Name: a kinetic fluorescence-based ca2+ mobilization assay to identify g protein-coupled receptor agonists, antagonists, and allosteric modulators
Uploaded: 2018-02-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Kinetic Fluorescence-based Ca2+ Mobilization Assay to Identify G Protein-coupled Receptor Agonists, Antagonists, and Allosteric Modulators at JoVE.com

저자 에릭 Fonteyn과 Geert Schoofs 우수한 기술 지원에 감사 하 고 싶습니다. 이 일 구 루벤에 의해 지원 되었습니다 (no를 부여 합니다. PF/10/018), Fonds voor Wetenschappelijk Onderzoek (FWO, no를 부여. G.485.08), 그리고 Fondation Dormeur 파두츠.

참고: 섹션 1과 2에 설명 된 모든 단계는 층 류 캐비닛에 무 균 조건 하에서 수행 됩니다.
1입니다. U87의 유지 보수입니다. CD4.hCXCR4 셀
<ol><li>37 ° C, 5% CO2 습도 인큐베이터 T75 문화 플라스 크에 세포 성장. 참고: 체 외에서 세포 라인이이 프로토콜에 사용 되는 U87 세포종 세포 라인 안정적으로 차별화 4의 클러스터 (CD4)와 인간의 표현 CXCR4 앞에서 설명한<sup class="x...

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캘리포니아2 +-동원 분석 결과 여기에 설명 된 이전을 식별 하 고 특성 수용 체 길 항 근 CXCR417를 대상으로 하는 유용한 도구가 될 표시 되었습니다. 그러나 그것은,,이 방법을 적용할 수 있는 일반적으로 그들의 활성화 시 cytosolic 캘리포니아2 + 릴리스를 실행 하는 다른 GPCRs의 큰 그룹에 CCR5 관련된 chemokine 수용 체에 대 한 볼 수 있듯이 예상. 반면 CCR5 경우 정확 하 ...

