Name: establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1
Uploaded: 2018-02-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 at JoVE.com

Эта работа была поддержана от грантов от министерства науки и технологии (106-2320-B-037-024), медицинский университет Гаосюн (KMU M106028, КМУ-S105034) и цель для топ университетов Грант (TP105PR15), медицинский университет Гаосюн, Тайвань.

Все процедуры, описанные в соответствии с этические руководящие принципы для лабораторных животных30, и протокол был одобрен животное Комитет Гаосюн медицинского университета, Гаосюн, Тайвань.
1. Создание RTX нейропатии
ОСТОРОЖНОСТЬЮ: RT...

Эффективной терапии нейропатии малых волокна в клинике требуется для восстановления функций и качество жизни пациентов. В настоящее время есть отсутствие руководства терапевтических ориентации сенсорные расстройства, связанные с небольшой волоконно нейропатии из-за отсутствия пол?...

Малые волокна невропатии с участием невропатической боли, которая проявляется на перерождение IENFs, распространены в различных типах условий, таких как DM и в результате нейротоксические эффекты химиотерапевтических агентов1,2, 3,4,5. IENFs являются периферийных терминалы малого диаметра нейронов, расположенный в спинной корень ганглиев (DRG) и страдают параллельно в случаях IENF дегенерация6. К примеру изменены вышестоящим генетических транскрипции нейрональных somata была продемонстрирована upregulation активации транскрипционного фактора-3 (ATF3)6,7. Кроме того Оценка IENFs иннервации с биопсия кожи является полезным для диагностики малых волокна нейропатии5,8,9. Традиционно профили IENFs на биопсии кожи зависели иммуногистохимических демонстрация продукта гена белка 9,5 (PGP 9.5)1,10,11. Взятые вместе, патологических профили DRG и IENFs отражать функционального состояния базовой небольшой волоконно нейропатии и может быть показателем для функциональных последствий этого типа невропатии на малого диаметра нейронов.
Ранее несколько экспериментальных моделей рассмотрели вопрос IENF дегенерации в случаях химиотерапии индуцированной нейропатии12,13 и нервные травмы, вызванные сжатием или перерезка14,15 , 16. Эти экспериментальные модели также пострадавших нервов большого диаметра; Он был, таким образом, не представляется возможным исключить вклад пострадавших нервов большого диаметра в наблюдаемых небольшой волоконно нейропатии; например изучение thermosensation расстройства вредных вывода зависит от функциональных моторных нервных волокон17,18,19. Таким образом создания модели нейропатии чистый небольшой волокна и систематически изучения патологические состояния нейрональных somata и их периферийных кожный нервных волокон в нейронах малого диаметра необходимо и важно.
RTX является аналогом капсаицина и мощный агонист Переходный рецепторный потенциал vanilloid рецепторов 1 (TRPV1), которая опосредует ноцицептивных обработки20,21,22. Недавно периферических RTX лечения освобожден нейрогенный боль23,24,25 и intraganglionic инъекции RTX индуцированной необратимой потере DRG нейронов22. Эффект периферийных RTX администрации является дозозависимый20,26,27, которые привели к временной десенсибилизация или дегенерации IENFs. Интригующе систематического лечения RTX высок дозы привело к невропатической боли28, симптом малых волокна нейропатии. Эти результаты показывают, что режим лечения и доза RTX производить различных патологических эффектов и нейронных ответов; именно, периферийных администрации предотвратить боль передачи местных эффектов29 и пострадавших нейрональных somata, разработанные нейропатической поведение6. Вместе эти результаты показывают, что RTX имеет multipotency эффект и поднял вопрос, есть ли конкретные дозы RTX, которые систематически могут повлиять на периферических нервов, например IENFs периферических и центральных нейронов somata. Если это так, RTX может быть потенциальным агентом конкретно затрагивают малого диаметра нейронов и имитировать небольшой волоконно невропатии в клинике. К примеру DM в клинике является сложным вопросом, включая метаболические расстройства и невропатологии периферических нервов, которые являются основными характеристиками малых волокна нейропатии. Механизмы DM-связанных небольшой волоконно невропатии не может исключать вклад метаболические расстройства, которое не может быть основным агентом, затрагивающих периферических нервов. Таким образом нейропатии DM-связанных небольшой волоконно требует чистой животных модель, которая могла бы исключить влияние систематического метаболические расстройства. Этот протокол описывает рабочую дозу RTX разработать модель типичный небольшой волоконно нейропатии, включая IENF дегенерация и малого диаметра нейронных травмы, как это продемонстрировано изменение иммуноокрашивания анализа.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemical reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resiniferatoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>avidin-biotin complex</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripherin</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB-1527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF3</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGP9.5</td>
			<td>UltraClone</td>
			<td>RA95101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texas Red-conjugated goat anti-mouse</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-075-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-095-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IITC</td>
			<td>Model 39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Frey filament</td>
			<td>Somedic Sales AB</td>
			<td>10-600-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplate</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>72110017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide rack</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>73310017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1

