Name: establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1
Uploaded: 2018-02-13T14:00:00
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यह काम विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (106-2320-बी-037-024), काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय (KMU-M106028, KMU-S105034) और शीर्ष विश्वविद्यालयों अनुदान (TP105PR15), काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय, ताइवान के लिए उद्देश्य से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।

सभी वर्णित प्रक्रियाओं प्रयोगशाला जानवरों के लिए नैतिक दिशा निर्देशों के अनुसार कर रहे हैं30, और प्रोटोकॉल काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय, काऊशुंग, ताइवान की पशु समिति द्वारा अनुमोदित किया ?...

क्लिनिक में छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की प्रभावोत्पादक थेरेपी कार्यात्मक वसूली और रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को बढ़ावा देने के लिए आवश्यक है । वर्तमान में, वहां एक चिकित्सीय सेंसर छोटे फाइबर आणविक तंत्...

neuropathic दर्द को शामिल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी, जो IENFs के अध कि द्वारा स्पष्ट है, स्थितियों के विभिन्न प्रकार में आम है, जैसे डीएम, और कीमोथेरेपी एजेंटों के neurotoxic प्रभाव का एक परिणाम के रूप में1,2, 3,4,5. IENFs पृष्ठीय रूट गैंग्लिया (डीआरजी) में स्थित छोटे व्यास न्यूरॉन्स के परिधीय टर्मिनलों हैं, और IENF अध6के मामलों में समानांतर में प्रभावित कर रहे हैं. उदाहरण के लिए, बदल ऊपर के आनुवंशिक प्रतिलेखन के न्यूरॉन सोमता प्रतिलेखन फैक्टर-3 (ATF3)6,7को सक्रिय करने के ऊपर से प्रदर्शित किया गया है । इसके अलावा, त्वचा बायोप्सी के साथ IENFs इन्नेर्वतिओन का मूल्यांकन छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के निदान के लिए उपयोगी है5,8,9. परंपरागत रूप से, त्वचा की बायोप्सी पर IENFs की प्रोफाइल प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ (९.५)1,10,11के immunohistochemical प्रदर्शन पर निर्भर है । एक साथ लिया, डीआरजी और IENFs के रोग प्रोफाइल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी अंतर्निहित कार्यात्मक शर्त को प्रतिबिंबित और छोटे व्यास ंयूरॉंस पर न्यूरोपैथी के इस प्रकार के कार्यात्मक परिणामों के लिए एक संकेतक हो सकता है ।
पहले, कई प्रयोगात्मक मॉडल कीमोथेरेपी-प्रेरित न्यूरोपैथी के मामलों में IENF अध कि12,13 और तंत्रिका चोट संपीड़न या transection14,15 के कारण के मुद्दे को संबोधित किया है , 16. ये प्रयोगात्मक मॉडल भी बड़े व्यास नसों प्रभावित; यह था, इसलिए मनाया छोटे फाइबर न्यूरोपैथी में प्रभावित बड़े व्यास नसों के योगदान को बाहर करने के लिए संभव नहीं; उदाहरण के लिए, हानिकारक वापसी द्वारा thermosensation विकार की परीक्षा कार्यात्मक मोटर तंत्रिका तंतुओं पर निर्भर करता है17,18,19. इस प्रकार, एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की स्थापना और व्यवस्थित दोनों के रोग की स्थिति की जांच न्यूरॉनी सोमता और उनके परिधीय चमड़े के नीचे तंत्रिका तंतुओं में छोटे व्यास न्यूरॉन्स आवश्यक और अनिवार्य हैं.
RTX एक capsaicin एनालॉग और क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid रिसेप्टर 1 (TRPV1), जो मध्यस्थता nociceptive प्रसंस्करण के लिए एक शक्तिशाली एगोनिस्ट है20,21,22. हाल ही में, परिधीय RTX उपचार तंत्रिकाजन्य दर्द से राहत मिली23,24,25 और RTX के एक intraganglionic इंजेक्शन डीआरजी ंयूरॉंस की अपरिवर्तनीय नुकसान22। परिधीय RTX प्रशासन के प्रभाव खुराक पर निर्भर है20,26,27, जो क्षणिक संवेदीकरण या IENFs के अध... पेचीदा, व्यवस्थित उच्च खुराक RTX उपचार neuropathic दर्द के लिए नेतृत्व किया28, छोटे फाइबर न्यूरोपैथी का एक लक्षण. इन निष्कर्षों का सुझाव है कि उपचार मोड और RTX की खुराक अलग रोग प्रभाव और न्यूरॉन प्रतिक्रियाओं का उत्पादन; बुद्धि के लिए, परिधीय प्रशासन स्थानीय प्रभाव29 से दर्द संचरण रोका और neuropathic व्यवहार विकसित किया है कि6ंयूरॉन सोमता प्रभावित । सामूहिक रूप से, इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि RTX एक multipotency प्रभाव है और मुद्दा उठाया कि क्या RTX की एक विशिष्ट खुराक है कि व्यवस्थित परिधीय नसों जैसे परिधीय IENFs और केंद्रीय न्यूरॉन सोमता को प्रभावित कर सकता है । यदि ऐसा है, RTX एक संभावित एजेंट विशेष रूप से छोटे व्यास ंयूरॉंस को प्रभावित करने और क्लिनिक में छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की नकल हो सकता है । उदाहरण के लिए, क्लिनिक में डीएम चयापचय विकार और परिधीय नसों के neuropathology, जो छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की मुख्य विशेषताएं हैं सहित एक जटिल मुद्दा है. डीएम के तंत्र-संबंधित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी चयापचय विकार है कि मुख्य एजेंट परिधीय नसों को प्रभावित नहीं हो सकता है के योगदान को बाहर नहीं कर सका । इसलिए, डीएम-एसोसिएटेड छोटे फाइबर न्यूरोपैथी एक शुद्ध पशु मॉडल है कि व्यवस्थित चयापचय विकार के प्रभाव को बाहर कर सकता की आवश्यकता है । संशोधित immunostaining विश्लेषण द्वारा प्रदर्शित के रूप में IENF अध और छोटे व्यास ंयूरॉन चोट, सहित एक ठेठ छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल, विकसित करने के लिए RTX के काम खुराक का वर्णन इस प्रोटोकॉल ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemical reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resiniferatoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>avidin-biotin complex</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripherin</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB-1527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF3</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGP9.5</td>
			<td>UltraClone</td>
			<td>RA95101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texas Red-conjugated goat anti-mouse</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-075-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-095-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IITC</td>
			<td>Model 39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Frey filament</td>
			<td>Somedic Sales AB</td>
			<td>10-600-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplate</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>72110017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide rack</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>73310017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1