GPCRs는 extracellular ligand 바인딩 시 신호 변환 폭포를 활성화 하는 세포 표면 단백질의 중요 한 superfamily. 그들은 다양 한 세포내 신호 통로 결국 생물학 응답1,2의 개시 귀착되는 자극 펩 티 드, 단백질 호르몬, 생물 아민, 지질 등의 큰 다양성에 의해 활성화 될 수 있다 . 또한, GPCRs 관련 된 많은 경우 모든, 발달 및 생리 적 프로세스와 많은 인간 질병 장애 GPCR 신호 또는 수용 체 overexpression와 연결. GPCRs는 그러므로 약1,3에서 가장 검증 된 약리 목표 사이.
일반적으로, GPCR 약물 발견 워크플로 셀룰러 심사 분석 활성화 작은 분자, 단일 클론 항 체, 등 특정 GPCR의 활동을 조절 수 있는 펩 티 드 화합물의 식별으로 시작 합니다. GPCR 신약 같은 화합물에 대 한 검색을 존재 하는 다양 한 유형의 분석 실험에 대부분의 중반-를 높은 처리량 검열 캠페인와 호환 됩니다. 가장 많이 사용 되는 분석 실험 포함 수용 체 바인딩 실험, 형광 또는 발광 기반 분석 실험의 소위 2 차 메신저 (예를 들어, 캘리포니아2 +, 순환 아데노신 monophosphate (AMP)), phenotypic 수준에서 변동 감지 심사 분석, 및 β-arrestin 모집4분석 실험. 분석 결과의 특정 유형에 대 한 선택, 여러 요인에 따라 달라질 수 있습니다 하지만 또한 사전 지식에 관한 특정된 GPCR의 신호 속성에 의해 결정 됩니다. 길 항 제는 GPCR에 바인딩 heterotrimeric G 단백질의 α 소 단위에 guanidine 3 인산 염 (GTP)에 대 한 guanidine diphosphate (GDP)의 교환 catalyzing 구조적 변화를 유도 합니다. 그 후 Gα-GTP 소 단위 Gβγ 소 단위에서 dissociates 고 두 소 단위 신호 통로 더 시작 됩니다. 가수분해 GTP 분자와 Gα의 후속 다시 협회의 GDP와 Gβγ 소 단위 복구할 것 이다 G 단백질 그것의 비활성 형태5,6. 따라 시퀀스 유사성 Gα 소 단위의 G 단백질의 종류 정의 (GsG나, Gq, G12/13)7. Gα 를 통해 신호 소 단위 (Gs)를 통해 상승 증가 등 여러 가지 일반적인 답변을 또는 준다 순환 앰프 생산 및 세포내 캘리포니아2 + (Gq)를 통해 동원 (G나)를 통해 감소5 ,7. Gβγ 소 단위 세포내 이펙터 경로 유도 할 수 있습니다. 예를 들어, G나의 활성화 시-결합 된 GPCRs, Gβγ 직접 phospholipase C (PLC-β) 이노 시 톨 3 인산 염 (IP3)를 생산 하는 세포내 상점7 캘리포니아2 + 의 릴리스 자극 수 . 수용 체 활성화, 다음 GPCRs GPCR kinases (GRKs) β-arrestins와의 상호 작용을 촉진 하 여 phosphorylated는. 이 프로세스는 G 단백질 신호 종료 하 고 수용 체 탈 감 작 및 결국 국제화. Β-arrestins 다른 신호 통로8를 신호 하는 G 단백질의 독립 실행할 수 있는 다중 분자 복합물을 형성 수 있습니다.
G나chemokine 수용 체 subfamily 내-결합된 CXCR4는 GPCR 약물 발견에 대 한 유망 대상으로 많은 관심을 제기 하고있다. 인간 면역 결핍 바이러스 1 (hiv-1)에 대 한 주요 공동 수용 체로 서의 설립된 역할 주어진 바이러스 항목 및 감염, 화합물 CXCR4를 대상으로 처음으로 개발 되었다 항 HIV 약물 후보9. 더 최근에, 증거의 성장 시체는 지적 했다 중요 한 역할을 CXCR4 위한 tumorigenesis 및 암 전이 뿐만 아니라 종양에 잘 검증 된 치료 대상 만들기에10. 20 개 이상 유형의 인간 암 및 컨트롤 종양 세포 생존, 확산, 그리고 마이그레이션 뿐만 아니라 종양 관련 신생10CXCR4 매우 표현 된다. 다른 화학 수업의 CXCR4 antagonists 설명된11,12, AMD3100 현재 림프 종의 치료 하는 동안 사용 되는 줄기 세포 동원 요원으로 병원에서 사용 하기 위해 승인 작은 분자에만 하지만 이전 되었습니다. 그리고 골 수 종 환자13,14. 임상 시험 진행 안전 및 여러 다른 CXCR4 길 항 근의 종양학12에 강한 초점 하지만 다른 인간 질병에 효능을 평가 하는. 주어진 CXCR4 길 항 제에 대 한 많은 잠재적인 응용 프로그램, 향상 된 pharmacokinetic 속성, 향상 된 생체 이용률, 또는 잠재적으로 적은 부작용 소설 화합물에 대 한 검색 보증 된다.
여기, 키네틱 형광 기반 셀룰러 분석 결과 주로 하는 데 사용 화합물 CXCR4 억제의 능력에 대 한 화면 설명. 이 방법의 형광 측정의 내 생 적인 주 작동 근, chemokine ligand (이전으로 알려진 stromal 세포 파생 요소 1α (CXCL12에 의해 CXCR4 활성화 시 갖는 세포내 캘리포니아2 + 농도의 일시적 증가에 따라 SDF1-α)), 그리고이 CXCL12 유도 캘리포니아2 + 응답 특정 화합물의 잠재적 저해. 이 분석 결과에서는 U87 인간의 세포종 세포 인간의 CXCR4 수용 체를 표현 안정적으로 사용 됩니다. 동시에 이러한 셀 CXCR7, 관련된 chemokine 수용 체는 또한 CXCL1215,,1617의 내 생 적인 표현 부족. CXCR7는 이전 또한 보였다 CXCR4와 heterodimers 형성 수18이 후자의 수용 체 신호 속성을 변조 함으로써. 세포내 캘리포니아2 + CXCR4 중재의 수준에 있는 동요는 CXCR4 로드 모니터링 fluo-2 acetoxymethyl (오전) 에스테 르, 셀 침투성 높은 선호도 형광 캘리포니아2 ++ 세포-염료를 바인딩. Fluo-2 오전은 490에서 흥분 수 단일 파장 형광 분자 nm의 방출 형광 520에서 측정 하는 동안 nm. 캘리포니아2 + 바인딩을 사이 Ca2 +넓은 동적 범위에 따라 증가 하는이 방출 형광-바운드 및 언바운드 상태. 형광 신호 증가, 몇 분의 시간 간격 내에서 발생 하는 과도 이며 이후에 붕괴 것입니다. 수용 체 활성화의 수준으로 형광 방출 더 상호의 피크 높이입니다. 자체 분석 결과 분석 결과에 pipetting 단계 표준화를 수 있는 통합된 pipetting 시스템을 보유 하 고 있는 강화 CCD (ICCD) 카메라를 갖춘 형광 microplate 리더를 사용 하 여 수행 됩니다 ( 재료의 표참조) . 또한, 형광 신호는 미 판의 모든 우물에서의 동시 측정에 사용 되는 형광 판독기의 또 다른 주요 장점은입니다. 첫 번째는 동안 조사 (예를 들어, 고정된 농도에 또는 희석 시리즈에 작은 분자의 패널) 화합물 fluo-2 오전에 추가 분석 결과의 부분 로드 CXCR4+ U87 셀 뒤에 ~ 10 분 잠복기 화합물의 잠재적인 agonistic 효과 지속적으로 실시간으로 측정 됩니다. 그런 다음에 생 길 항 제 (즉, CXCL12) 연상 CXCR4 중재 일시적인 증가 세포내 캘리포니아2 +의 수준에서 셀에 추가 됩니다. 분석 결과의이 부분 동안에 시험된 화합물의 잠재적인 대립 활동을 평가할 수 있습니다. 분석 결과 일반적인 워크플로의 도식 개요는 그림 1에 표시 됩니다.