У пациентов с сахарным диабетом (DM), или тех, кто испытывает нейротоксические эффекты химиотерапевтических агентов, может развиться ощущение расстройств из-за дегенерации и травмы сенсорных нейронов малого диаметра, именуемые как малые волокна нейропатии. Настоящее время Животные модели малых волокна нейропатии влияет на оба большого и малого диаметра чувствительных волокон и тем самым создать невропатология слишком сложны, чтобы должным образом оценить последствия раненых малого диаметра чувствительных волокон. Таким образом необходимо разработать экспериментальную модель чистой небольшой волоконно нейропатии надлежащим образом рассмотреть эти вопросы. Этот протокол описывает экспериментальной модели малых волокна нейропатии, конкретно затрагивающих сензорных нервах малого диаметра с resiniferatoxin (RTX), ultrapotent агонист Переходный рецепторный потенциал vanilloid типа 1 (TRPV1), через одну дозу внутрибрюшинной инъекции, называется RTX нейропатии. Этот RTX нейропатии показал патологических проявлений и поведенческие аномалии, которые имитируют клинических характеристик больных с небольшой волоконно нейропатии, включая intraepidermal дегенерация нервных волокон (IENF), специально травмы в малого диаметра нейронов и индукции hypoalgesia тепловых и механических аллодиния. Этот протокол испытания трех доз RTX (200, 50 и 10 мкг/кг, соответственно) и пришел к выводу, что критической дозой RTX (50 мкг/кг) для развития проявления невропатии типичных малых волокна и подготовила измененный иммуноокрашивания процедура расследования, IENF дегенерация и повреждения нейронов сома. Измененная процедура быстро, систематической и экономической. Поведенческие оценки нейропатической боли важно выявить функции сензорных нервах малого диаметра. Оценка механических порогов в экспериментальной грызунов является особенно сложным, и этот протокол описывает заказной металлической сетки, которая подходит для этого вида оценки грызунов. В целом RTX невропатия является новой и легко установленных экспериментальной модели для оценки молекулярной значимость и вмешательства, лежащие в основе невропатической боли для развития терапевтических агентов.

Этот протокол описывает модель Роман мыши RTX нейропатии, который конкретно затрагивает малого диаметра нейронов, включая IENF дегенерации, связанные с сенсорными расстройствами (рис. 2). После протокол, описанные здесь животных выставлены hypoalgesia тепловых...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 at JoVE.com

Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Создание мыши модель чистой небольшой волоконно невропатии с Ultrapotent агонист Переходный рецепторный потенциал Vanilloid типа 1

Это исследование устанавливает экспериментальную модель чистой небольшой волоконно невропатии с resiniferatoxin (RTX). Уникальный доза RTX (50 мкг/кг) является оптимальным для разработки модели небольшой волоконно нейропатии, которая имитирует характеристики пациента и может помочь исследовать ноцицептивных молекулярной значения, лежащие в основе нейропатической боли.

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Применение NMDA-рецепторов в проводимости мозга крысы дофаминергических нейронов с помощью динамического Техника Clamp

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Создание эмбриональных Мышь нейронные культуры стволовых клеток Использование Neurosphere Пробирной

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Всего Подготовка горе взрослых Drosophila Брюшной нервной для инъекций Гигантские Dye Волоконно

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Парные Nanoinjection и электрофизиологии Анализ для выявления биологической активности соединений с использованием DROSOPHILA MELANOGASTER Гигантские системы волоконно

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Трипсин Digest протокола для анализа сосудистой сети сетчатки модели мыши

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Визуальный вызванных потенциалов Запись в крысиной модели экспериментальной зрительного нерва демиелинизация

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optogenetics Identification of a Neuronal Type with a Glass Optrode in Awake Mice

Оптогенетика идентификация типа нейронов с Optrode стекла в бодрствовать мышей

It is a major concern in neuroscience how different types of neurons work in neural circuits. Recent advances in optogenetics have enabled the ...

Methods for the Discovery of Novel Compounds Modulating a Gamma-Aminobutyric Acid Receptor Type A Neurotransmission

Методы для обнаружения новых соединений, модулирует гамма - аминомасляная кислота рецепторов типа синапсах

This manuscript presents a step-by-step protocol for screening compounds at gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptors and its use towards the ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Субретинальная трансплантация ткани сетчатки, полученной из эмбриональных стволовых клеток человека, на модели крупного крупного животного кошки

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...