Name: utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models
Uploaded: 2018-04-07T13:00:00
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이 연구는 독일 Krebshilfe 에 의해 지원 되었다 (AN 최대 Eder 그룹: 110972), (SMB)에 DGVS 박사 논문 장학금 및 대학 의료 센터 괴팅겐에는 Else Kröner Fresenius 재단 장학금 (RGG)을. 우리 전문가 기술 지원 또한 블 룸 베르크와 Ulrike Wegner 감사합니다. 우리는 또한 유지 하는 마우스에 대 한 대학 의료 센터 괴팅겐의 동물 시설에서 모든 동물 기술자를 감사 합니다. 모든 실험은 독일 동물 복지 규정에 따라 수행 했다.

이 프로토콜은 대학 의료 센터 괴팅겐, 독일 (33.9-42502-04-15/2056)에서 동물 보호 지침. 개별 동물의 특정 요구 사항에 따라 검토 보드, 일부 프로토콜 단계에 따라 수정할 수 있습니다.
1. 복 부 촉진 KPC 마우스의
<ol><li>피하기 위해 불필요 한 초음파 검사, 식별 수도 아마도 intraabdominal 병 변 고 이후에 복 부 초음파 검사를 받아야 한다 쥐 마우스 복 부를 만져.<ol>
<li>KPC 마우스 모?...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

이 프로토콜, 췌 장 종양 유전자 조작된 마우스 모델에서 고해상도 복 부 초음파 이미징 사용 하 여 측정에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 최근, Sastra 외. 췌 장 종양 마우스 모델, 하지만 준비 및 모든 추가 단계에 대 한 전제 조건11를 표시 했다 처리에 대 한 아무 시각된 지침을 계량 하는 방법 자세한 설명 출판. 이 원고의 전반적인 목표는 고해상도 초음파 쥐에 대 한 ...

유전자 조작된 마우스 모델 연구 밀접 하 게 인간의 발암1,2,3의 복잡 한 성격을 정리 하는 능력 때문에 증가 중요성을 얻고 있다. 하나는 가장 자주 췌장암 개발 연구 모델을 사용, 진행 및 치료 응답 종양 억제기 p534의 비활성화와 결합 하는 Kra oncogene에서 활성화 돌연변이 의해 특징입니다. 이 LSL KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 모방 침략 암 전 침략 적인 췌 장 intraepithelial neoplasia (PanIN) 병 변에서 단계별 진행. Phenotypically, 거의 모든 마우스는 출산 후 첫 6 개월 이내 PDAC를 개발. 그러나, 섹 모델 몇 개월4주 8에서 높은 변수 종양 발병을 밝혀 이식된 모델에 비해. 췌 장 종양에 도달 특정 크기 (지름 5-9 m m), 종양의 성장을 빠르게 가속 및 마우스5전 임상 시험 등록 해야 합니다. 따라서, 종양 발병 및 종양 크기의 정확한 탐지 물류 전 임상 연구 및 치료 모니터링에 대 한 필수적인 전제 조건입니다. 일반적으로, 몇 가지 방법을 같은 자기 공명 영상 (MRI)6,7,,89 또는 고해상도 초음파 단층 종양 검사 실시를 채택 될 수 있다 고 치료10. 각 기술은 그것의 장점과 단점이 있다. 비록 MRI-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 또는-이미징 고해상도 데이터 수집 뿐만 아니라 정확한 볼륨 계산, 일반 진정에서 장시간된 시험 시간을 허용 하 고 매우 비싼 장비 필요, 그리고 자주 허용 하지 않습니다 시간의 긴 기간 동안 스캔. 대조적으로, 작은 동물 초음파 쥐11복 부 병 리에 대 한 화면을 사용할 수 있는 설정된 방법입니다. 이미징이 방법의 장점은 짧은 시간, 높은 해상도, 스캔 그리고 도플러 초음파 또는 대비 사용 가능성 향상 된 동시에 장기의 관류를 시각화 하기 위해 초음파 (CEUS). 그러나, 해 부 지식, 3D 상상력과 철저 한 실습은 올바른 이미지 해석 필요 합니다.
다음 문서에서 섹 모델에서 고해상도 초음파를 이용 하 여에 대 한 상세한 프로토콜 제공 됩니다. 또한, 표준 초음파 이미지 묘사 되며 조사에 대 한 오리엔테이션을 촉진 하기 위하여 기관 구조와 분류.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-12055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-11982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;electronic pet clippers</td>
			<td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td>
			<td>5025232484324</td>
			<td>Panasonic ER-PA10-s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labotect Hot plate</td>
			<td>Labor tech G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream (ophthalmic ointment)</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr, Germany</td>
			<td>9080249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>veterinary isoflurane</td>
			<td>Abbvie, Germany</td>
			<td>4831867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>RB healthcare UK, United Kingdom</td>
			<td>8218535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td>
			<td>TH. Geyer, Germany</td>
			<td>22941000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Asmuth, Germany</td>
			<td>13477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td>
			<td>7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton tips</td>
			<td>Meditrade, Germany</td>
			<td>75481116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bowl for ultrasound gel</td>
			<td>ARC France, France</td>
			<td>H1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bowl</td>
			<td>W &#38; P Trading Co., USA</td>
			<td>B00K2P6PLQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Fuhrmann, Germany</td>
			<td>960504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSL-KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 췌장암에서 소설 치료 평가를 설립 하 고 자주 사용 유전자 변형 모델을 나타냅니다. 종양 발병 8 주 몇 달 사이 섹 모델 변수입니다. 따라서, 비-침략 적 이미징 도구는 화면 종양 발병 및 치료에 대 한 모니터 해야 합니다. 이 문제를 해결 하려면 다른 접근은 지난 년 동안 등장 했습니다. 고해상도 초음파 비 침해, 빠른 세션 시간 및 방사선 노출 없이 높은 이미지 해상도 같은 주요 장점이 있습니다. 그러나, 쥐에서 초음파 사소한 하 고 충분 한 해부학 지식을 이며 실용적인 기술을 성공적으로 전 임상 췌장암 모델에서 고해상도 초음파를 수행 하는 데 필요한. 다음 문서와 함께 내 생 췌장암 모델에 특히 초점 murine 모델에서 복 부 초음파에 대 한 자세한 체험 가이드 제공 됩니다. 또한, 일반적인 실수 및 그들을 피하기 위해 방법의 요약을 제공 합니다.

