Name: laminar flow-based assays to investigate leukocyte recruitment on cultured vascular cells and adherent platelets
Uploaded: 2018-04-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets at JoVE.com

אנו מודים ד"ר מרטין מ שמיט, קו Fraemohs. עבודה זו נתמכה על ידי קרן הולנד למחקר מדעי (אני אגיד להם ZonMW 016.126.358 לנדשטיינר קרן למחקר עירוי דם (LSBR Nr. 1638), פתוח (SFB1123/A2) הוענק R.R.K.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי רפואית אתית ועל בעלי חיים אתיים לוחות של מאסטריכט האוניברסיטה.
1. מבוססת זרימה Assay עם תאים אנושיים
<ol><li>
בידוד של טסיות הדם האנושי
	<ol>
<li>דם ורידי ב קרישה ציטראט (3.2%).</li>
		<li>להוסיף 1/15 נפח של חומצה ציטראט דקסטרוז (ACD: ציטראט trisodium 80 מ מ, ?...

<ol>
	<li>Dinauer, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+immune+deficiencies+with+defects+in+neutrophil+function.">Primary immune deficiencies with defects in neutrophil function.</a> American Society of Hematology. 2016 (1), 43-50 (2016).</li><li>Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+cell+recognition:+three+(or+more)+steps+to+specificity+and+diversity.">Leukocyte-endothelial cell recognition: three (or more) steps to specificity and diversity.</a> Cell. 67 (6), 1033-1036 (1991).</li><li>Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traffic+signals+for+lymphocyte+recirculation+and+leukocyte+emigration:+the+multistep+paradigm.">Traffic signals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration: the multistep paradigm.</a> Cell. 76 (2), 301-314 (1994).</li><li>Nourshargh, S., Alon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+migration+into+inflamed+tissues.">Leukocyte migration into inflamed tissues.</a> Immunity. 41 (5), 694-707 (2014).</li><li>Legein, B., Temmerman, L., Biessen, E. A. L., Lutgens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+immune+system+interactions+in+atherosclerosis.">Inflammation and immune system interactions in atherosclerosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 70 (20), 3847-3869 (2013).</li><li>Wang, Y., Sakuma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+engagement+of+platelet+glycoprotein+Ibalpha+via+the+integrin+Mac-1+is+critical+for+the+biological+response+to+vascular+injury.">Leukocyte engagement of platelet glycoprotein Ibalpha via the integrin Mac-1 is critical for the biological response to vascular injury.</a> Circulation. 112 (19), 2993-3000 (2005).</li><li>Zhao, Z., Vajen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+junctional+adhesion+molecule+A+from+platelets+increases+early-stage+neointima+formation+after+wire+injury+in+hyperlipidemic+mice.">Deletion of junctional adhesion molecule A from platelets increases early-stage neointima formation after wire injury in hyperlipidemic mice.</a> Journal of cellular and molecular medicine. , (2017).</li><li>Wang, Y., Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+integrin+Mac-1+regulates+thrombosis+via+interaction+with+platelet+GPIb&#945;.">Leukocyte integrin Mac-1 regulates thrombosis via interaction with platelet GPIb&#945;.</a> Nature communications. 8, 15559 (2017).</li><li>Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDMS-based+microfluidic+devices+for+biomedical+applications.">PDMS-based microfluidic devices for biomedical applications.</a> Microelectronic Engineering. 61-62, 907-914 (2002).</li><li>Son, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+shear+viscosity+and+shear+rate+from+pressure+drop+and+flow+rate+relationship+in+a+rectangular+channel.">Determination of shear viscosity and shear rate from pressure drop and flow rate relationship in a rectangular channel.</a> Polymer. 48 (2), 632-637 (2007).</li><li>Brinkmann, V., Laube, B., Abu Abed, U., Goosmann, C., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+how+to+generate+and+visualize+them.">Neutrophil extracellular traps: how to generate and visualize them.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (36), e1724 (2010).</li><li>Swamydas, M., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+purification+and+labeling+of+mouse+bone+marrow+neutrophils+for+functional+studies+and+adoptive+transfer+experiments.">Isolation, purification and labeling of mouse bone marrow neutrophils for functional studies and adoptive transfer experiments.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (77), e50586 (2013).</li><li>Schmitt, M. M. N., Megens, R. T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+junctional+adhesion+molecule-a+guides+monocytes+into+flow-dependent+predilection+sites+of+atherosclerosis.">Endothelial junctional adhesion molecule-a guides monocytes into flow-dependent predilection sites of atherosclerosis.</a> Circulation. 129 (1), 66-76 (2014).</li></ol>

זה וזמינותו במבחנה היא שיטה פשוטה כדי לחקור מנגנונים הבסיסית של ליקוציט הגיוס בעת דלקת כלי הדם, אבל יש כמה נקודות קריטיות שיירשמו. הדרישה הראשונה לביצוע בהצלחה assay הזה הוא זלוף של לויקוציטים ללא פגע, confluent וסקולרית או טסיות טפט. זו יכולה להיות מושגת על ידי מוקדמת ציפוי של המשטחים עם קול...