मधुमेह (डीएम) के साथ रोगियों या कीमोथेरेपी एजेंटों के neurotoxic प्रभाव का अनुभव करने वाले छोटे व्यास संवेदी न्यूरॉन्स के अध: पतन और चोट के कारण सनसनी विकारों विकसित हो सकता है, छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के रूप में संदर्भित. छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के वर्तमान पशु मॉडल दोनों बड़े और छोटे व्यास संवेदी तंतुओं को प्रभावित और इस तरह एक neuropathology भी ठीक से घायल छोटे व्यास संवेदी तंतुओं के प्रभाव का आकलन करने के लिए जटिल बना । इसलिए, यह पर्याप्त रूप से इन समस्याओं की जांच करने के लिए शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की एक प्रयोगात्मक मॉडल विकसित करने के लिए आवश्यक है । इस प्रोटोकॉल का एक प्रयोगात्मक मॉडल का वर्णन करता है छोटे फाइबर न्यूरोपैथी विशेष रूप से प्रभावित छोटे व्यास संवेदी तंत्रिकाओं के साथ resiniferatoxin (RTX), एक ultrapotent एगोनिस्ट के क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid प्रकार 1 (TRPV1), की एक एकल खुराक के माध्यम से intraperitoneal इंजेक्शन, RTX न्यूरोपैथी के रूप में भेजा. इस RTX न्यूरोपैथी रोग अभिव्यक्तियाँ और व्यवहार विषमता है कि छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के साथ रोगियों की नैदानिक विशेषताओं की नकल, intraepidermal तंत्रिका फाइबर सहित (IENF) अध कि, विशेष रूप से चोट में दिखाया छोटे व्यास न्यूरॉन्स, और थर्मल hypoalgesia और यांत्रिक allodynia की प्रेरण. इस प्रोटोकॉल RTX की तीन खुराकों का परीक्षण किया (२००, ५०, और 10 µ g/किग्रा, क्रमशः) और निष्कर्ष निकाला कि RTX की एक महत्वपूर्ण खुराक (५० µ g/किलोग्राम) ठेठ छोटे फाइबर न्यूरोपैथी अभिव्यक्तियों के विकास के लिए आवश्यक है, और एक संशोधित immunostaining प्रक्रिया तैयार करने के लिए IENF अध कि और न्यूरॉन सोमा चोट की जांच. संशोधित प्रक्रिया तेज, व्यवस्थित और आर्थिक है । neuropathic दर्द के व्यवहार मूल्यांकन के लिए छोटे व्यास संवेदी नसों के समारोह प्रकट महत्वपूर्ण है । प्रयोगात्मक कुतर में यांत्रिक थ्रेसहोल्ड का मूल्यांकन विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है और इस प्रोटोकॉल एक स्वनिर्धारित धातु जाल है कि कुतर में इस प्रकार के आकलन के लिए उपयुक्त है का वर्णन करता है । संक्षेप में, RTX न्यूरोपैथी एक नया और आसानी से स्थापित प्रयोगात्मक मॉडल आणविक महत्व और उपचारात्मक एजेंटों के विकास के लिए neuropathic दर्द अंतर्निहित हस्तक्षेप का मूल्यांकन करने के लिए है ।