이 Ca2 + 동원 분석 결과 경쟁 CXCR4 길 항 제 (즉, 생 주 작동 근 묶는 수용 체를 자극을 방지 하는 화합물)의 억제 효능을 결정을 위해 주로 사용 되는 있지만 그것은 또한 수용 체 주 작동 근을 식별할 수 있습니다 및, 더하여, 화합물을 바인딩 allosteric 사이트 (즉, 세 생 주 작동 근에 의해 점령 orthosteric 바인딩 사이트에서 다른 사이트)에 의해 그들의 기능을 발휘. 화합물의 후반 종류의 예로 allosteric 촉진제 및 PAMs 및 NAMs19,20있습니다. 특정 수용 체 길 항 근으로 NAMs CXCL12 유도 캘리포니아2 + 응답을 억제 것, 반면 PAMs이이 응답을 향상 시킬 것 이다 (또한 토론 을 참조 하십시오 섹션). 이 방법을 적용할 수 있는 최소한의 최적화 노력으로 다른 GPCRs에 적어도 예상 된다 분석 결과 특히 대상 CXCR4 여기서 설명, 비록 그들은 세포내 캘리포니아2 +의 출시를 통해 신호 하는 경우.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Fluo-2 AM</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab142775</td>
			<td>fluorescent Ca2+ sensitive dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2443-250G</td>
			<td>pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMD3100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5602-5 mg</td>
			<td>specific CXCR4 antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maraviroc</td>
			<td>kind gift of AnorMed</td>
			<td></td>
			<td>antiretroviral drug, CCR5 antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemokine ligand CXCL12</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-28A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemokine ligand CCL5</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1933-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>41965-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (10 x), calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>14065-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>15630-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0,25 %), phenol red</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes, 50 mL</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>227 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flask (T75)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plate, 96-well, clear bottom, with lid</td>
			<td>Costar/Fisher Scientific</td>
			<td>10530753</td>
			<td>assay plate (96-well), for cell seeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene (PP) plates</td>
			<td>Thermo Scientific (VWR)</td>
			<td>732-2661</td>
			<td>plates used to prepare the compound plates and chemokine plates, round bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLIPR Tetra high throughput cellular screening system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescent plate reader with integrated pipettor head and ICCD camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLIPR Tetra LED Module 470 - 495 nm</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>0200-6128</td>
			<td>Light emitting diodes for excitation of the fluorescent Ca2+ sensitive dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLIPR Tetra Emission Filter 515 - 575 nm</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>0200-6203</td>
			<td>emission filter compatible with the fluorescent dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLIPR Tetra 96 Head</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>0310-4536</td>
			<td>96-well pipettor head, integrated within the fluorescent plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScreenWorks</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>software package used for data analysis and visualization on the FLIPR Tetra</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vi-CELL</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>cell viability analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning CellBIND 96 Well Flat Clear Bottom Black Polystyrene Microplates, with Lid, Sterile</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3340</td>
			<td>Pre-coated 96-well assay plates that may represent an alternative for manual coating of the assay plate.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a kinetic fluorescence-based ca2+ mobilization assay to identify g protein-coupled receptor agonists, antagonists, and allosteric modulators