על פציעה, דלקת או זיהום, לויקוציטים להגיב במהירות כדי פתוגן או נזק-הקשורים מולקולרית דפוסי (PAMPs, DAMPs), לשנות את מצב מופעל ועל העברת מחוץ לזרם הדם לאתרים של דלקת ברקמות נזק. היכולת של לויקוציטים לאינטראקציה עם הסביבה תאית ומולקולרית שלהם חיוני לתפקוד הנכון שלהם כמו תאים חיסוניים, כפי שמודגש על ידי הפרעות גנטיות כגון ליקוציט אדהזיה מחסור1. ליקוציט אדהזיה כבר הנושא של החקירה אינטנסיבי במהלך העשורים האחרונים, כתוצאה מכך הרעיון של המפל אדהזיה ליקוציט בתחילת שנות ה-902,3. אדהזיה ליקוציט הוא שיזם התפיסה בחירת שמלות בתיווך של לויקוציטים כדי אנדותל, גורם לתאים לגלגל על פני כלי הדם. זה מתגלגל מאפשר לויקוציטים לסריקה אנדותל מכורך רמזים נודדות, למשל, נוגדנים, אשר זירוז הפעלת אינטגרינים. לאחר מכן, הפעלת אינטגרינים מתווכים האיגוד על ליגנדים אנדותל, וכתוצאה מכך ליקוציט המשרד מעצר. לויקוציטים יכול לאחר מכן התכונן בורחת על ידי זוחלים והפצת, לפני חדירה של טפט אנדותל, transmigrating לתוך הרקמה הבסיסית. התפיסה הבסיסית של המפל ליקוציט הקנוני נשאר ברובו ללא שינוי מאז השקתו, עם מדרגות ביניים להוסיף4. ובכל זאת, את המנגנונים המולקולריים המדויק ואת התפקידים של השחקנים הרבים המעורבים ליקוציט הגיוס יש לא הובהרו עד כה, ונשאר גיוס ליקוציט מהווים נושא חשוב בתחום של זיהום, דלקת, ועמיד (auto) מחקר.
לדוגמה, במהלך מחלות דלקתיות בכלי הדם כגון טרשת עורקים, גדל ליקוציט גיוס לתוך התפתחות רובד כלי כוננים קיר. הפלאק טרשת עורקים לא יציב ייתכן קרע, מובילה להפעלה מסיבית של טסיות הדם, במערכת קרישת הדם, ולאחר מכן ל סגר של כלי השיט5. זה עלול לגרום לתוצאות לב וכלי דם חמורים כגון אוטם שריר הלב או שבץ מוחי. בנוסף, אנדותל חסיפה כפי שהיא מתרחשת קלינית, למשל לאחר סטנט של עורק כלילי, מוביל אל שפע של אינטראקציות של לויקוציטים, טסיות הפנים קיר הספינה החשוף (למשל, מטריקס רכיבים וחלקה. שרירים תאים) של לויקוציטים עם טסיות כיסוי הפגיעה בכלי הדם. אינטראקציות אלה חשובים להמשך פיתוח של המחלה כפי מונוציט-טסיות אינטראקציות שאסע neointima היווצרות6,7. בנוסף, טסיות-ליקוציט אינטראקציות מתווכת על-ידי ליקוציט אינטגרין Mac-1 (αMβ2), טסיות GPIbα לאחרונה זוהו מנהלי התקנים הרומן של פקקת עכברים8.
