Name: establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1
Uploaded: 2018-02-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Ministerio de ciencia y tecnología (106-2320-B-037-024), Universidad médica de Kaohsiung (KMU-M106028, S105034 KMU) y objetivo para la concesión de las universidades Top (TP105PR15), Universidad médica de Kaohsiung, Taiwán.

Todos los procedimientos descritos están conforme a normas éticas para los animales de laboratorio30, y el protocolo ha sido aprobado por la Animal Comité de Kaohsiung Universidad médica, Kaohsiung, Taiwan.
1. establecimiento de la neuropatía RTX
PRECAUCIÓN: RTX es neurotóxica y peligrosos. En contacto, que actúa como un irritante a los ojos, membranas mucosas y tracto respiratorio superior. Evitar la inhalación y gafa...

Eficaz tratamiento de la neuropatía de fibra pequeña en la clínica es necesaria para promover la recuperación funcional y calidad de vida de los pacientes. En la actualidad, hay falta de una guía terapéutica a trastornos sensoriales asociados con neuropatía de fibra pequeña debido a la falta de comprensión global de los mecanismos moleculares subyacentes a lesiones neuronales de pequeño diámetro. Los modelos anteriores de la neuropatía generalmente afectaron ambos nervios sensoriales de diámetro grande y peq...

Neuropatía de fibra pequeña que implicaba el dolor neuropático, que es evidente por la degeneración de IENFs, es común en varios tipos de condiciones, como la DM y como resultado de los efectos neurotóxicos de los agentes quimioterapéuticos1,2, 3,4,5. IENFs son los terminales periféricos de diámetro pequeño de neuronas localizadas en los ganglios de raíz dorsal (GRD) y son afectados en paralelo en los casos de IENF degeneración6. Por ejemplo, la transcripción genética upstream alterada de Somas neuronales ha demostrado por el upregulation de activar la transcripción factor-3 (ATF3)6,7. Por otra parte, la evaluación de la inervación IENFs con biopsia de la piel es útil para el diagnóstico de neuropatía de fibra pequeña5,8,9. Tradicionalmente, los perfiles de las IENFs en la biopsia de la piel han dependido de demostración immunohistochemical del producto del gene de la proteína 9.5 (PGP 9.5)1,10,11. Tomados en conjunto, los perfiles patológicos de DRG y IENFs reflejan la neuropatía de fibra pequeña subyacente condición funcional y pueden ser un indicador de las consecuencias funcionales de este tipo de neuropatía en las neuronas de pequeño diámetro.
Previamente, varios modelos experimentales han abordado el tema de la degeneración IENF en casos de neuropatía inducida por quimioterapia12,13 y nervio lesión causada por compresión o sección transversal14,15 , 16. estos modelos experimentales también afectaron los nervios de gran diámetro; por consiguiente, no es posible excluir la contribución de los nervios afectados de gran diámetro en la neuropatía de fibra pequeña observada; por ejemplo, el examen de thermosensation trastorno por retiro nocivo depende de las fibras del nervio de motor funcional17,18,19. Por lo tanto, establecer un modelo de neuropatía de fibra pequeña pura e investigar sistemáticamente el estado patológico de Somas neuronales y sus fibras nerviosas cutáneas periféricas en las neuronas de pequeño diámetro son necesario e imperioso.
RTX es un análogo de la capsaicina, un potente agonista del receptor transitorio potencial vaniloides receptor 1 (TRPV1), que media el proceso nociceptivo20,21,22. Recientemente, periférica tratamiento RTX relevó dolor neurogénico23,24,25 y una inyección intraganglionic de RTX indujo la pérdida irreversible de neuronas DRG22. El efecto de la administración de RTX periférica es dosis dependiente20,26,27, que dio lugar a la desensibilización transitoria o degeneración de IENFs. Curiosamente, tratamiento sistemático de RTX de la alto-dosis llevó a dolor neuropático28, un síntoma de neuropatía de fibra pequeña. Estos resultados sugieren que el modo de tratamiento y la dosis de RTX producen distintos efectos patológicos y respuestas neuronales; a saber, administración periférica impidió la transmisión del dolor por los efectos locales29 y afectado los Somas neuronales que desarrollado comportamiento neuropático6. Colectivamente, estos resultados indican que el RTX tiene un efecto de multipotencia y planteó la cuestión de si existe una dosis determinada de RTX que sistemáticamente puede afectar los nervios periféricos, como la IENFs periféricas y central Somas neuronales. Si es así, el RTX puede ser un agente potencial que específicamente afectan a las neuronas de pequeño diámetro y mímico neuropatía de fibra pequeña en la clínica. Por ejemplo, DM en la clínica es un tema complicado como desorden metabólico y neuropatología de nervios periféricos, que son las principales características de la neuropatía de fibra pequeña. Los mecanismos de la neuropatía de fibra pequeña asociada a DM no podrían excluir la contribución de desorden metabólico que puede no ser el principal agente que afectan a los nervios periféricos. Por lo tanto, neuropatía de fibra pequeña asociada a la DM requiere de un modelo animal puro que podría excluir los efectos del desorden metabólico sistemático. Este protocolo describe la dosis de trabajo de RTX para desarrollar un modelo de neuropatía de fibra pequeña típica, como IENF degeneración y lesión de la neurona de pequeño diámetro, según lo demostrado por análisis de immunostaining modificado.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemical reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resiniferatoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>avidin-biotin complex</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripherin</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB-1527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF3</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGP9.5</td>
			<td>UltraClone</td>
			<td>RA95101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texas Red-conjugated goat anti-mouse</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-075-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-095-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IITC</td>
			<td>Model 39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Frey filament</td>
			<td>Somedic Sales AB</td>
			<td>10-600-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplate</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>72110017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide rack</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>73310017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1

