10,11,12,13,14.
Status reprodutivo de ratos do dador e do receptor deve ser determinada antes e após o transplante ou procedimentos de ovariectomia. Ratos postreproductive presuntivas que exibem sinais de entrada gonadal antes da cirurgia com 12 meses de idade são excluídos destas experiências. Entrada gonadal é determinada pela citologia vaginal. Dados sobre a citologia vaginal são coletados para pré-cirurgia de pelo menos 10 dias consecutivos garantir um estado postreproductive em camundongos destinatários e ovários ativamente-ciclismo em ratos do doador. Um ciclo estral é definido como o período compreendido entre o dia nucleated células epiteliais aparecem pela primeira vez (ou seja, proestro) para o dia anterior a próxima aparição de células epiteliais nucleadas no esfregaço vaginal, desde que haja um período de leucócitos presença (ou seja, diestro) no meio. O cio é determinado pela presença de células epiteliais escamosas, grandes, com ou sem núcleos. Ratos que não exibir nenhuma atividade cíclica, por um período de 10 dias antes ou após cirurgia estão determinados a ter nenhuma entrada gonadal para o referido período. Ratos que exibir pelo menos um ciclo estral completo em um período de 10 dias antes e/ou após a cirurgia são determinados a ter entrada gonadal para o referido período. Ratos fêmeas devem ser alojados na presença de ratos masculinos ou expostos a roupa de cama suja da jaula de um macho para assegurar exposição consistente a estímulos ciclo de indução.
Esses procedimentos de transplante são realizados mais eficientemente com dois cirurgiões trabalham simultaneamente no doador e receptor ratos. No entanto, os procedimentos são facilmente realizados por um cirurgião, com os ovários de doador mais frequentemente recuperados antes de iniciar o procedimento de ovariectomia sobre o destinatário do mouse. Este protocolo descreve o procedimento para o único cirurgião. Exposição do trato reprodutivo e encerramento do site normalmente são feitas sem um microscópio, Considerando que a remoção e a substituição dos ovários é feito sob um microscópio. Como com qualquer procedimento cirúrgico de aprendizagem, locais de incisão podem ser maiores e cirurgias podem levar mais tempo ao primeiro aprender o procedimento e será geralmente diminuem com a experiência.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Any dissecting scope with an adjustable working distance.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field.</td>
			<td>Stryker/Gaymar</td>
			<td>TP700</td>
			<td>Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture material for abdominal wall</td>
			<td>eSutures</td>
			<td>G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18&#34; HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture material for ovarian bursa</td>
			<td>eSutures</td>
			<td>2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5&#34; BV130-5 TAPER</td>
			<td>10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable gelatin sponge</td>
			<td>PFIZER.</td>
			<td>Gelfoam- PFIZER 09-0315-08.</td>
			<td>cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staples for skin closure</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment.</td>
			<td>MWI Veterinary Supply Co.</td>
			<td>Puralube sterile opthalmic ointment</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine</td>
			<td>MWI Veterinary Supply Co.</td>
			<td>BD 305536</td>
			<td>27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes for saline.</td>
			<td>MWI Veterinary Supply Co.</td>
			<td>BD 309657.</td>
			<td>3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clippers/blade</td>
			<td>Andis</td>
			<td>Super AGR+&#8482; Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge&#174; #40 blade.</td>
			<td>Any clippers with a fine blade.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>University chemical supply</td>
			<td></td>
			<td>dilute to 70% for use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution</td>
			<td>MWI Veterinary Supply Co.</td>
			<td>003233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x2 gauze pads</td>
			<td>MWI Veterinary Supply Co.</td>
			<td>003073</td>
			<td>autoclaved with surgery packs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass beads</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td>Z273619</td>
			<td>Autoclave in sintilation vials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-vinylcyclohexene diepoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td>94956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td>S3547</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic ovarian transplantation procedures to investigate the life- and health-span influence of ovarian senescence in female mice

Transplante de ovário foi primeiramente conduzido na Utah State University em 1963. Em trabalhos mais recentes, heterocrónico transplante de ovários de mamíferos está sendo usado para investigar os efeitos de saúde-protetor dos jovens ovários em fêmeas jovens. Os procedimentos atuais empregam um método de transplante ortotópico, onde os ovários alogênico são transplantados volta para sua posição original na bursa ovariana. Isto está em contraste com o transplante heterotópico mais comumente usado de tecido ovariano/ovários por via subcutânea ou sob a cápsula renal. Todos os três locais fornecem eficiente revascularização de tecidos transplantados. No entanto, transplante ortotópico fornece o ovário com o ambiente de sinalização mais natural e é o único procedimento que fornece a oportunidade para que o animal para se reproduzir naturalmente no período pós-operatório. Um deve tomar cuidado para remover todo o tecido ovariano endógeno durante o procedimento de ovariectomia. Se qualquer tecido endógeno permanece, ou se apenas um ovário é removido, o tecido transplantado permanecerá inativo até que o tecido existente torna-se senescentes. Enquanto revascularização dos ovários transplantados ocorre muito rapidamente, o receptor pode levar uma quantidade considerável de tempo para se adaptar a um novo eixo de (HPG/A) do hipotálamo/hipófise/gonadal/adrenal sinalização regime associado com o transplantado tecido. Isto normalmente leva cerca de 100 dias no rato. Portanto, as experiências de transplantação devem ser projetadas para acomodar este período de adaptação. Resultados típicos com transplante de ovário irão incluir alterações na saúde do destinatário que refletem a idade do ovário transplantado, e não a idade cronológica do destinatário.

Ovariectomia em 21 dias de idade, evitam maior regulação do sistema reprodutor no início da puberdade e eliminar outras influências que a gônada feminina pode ter além de efeitos diretos de hormônios gonadais. Declínio reprodutivo em ratos CBA/J normalmente começa com ciclos irregulares, com 8-10 meses de idade. Com 11 meses de idade, a maioria das fêmeas nesta linha de ratos chegaram a um ponto de falha reprodutiva15 com uma completa perda de oócitos re...

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Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Descritos aqui é ortotópico protocolos de transplante ovariano para modificar o ovário influência sobre a fisiologia do mouse destinatário. Este procedimento cirúrgico é usado para expor os ratos fêmeas para vários tipos de influência no ovário e pode incluir heterocrónico transplantes e transplante de ovários que foram submetidos a tratamentos de vários ex vivo .

Procedimentos de transplantação ovariana ortotópico para investigar a influência de esperança de vida e saúde da senescência ovariana em ratos fêmeas

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Cultura e Co-Culture of Mouse ovários e folículos ovarianos

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Biologia do Desenvolvimento

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Utilizando Análise de confocal<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Para Investigar moduladores de Wnt e Shh morfogénio gradientes

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Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

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Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Indução e validação da senescência celular em células humanas primárias

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...