초음파 이미징 인간의 질병의 murine 모델에 몇 가지 문제를 해결 하는 데 사용 되는 다양 하 고 비-침략 적 기술입니다. 모든 다른 이미징 접근 주요 장점에 비해 높은 처리량, 비용 효율, 짧은 획득 시간과 실시간 이미징 있습니다. 그러나,이 도구는 정확 하 고 높은 품질의 이미지를 생성 하는 전문 지식이 필요 합니다. 원치 않는 유물 경우 특히 적어도 일부 경험 초음파 이...

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Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

There are various genetically engineered mouse models to study pancreatic cancer. The most commonly used model is the Kras, p53 mouse model that harbors an activating mutation in the Kras oncogene, and an inactivating mutation in the p53 tumor suppressor gene. Both mutations are conditionally activated by the Pdx-Cre promoter.This Kras, p53, Pdx-Cre mouse model, in short KPC model, develops endogenous pancreatic tumors between the age of two to six month. In preparation of your ultrasound procedure, the following equipment should be prepared and ready to use. For high resolution ultrasound, a stationary ultrasound device is used.The ultrasound procedure is conducted in general anesthesia using isoflurane evaporation. Once the mouse is under deep sedation, it is transferred to the green working stage. After the ultrasound procedure, the mouse should be placed in a pre-heated cage to accelerate recovery.Tumor development is highly variable in the KPC mouse model. To avoid unnecessary ultrasound screening procedures, we usually perform abdominal palpation weekly starting from the age of two months. Gently, palpate the mouse abdomen up and down to detect any pancreatic tumors.Keep in mind that hard feces may mimic abdominal tumor masses. After initiation of general anesthesia, in a separate induction chamber, the mouse is carefully placed onto the green and pre-heated working stage. During the ultrasound procedure, isoflurane is continuously supplied via the nose cone.Fix the trandsucer head at the top of your working stage by using the mounting system. Perform the foot-pinch test to make sure the mouse is under deep anesthesia. Afterwards, the mouse is fixed onto the working platform using medical strips.It is crucial to completely remove the abdominal fur prior to the ultrasound procedure, to avoid any artifacts. First, carefully shave off the mouse fur. Great care should be taken to avoid any superficial skin lacerations using the pet clipper.Second, apply a thin layer of the depilatory cream onto the shaved area. Completely remove the cream using moist tissues. Apply abundant ultrasound gel onto the mouse abdomen, and a thin layer of gel directly onto the ultrasound probe.Adjust the transducer onto the abdomen using soft pressure. Heavy compression of the mouse abdomen may lead to respiratory or circulatory impairment, and should be avoided. Scan up and down and adjust the frame of the working platform and the wheels for the x and y axis.Some tumors may only be visible by changing the initial position of the mouse. To correctly interpret B-mode ultrasound images, basic anatomical knowledge is required. In the KPC mouse model, pancreatic tumors can be detected in the head, body, or tail of the pancreas.The tumors usually demarcate as hypoechoic masses. Due to their desmoplastic features, these tumors are usually hard to compress by the ultrasound probe. Following the ultrasound, completely remove the ultrasound gel and gently place the mouse in the pre-heated recovery cage.Once you identified a tumor, scan up and down to get an impression of the total size, and measure the largest diameter by using the ultrasound caliper. For the exact volume calculation, we use the formula of an ellipsoid. After finishing the measurement of the first plane, either rotate the scan-head by 90 degree, in a longitudinal position, or turn the mouse to its side, to detect the tumor's longitudinal expansion.For the evaluation of novel therapeutic approaches, it is important to determine the initial tumor volume and the tumor growth kinetics during treatment. During pre-clinical trials, abdominal ultrasound can be repeated every three to four days to monitor tumor growth.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

산발성 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델

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연구

암 연구학

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방사성 핵 종 형광 취재 원 유전자 설치류 종양 모델에서 종양의 진행을 추적 하기 위해 이미징

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

쥐에서 종양 성장을 감소 하는 MicroRNA의 생체 내 억제

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

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The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

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Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

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Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

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잠재적인 방사능 감작제 또는 보호제를 평가하기 위한 모델로서의 제브라피시 유충

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

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