Name: establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1
Uploaded: 2018-02-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 at JoVE.com

Bu eser Bakanlığı bilim ve Teknoloji (106-2320-B-037-024), Kaohsiung Tıp Üniversitesi (KMU-M106028, KMU-S105034) ve amaç üst üniversiteler hibe (TP105PR15), Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Tayvan için gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Laboratuvar hayvanları30için etik kurallar doğrultusunda açıklanan yordamları vardır ve protokol hayvan Komitesi Kaohsiung Tıp Üniversitesi tarafından Kaohsiung, Tayvan kabul gördü.
1. RTX nöropati kurulması
Uyarı: RTX Nörotoksik ve tehlikeli. Temas, göz, müköz membranlar ve üst solunum yolu için tahriş edici olarak görür. İnhalasyon önlemek ve laboratuvar gözlük ve kat RTX hazırlık sırasında giy...

Küçük fiber nöropati klinikte etkili tedavisi hastaların yaşam kalitesi ve fonksiyonel iyileşme teşvik için gereklidir. Şu anda, küçük çaplı nöronal yaralanma temel moleküler mekanizmaları kapsamlı anlayış eksikliği küçük fiber nöropati ile ilgili duyusal bozukluk hedefleme terapötik bir rehber eksikliği vardır. Nöropati önceki modellere genellikle her iki büyük - ve küçük çaplı duyusal sinir etkilenen; Örneğin, kemoterapi kaynaklı nöropati12,<s...

IENFs dejenerasyon tarafından belirgindir, nöropatik ağrı içeren küçük fiber nöropati koşulları, DM gibi ve kemoterapötik ajanlar1,2Nörotoksik etkileri sonucunda çeşitli türleri yaygındır, 3,4,5. IENFs dorsal kök gangliyon (DRG) bulunan küçük çaplı nöronların periferik terminalleri ve paralel IENF dejenerasyon6durumlarında etkilenir. Örneğin, nöronal somata değişmiş ters yönde genetik transkripsiyon transkripsiyon faktörü-3 (ATF3)6,7etkinleştirme upregulation tarafından kanıtlanmıştır. Ayrıca, IENFs innervasyon cilt biyopsisi ile değerlendirilmesi küçük fiber nöropati5,8,9tanısı için yararlıdır. Geleneksel olarak, Cilt biyopsisi üzerinde IENFs profilleri protein gen ürünü immunohistokimyasal serilerinden 9,5 (PGP 9.5)1,10,11bağlıydı. Birlikte ele alındığında, DRG ve IENFs patolojik profilleri fonksiyonel durumu temel küçük fiber nöropati yansıtmak ve fonksiyonel sonuçları nöropati küçük çaplı nöronlar üzerinde bu tür bir göstergesi olabilir.
Daha önce çeşitli deneysel modeller IENF dejenerasyon sıkıştırma veya transeksiyon14,15 tarafından neden kemoterapi kaynaklı nöropati12,13 ve sinir yaralanma durumlarda sorunu ele sahip , 16. etkilenen bu modeller de geniş çaplı sinirler; Bu nedenle oldu, gözlenen küçük fiber nöropati; etkilenen büyük çaplı sinirler katkısını dışlamak mümkün değil Örneğin, thermosensation bozukluk zararlı çekilme tarafından incelenmesi fonksiyonel motor sinir lifleri17,18,19üzerinde bağlıdır. Böylece, bir saf küçük fiber nöropati model kurma ve sistematik olarak nöronal somata ve küçük çaplı nöronlar içinde onların çevre Kutanöz sinir lifleri patolojik durumunu araştıran gerekli ve zorunludur.
RTX kapsaisin Analog ve hangi nosiseptif işleme20,21,22aracılık eder geçici reseptör potansiyel vanilloid reseptör 1 (TRPV1), için güçlü bir agonist var. Son zamanlarda, periferik RTX tedavi nöropatik ağrı23,24,25 rahatlamış ve intraganglionic enjeksiyonu RTX DRG nöronlar22geri alınamaz kaybına bağlı. Periferik RTX yönetim geçici duyarsızlaştırma veya IENFs dejenerasyonu sonuçlanan doz bağımlı20,26,27, etkisidir. Çoğu intriguingly konularda, sistematik yüksek doz RTX tedavi nöropatik ağrı28için küçük fiber nöropati belirtisi yol açtı. Bu bulgular tedavi modu ve RTX doz belirgin patolojik etkileri ve nöronal yanıt-e doğru üretmek öneririz; Çevre Yönetim ağrı iletim yerel etkileri29 tarafından engelledi ve nöropatik davranış6geliştirilen nöronal somata etkiledi. Toplu olarak, bu bulgular RTX multipotency etkisi ve sistematik olarak periferik IENFs ve merkezi nöronal somata gibi periferik sinirleri etkileyebilir RTX belirli bir doz olup gündeme gösterir. Eğer öyleyse, RTX özellikle küçük çaplı nöronlar etkiler ve küçük fiber nöropati klinikte taklit potansiyel bir ajan olabilir. Örneğin, DM klinikte metabolik bozukluk ve küçük fiber nöropati temel özelliklerinin çoğu periferik sinirlerin nevropatoloji dahil olmak üzere karmaşık bir konudur. Küçük fiber DM ilişkili nöropati mekanizmaları periferik sinirleri etkileyen ana Ajan olmayabilir metabolik bozukluk katkısını dışlamak değil. Bu nedenle, küçük fiber DM ilişkili nöropati sistematik metabolik bozukluk etkileri dışlamak saf hayvan modeli gerektirir. Bu iletişim kuralı RTX IENF dejenerasyon ve küçük çaplı nöron yaralanma, değiştirilmiş immunostaining analiz tarafından gösterildiği gibi bir tipik küçük fiber nöropati modeli geliştirmek için çalışma doz açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemical reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resiniferatoxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>avidin-biotin complex</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripherin</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB-1527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF3</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGP9.5</td>
			<td>UltraClone</td>
			<td>RA95101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antisera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texas Red-conjugated goat anti-mouse</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-075-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-095-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IITC</td>
			<td>Model 39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Frey filament</td>
			<td>Somedic Sales AB</td>
			<td>10-600-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplate</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>72110017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide rack</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>73310017</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing a mouse model of a pure small fiber neuropathy with the ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1