Pacientes con diabetes mellitus (DM) o experimentar los efectos neurotóxicos de los agentes quimioterapéuticos pueden desarrollar trastornos de la sensibilidad debido a la degeneración y lesión de las neuronas sensoriales de pequeño diámetro, conocido como neuropatía de fibra pequeña. Modelos animales actuales de neuropatía de fibra pequeña afectan tanto las fibras sensoriales de diámetro grande y pequeño y así crean una neuropatología demasiado complejos para evaluar correctamente los efectos de heridas fibras sensoriales de pequeño diámetro. Por lo tanto, es necesario desarrollar un modelo experimental de neuropatía de fibra pequeña pura para examinar adecuadamente estas cuestiones. Este protocolo describe un modelo experimental de neuropatía de fibra pequeña que específicamente afectan nervios sensoriales de pequeño diámetro con resiniferatoxina (RTX), un agonista ultrapotent del receptor transitorio potencial vaniloides tipo 1 (TRPV1), a través de una sola dosis de inyección intraperitoneal, se denomina neuropatía RTX. Esta neuropatía RTX mostró manifestaciones patológicas y anormalidades del comportamiento que imitan las características clínicas de los pacientes con neuropatía de fibra pequeña, incluyendo la degeneración de la fibra del nervio (IENF) de intraepidermal, específicamente lesiones en las neuronas de pequeño diámetro y la inducción de hipoalgesia térmica y alodinia mecánica. Este protocolo probado tres dosis de RTX (200, 50 y 10 μg/kg, respectivamente) y concluyeron que una dosis crítica de RTX (50 μg/kg) es necesaria para el desarrollo de manifestaciones de neuropatía de fibra pequeña típica y preparado un procedimiento modificado de la inmunotinción para investigar IENF degeneración y lesión del soma neuronal. El procedimiento modificado es rápida, sistemática y económica. Evaluación conductual del dolor neuropático es fundamental para revelar la función de los nervios sensoriales de pequeño diámetro. La evaluación de los umbrales mecánicos en roedores experimentales es particularmente desafiante y este protocolo describe una malla metálica modificada para requisitos particulares que es conveniente para este tipo de evaluación en los roedores. En Resumen, la neuropatía RTX es un modelo experimental nuevo y fácilmente establecido para evaluar la significación molecular e intervención subyacente dolor neuropático para el desarrollo de agentes terapéuticos.

Este protocolo describe un modelo de ratón novela de neuropatía RTX, que afecta específicamente a las neuronas de pequeño diámetro, incluyendo la degeneración IENF, asociada con los trastornos sensoriales (figura 2). Siguiendo el protocolo descrito en este documento, los animales exhiben hipoalgesia térmica y alodinia mecánica en D7 después RTX de la inyección. Para establecer este modelo de neuropatía de fibra pequeña, tres dosis de RTX: 200, 50 ...

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Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Establecer un modelo de ratón de una neuropatía de fibra pequeña pura con el Ultrapotent agonista de Receptor transitorio potencial vaniloides tipo 1

Este estudio establece un modelo experimental de neuropatía de fibra pequeña pura con la resiniferatoxina (RTX). Una dosis única de RTX (50 μg/kg) es óptimo para el desarrollo de un modelo de neuropatía de fibra pequeña que imita las características de los pacientes y podría ayudar a investigar el significado molecular nociceptivo subyacente dolor neuropático.

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

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