यह प्रोटोकॉल RTX न्यूरोपैथी के एक उपन्यास माउस मॉडल का वर्णन करता है, जो विशेष रूप से IENF अध कि संवेदी विकारों (चित्रा 2) के साथ जुड़े सहित छोटे व्यास न्यूरॉन्स, को प्रभावित करती है । य?...

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Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

क्षणिक रिसेप्टर संभावित Vanilloid प्रकार 1 के Ultrapotent एगोनिस्ट के साथ एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के एक माउस मॉडल की स्थापना

यह अध्ययन resiniferatoxin (RTX) के साथ शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की एक प्रयोगात्मक मॉडल स्थापित करता है । RTX (५० µ g/kg) की एक अनूठी खुराक रोगी विशेषताओं की नकल करता है और nociceptive आणविक महत्व अंतर्निहित neuropathic दर्द की जांच में मदद कर सकता है कि एक छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल विकसित करने के लिए इष्टतम है ।

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

चूहा midbrain डोपामिनर्जिक गतिशील दबाना तकनीक का प्रयोग न्यूरॉन्स में NMDA रिसेप्टर प्रवाहकत्त्व के आवेदन

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति की स्थापना Neurosphere परख का उपयोग

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

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वयस्क के पूरा पर्वत तैयार ड्रोसोफिला Ventral तंत्रिका गर्भनाल विशालकाय फाइबर डाई के इंजेक्शन के लिए

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

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बनती है और का उपयोग यौगिकों की bioactivity के लिए इलैक्ट्रोफिजियोलॉजी स्क्रीन करने के लिए परख Nanoinjection ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर विशालकाय फाइबर सिस्टम

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin डाइजेस्ट प्रोटोकॉल एक माउस मॉडल की रेटिना वाहिका संरचना का विश्लेषण करने के लिए

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

प्रायोगिक ऑप्टिक तंत्रिका Demyelination की एक चूहे मॉडल में दृश्य पैदा संभावित रिकॉर्डिंग

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

एक छोटी मात्रा रीसाइक्लिंग में बनाए रखा तीव्र हिप्पोकैम्पस स्लाइस में Synaptic प्लास्टिक रिकॉर्डिंग-, छिड़काव-, और डुबकी-प्रकार चैंबर प्रणाली

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optogenetics Identification of a Neuronal Type with a Glass Optrode in Awake Mice

एक न्यूरॉन टाइप की Optogenetics पहचान जागे चूहों में ग् Optrode के साथ

It is a major concern in neuroscience how different types of neurons work in neural circuits. Recent advances in optogenetics have enabled the ...

Methods for the Discovery of Novel Compounds Modulating a Gamma-Aminobutyric Acid Receptor Type A Neurotransmission

एक गामा-Aminobutyric एसिड रिसेप्टर प्रकार एक Neurotransmission का नियमन उपंयास यौगिकों की खोज के लिए तरीके

This manuscript presents a step-by-step protocol for screening compounds at gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptors and its use towards the ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

"एक बिल्ली के बड़े पशु मॉडल में मानव भ्रूण स्टेम सेल-व्युत्पन्न रेटिना ऊतक का सबरेटिनल प्रत्यारोपण

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...