그들은 많은 인간 질병에 관여 하 고 치료 적 개입에 대 한 잘 검증된 대상 포함 G 단백질 결합 된 수용 체 (GPCRs) 제약 산업에 매우 중요 있습니다. 특히 수용 체의 기능을 억제, 작은 합성 분자를 포함 한 리드 화합물의 발견 약물 개발에 중요 한 초기 단계 이며, 특정, 민감하고 강력한 세포 기반 분석에 의존. 여기, 우리 설명 운동 세포 분석 결과 세포내 캘리포니아2 + 릴리스 갖는 CXC chemokine 수용 체 4 (CXCR4)의 활성화를 억제 하는 특정 수용 체 길 항 제를 식별 하는 데 주로 사용 하는 형광 판독 하 여 그 내 인 성 ligand, CXC chemokine ligand 12 (CXCL12) 이 방법의 주요 장점은 있다는 것 이다 또한 부여 기본 agonistic 속성 (즉, 세포내 캘리포니아2 + 농도 부재에서 CXCL12의 증가 도출 하는 화합물) 또는 화합물 화합물의 심사 allosteric 바인딩 사이트와의 상호 작용을 통해 수용 체의 기능 변조 (즉, 포지티브 및 네거티브 allosteric 변조기 (PAMs 및 NAMs, 각각)). 아래쪽 측면에서 autofluorescent 화합물은 분석 결과 판독, 신뢰할 수 있는 데이터 해석 함으로써 방해를 방해할 수 있습니다. 대부분이 분석 결과 구현할 수 있습니다, 최소한의 적응으로 많은 다른 GPCRs의 활성화 리드 세포내 캘리포니아2 +의 출시에 대 한 일반적인 약물 발견 분석 결과로.