Diabetes mellitus (DM) veya bu kemoterapötik ajanların Nörotoksik etkileri yaşıyor olan hastalarda duyu bozuklukları dejenerasyon ve küçük çaplı duyusal nöronların, küçük fiber nöropati anılacaktır yaralanma nedeniyle gelişebilir. Her iki büyük - ve küçük çaplı duyusal lifler etkiler ve böylece bir nevropatoloji düzgün yaralı küçük çaplı duyusal lifler etkilerini değerlendirmek için çok karmaşık oluşturmak küçük fiber nöropati mevcut hayvan modelleri. Bu nedenle, yeterli bu sorunları incelemek için saf küçük fiber nöropati deneysel bir model geliştirmek gereklidir. Özellikle resiniferatoxin (RTX), geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1), tek bir doz ile ultrapotent bir agonist ile küçük çaplı duyu sinirleri etkileyen küçük fiber nöropati bir deneme modeli bu protokolünü açıklar mayi enjeksiyon, RTX nöropati anılacaktır. Patolojik bulgular ve küçük fiber nöropati, intraepidermal Sinir lifi (IENF) dejenerasyonu, özellikle yaralanma dahil olan hastalarda klinik özelliklerini taklit davranış anormallikleri gösterdi bu RTX nöropati küçük çaplı neurons ve indüksiyon termal hypoalgesia ve mekanik allodynia. Bu iletişim kuralı RTX üç doz test (200, 50 ve 10 µg/kg, sırasıyla) ve sonucuna RTX kritik bir doz (50 µg/kg) tipik küçük fiber nöropati tezahürlerini gelişimi için gerekli ve değiştirilmiş immunostaining yordamına hazırlanan IENF dejenerasyon ve nöronal soma yaralanma araştırmak. Hızlı, sistematik ve ekonomik değiştirilmiş işlemdir. Nöropatik ağrı davranış değerlendirilmesi küçük çaplı duyusal sinir fonksiyonu ortaya çıkarmak için önemlidir. Deneysel Rodents mekanik eşikleri değerlendirilmesi özellikle zordur ve bu iletişim kuralı için bu tür bir değerlendirme Rodents uygundur özelleştirilmiş bir metal kafes açıklar. Özetle, moleküler önemi ve nöropatik ağrı terapötik ajanlar gelişimi için temel müdahale değerlendirmek için yeni ve kolayca kurulan deneysel bir model RTX nöropati var.

Bu iletişim kuralı özellikle küçük çaplı nöronlar, IENF dejenerasyon, duyusal bozukluklar (Şekil 2) ile ilgili de dahil olmak üzere etkiler RTX nöropati bir roman fare modeli açıklar. Burada açıklanan iletişim kuralı hayvanlar termal hypoalgesia ve D7 yazı RTX enjeksiyon, mekanik allodynia sergilendi. Bu küçük fiber nöropati model RTX üç doz kurmak için: 200, 50 ve 10 µg/kg ı.p. rota tarafından idare. Belgili tanımlık RTX doz (5...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 at JoVE.com

Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması

Bu çalışmada deneysel bir model saf küçük fiber nöropati ile resiniferatoxin (RTX) kurar. RTX benzersiz bir doz (50 µg/kg) hasta özellikleri taklit eden bir küçük fiber nöropati modeli geliştirmek için en uygun ve nöropatik ağrı altında yatan nosiseptif moleküler önemini araştırmak yardımcı olabilir.

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Dinamik Kelepçe Tekniği ile Sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlar NMDA Reseptör İletkenlik Uygulama

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Yetişkin Tüm Dağı Hazırlık Drosophila Dev Fiber Boya Enjeksiyon Ventral Sinir Kablosu

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Kullanarak Bileşiklerin Biyoaktivite için eşli Nanoinjection ve Ekran için Elektrofizyoloji Testi Drosophila melanogaster Dev Elyaf Sistemi

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Tripsin Digest Protokolü Fare Modeli Retina damarları Analiz

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optogenetics Identification of a Neuronal Type with a Glass Optrode in Awake Mice

Bir cam Optrode uyanık farelerde nöronal türüyle Optogenetics tanımlaması

It is a major concern in neuroscience how different types of neurons work in neural circuits. Recent advances in optogenetics have enabled the ...

Methods for the Discovery of Novel Compounds Modulating a Gamma-Aminobutyric Acid Receptor Type A Neurotransmission

Bir Neurotransmission roman bileşikleri bir gama - aminobütirikasit reseptör oransal keşfi için yöntemleri yazın

This manuscript presents a step-by-step protocol for screening compounds at gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptors and its use towards the ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Bir Kedi Büyük Hayvan Modelinde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retinal Dokunun Subretinal Transplantasyonu

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...