U87 세포내 캘리포니아2 + 동원에서 CXCL12 자극의 효과. CD4.CXCR4+ 와 U87입니다. CD4 세포 Ca2 + 동원 분석 결과와 평가 했다. 분석 결과 버퍼에 추가 되었습니다 (그림 1) 프로토콜의 첫 번째 pipetting 단계 동안 추가 됩니다 일반적으로 시험 화합물의 20 µ L, 대신 fluo-2 오전 로드 U87. CD4.CXCR4+ 측정 판에 셀. 단계에서 두 번째 분?...

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A Kinetic Fluorescence-based Ca2+ Mobilization Assay to Identify G Protein-coupled Receptor Agonists, Antagonists, and Allosteric Modulators

설명된 세포 분석 결과 CXC chemokine 수용 체 4 (CXCR4)의 식별을 위해 설계 되었습니다-상호 작용 하거나 에이전트는 억제 자극, 경쟁적으로 또는 allosterically, 세포내 캘리포니아2 + 릴리스 CXCR4 활성화에 의해 시작.

운동 형광 기반 Ca2 + 동원 분석 결과 G 단백질 결합 된 수용 체 주 작동 근, 길 항 근, 그리고 Allosteric 변조기를 식별 하

G protein-coupled receptors (GPCRs) are of great importance to the pharmaceutical industry as they are involved in many human diseases and include ...

The overall goal of this cell-based assay is to identify and characterize molecules capable of stimulating or inhibiting G protein-coupled receptor-mediated intracellular calcium mobilization. This method can be a valuable assay for G protein-coupled receptor drug discovery because it can be used to screen for molecules that modify receptor-mediated intracellular calcium bodies. The main advantage of this technique is that it allows molecules with agonistic or antagonistic properties to be identified within the same assay.This assay may help in the discovery of novel drug candidates that act on G protein-coupled receptors promising therapeutic targets that play a role in many human diseases. On the day of cell passaging, coat each well of a black walled polystyrene 96-well plate with clear bottoms with 100 microliters of 0.1%gelatin solution and incubate the plates for two hours at room temperature. While the gelatin is solidifying, use a trypsin EDTA solution to lift the cells of interest from the bottom of their culture flask, resuspending the cells in fresh growth medium in a 50 milliliter conical tube once they have detached.After counting, collect the cells by centrifugation and resuspend the pellet in fresh growth medium to a one times 10 to the fifth viable cells per milliliter concentration. When the plates are ready, discard any excess gelatin solution and dry the plates on a lab tissue. Then wash the wells with 200 microliters of PBS and replace the wash with 200 microliters of cells per well for an overnight incubation at 37 degrees Celsius and 5%carbon dioxide.The next morning, tap the plate to discard the growth medium from the wells and dry the plate upside on a paper towel. Then label the cells in each well with 100 microliters of loading dye solution per well and incubate the plate for 45 minutes in the dark at room temperature. While the cells are incubating, add 75 microliters of CXCL12 per well to the chemokine plate and 50 microliters of the compound of interest to each well of the compound plate.Next, turn on the cooler unit of the fluorescence plate reader followed by the plate reader itself. After allowing the system a few minutes to initiate, open the plate reader software. To set up the assay protocol, under the settings tab select read mode and the appropriate excitation and emission wavelengths for the loading dye.Select the mix with transfer fluid tab for automatic mixing of the compounds in the compound plate. In the transfer fluid tab, set 20 microliters of each well from the compound plate to be transferred into the measurement plate and position the pipette tips at 20 microliters below the liquid surface. Set the speed of aspiration to 50 microliters per second and the speed of dispensing to 25 microliters per second and click read with transfer fluid.During the first interval, select 60 reads with a read interval time of one second with 10 reads to be recorded before the compounds are dispensed into the measurement plate and 50 reads to be completed after. Set the second interval with a read interval time of 30 seconds and 18 reads. Select three tip washes for the protocol, setting each wash step to include the appropriate wash fluid, one wash cycle, a fast pump speed, and five strokes per wash.Use the pause pipettor function to include the pipettor pause of 300 seconds and use the mix with transfer fluid setting to allow automatic mixing of the CXCL12 solution within the chemokine plate. In the subsequent transfer fluid tab, set 25 microliters from each well of the chemokine plate to be transferred to the measurement plate and position the tips 20 microliters below the liquid surface. Set the aspiration speed to 50 microliters per second and the dispensing speed to 25 microliters per second.Use the read with transfer fluid button to set the first interval to include 145 reads with a read interval time of one second. Set the second interval to a read interval time of six seconds and 20 reads. Select three more wash tip cycles.Then click set stage temperature and set the device temperature to 37 degrees Celsius. At the end of the loading dye incubation, discard the buffer from the measurement plate and dry the plate on a lab tissue. Wash the cells with 150 microliters per well of assay buffer replacing the buffer with 80 microliters of assay buffer after two minutes.Place the measurement plate in the read position, the compound plate at the source two position, the chemokine plate at the source three position, and a box of black tips at the source one position. Close the device and click protocol signal test to determine the background relative light units and fluorescence variance over the plate. Select test signal in the popup window.If background values of 8, 000 to 10, 000 relative light units are obtained, select update and click save to save the main protocol. Then push run to start the assay. In this graph, a dose-dependent increase in fluorescence correlating with the dose-dependent increase in the release of calcium can be observed.Increasing levels of CXCL12-induced fluorescence allow the generation of a dose response curve based on the difference between the minimum and maximum response over baseline between the first measurement after addition addition of the chemokine and the final measurement in the protocol. No fluorescent calcium-related response was evoked by CXCL12 even at a high concentration when cells lacking the corresponding functional chemokine receptor CXCR4 were used demonstrating the receptor specificity of the CXCL12-evoked measurement. A key application for this cell-based assay is to identify small molecules that, following pre-incubation, dose dependently inhibit CXCL12-induced calcium mobilization in the cells as compared to control non-active compounds that do not inhibit the response.To determine the inhibitory potency of small molecules, a dose response curve can be generated for the inhibitory molecules using nonlinear regression. This assay can be used to study other G protein-coupled receptors with no or only minimal further optimization as well as in this experiment in which a dose-dependent increase in fluorescence was observed when another chemokine receptor, CCR5, was stimulated with its natural chemokine agonist CCL5. Once mastered, this technique can be used to study many other G-protein coupled receptors that signal via the mobilization of intracellular calcium ions upon receptor activation.After watching this video, you should have a good understanding of how this cellular assay can be used to identify agonists and antagonists of the CXCL4 chemokine receptor.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Kinetic Fluorescence-based Ca2+ Mobilization Assay to Identify G Protein-coupled Receptor Agonists, Antagonists, and Allosteric Modulators

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

같은 자폐증과 정신 분열증과 같은 일반적인 장애에 드 노보 변이를 식별하는 전략

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

연구

의학

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

높은 소금 다이어트와 루이스 쥐에서 만성 신장 질환을 유발하는 산화 질소 합성 효소 억제와 함께 5/6th의 절제

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

인간 혈청에있는 N-메틸-D-아스파 라진 산염 수용체 또는 도파민 2 수용체에 대한 항체를 검출하는 높은 처리량 유동 세포 계측법 세포 기반 분석

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

소프트 한천 콜로니 형성 분석의 활용은 유방암 세포에서 종양 유발의 억제를 확인하는

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

생쥐 경동맥 풍선 손상 모델은 반대로 혈관 리모델링의 치료를 테스트하는

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

개 동맥과 정맥에서 차 내피 세포의 분리 및 문화

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

비경구 영양을 위한 올리브 오일 기반 3챔버 백의 안전성, 효능 및 전달을 평가하는 임상 시험

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

A Fluorescence-based Assay for Characterization and Quantification of Lipid Droplet Formation in Human Intestinal Organoids

인간 장 유기체에서 지질 방울 형성의 특성화 및 정량화를 위한 형광 기반 분석

Dietary lipids are taken up as free fatty acids (FAs) by the intestinal epithelium. These FAs are intracellularly converted into triglyceride (TG) ...

A Simple Pit Assay Protocol to Visualize and Quantify Osteoclastic Resorption In Vitro

A Simple Pit Assay Protocol to Visualize and Quantify Osteoclastic Resorption In Vitro

시험관 내에서 파골세포 재흡수를 시각화하고 정량화하는 간단한 구덩이 분석 프로토콜

Mature osteoclasts are multinucleated cells that can degrade bone through the secretion of acids and enzymes. They play a crucial role in various diseases ...

Analysis of Cardiac Contractile Dysfunction and Ca2+ Transients in Rodent Myocytes

Analysis of Cardiac Contractile Dysfunction and Ca2+ Transients in Rodent Myocytes

설치류 근육 세포에서 심장 수축 기능 장애 및Ca 2+ 과도 현상 분석

Contractile dysfunction and Ca2+ transients are often analyzed at the cellular level as part of a comprehensive assessment of cardiac-induced injury ...