לאור זמינותו רחב של דם האדם ושל בעלי החיים כמקור של לויקוציטים ולבנים וטסיות דם עבור המחקר ואת הספקטרום הרחב של מטריקס מבודד מולקולות וקווים מונצחים תא של ליקוציט ולמקור כלי דם, זה ריאלי כדי לדמות ליקוציט אינטראקציות תחת זרימה בתוך מעבדה הגדרת, באמצעות זרימת שתוכנן במיוחד זלוף צ'יימברס. וריאציות רבות עוצבו העשורים האחרונים, החל מונחה ואקום ללשכה זלוף דביק. כל הווריאציות יש במשותף זה החלק משותק (למשל, בתרבית תאים וסקולרית או מטריצה חלבונים) התכנסה לתוך תא עמיד בפני נזילה גדול מאובזר עם ערוץ מוגדרים מראש ומאפשרת זלוף של נוזלים על החלק משותק. בנוסף, ההתקדמות שהמודעות הטכנולוגיה אפשרה פיתוח פתרונות התפורים מבוססת על פולימרים סיליקה9. צמיגות ואת קצב זרימה של נוזלים perfused, ואת הגובה של הערוץ בעיקר לקבוע מאפייני זרימה זלוף התקן10גזירה. במאמר זה, נציג של שיטת במבחנה ללמוד מנגנונים הבסיסית של הדבקה, דה- אדהזיה ולאחר גלגול של לויקוציטים תחת משטרים ורידים, עורקים זרימה. היתרון של השיטות המובאות כאן היא כי יכול להתבצע באמצעות מיקרוסקופ מחוברת זריחה נפוצות והם אינם מחייבים ניסויים בעל מיומנות טכנית גבוהה. וזמינותו במבחנה ניתן לטפל בדרכים רבות (למשל, על-ידי הוספת מעכבי או חסימת נוגדנים), ולכן הרלוונטיים במודלים שונים של דלקת כלי הדם ואת מאפשר החקירה של אדהזיה חלבון פונקציות או הערכה של תרכובות ייעודיות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:939px;" width="938">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Inverted fluorescence microscope e.g. EVOS-FL</td>
			<td style="width:189px;">Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Pump e.g. model: 210-CE</td>
			<td style="width:189px;">&#160;world precision instruments</td>
			<td style="width:163px;">78-9210W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Falcon 35 mm TC-Treated Easy-Grip Style Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:189px;">corning</td>
			<td style="width:163px;">353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">50 mL syringe</td>
			<td style="width:189px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:163px;">300137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Silicone tubing&#160;</td>
			<td style="width:189px;">VWR</td>
			<td style="width:163px;">228-0700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Elbow Luer Connector Male</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td style="width:163px;">10802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Female Luer Lock Coupler</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td style="width:163px;">10823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Flow chamber</td>
			<td style="width:189px;">University Hospital RWTH Aachen</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td>Patent DE10328277A1: Baltus T, Dautzenberg R, Weber CPD. Str&#246;mungskammer zur in-vitro-Untersuchung von physiologischen Vorg&#228;ngen an Zelloberfl&#228;chen. 2005.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Ibidi sticky slide VI 0.4</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td>80608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Coverslips for sticky slides&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td>10812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagen Type I, rat tail</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;">A1048301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Recombinant Human TNF-&#945;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>300-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thrombin Receptor Activator for Peptide 6 (TRAP - 6)</td>
			<td>Anaspec / Eurogentec</td>
			<td>24191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SYTO 13 green fluorescent nucleic acid stain</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td>S7575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Hanks&#8217; Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>H4641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES buffer solution 1M, liquid</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td>15630049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BUMINATE Albumin, 25%&#160;</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>60010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Water for injection</td>
			<td style="width:189px;">B. Braun</td>
			<td style="width:163px;">3624315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td style="width:189px;">Merck</td>
			<td style="width:163px;">102382&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Magnesium chloride hexahydrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td style="width:163px;">M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Apyrase</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>A6535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-12203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Endothelial Cell Growth Medium (Ready-to-use)</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-22010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Aortic Endothelial Cells (HAoEC)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">&#160;PCS-100-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Vascular Cell Basal Medium&#160;</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Endothelial Cell Growth Kit-BBE</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Aortic Smooth Muscle Cells (HAoSMC)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Vascular Smooth Muscle Cell Growth Kit</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Human endothelial cell line, EA.hy926</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">CRL-2922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">30-2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Mouse endothelial cell line, SV 40 transformed (SVEC4-10)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">CRL-2181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Human Monocytic cell line, THP-1</td>
			<td style="width:189px;">DSMZ</td>
			<td style="width:163px;">ACC-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RPMI 1640 with Ultra-Glutamine</td>
			<td style="width:189px;">Lonza</td>
			<td>BE12-702F/U1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Mouse monocyte/macrophage RAW264.7</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">TIB-71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM), high glucose</td>
			<td style="width:189px;">Gibco</td>
			<td style="width:163px;">11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Accutase</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-41310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Percoll</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>P1644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Histopaque 1119</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>11191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:420px;">10x PBS</td>
			<td style="width:189px;">Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;">14200075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:420px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tubes with Sodium Heparin</td>
			<td style="width:189px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:163px;">367876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">VACUETTE TUBE 9 ml 9NC Coagulation sodium citrate 3.2%&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Greiner Bio</td>
			<td style="width:163px;">455322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:420px;">HCl/EtOH mixture (1.2 mol/L HCl and 50% ethanol) in water</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td style="width:163px;">Prepare by mixing 0.3L HCl (4 mol/L) with 0.7L of 70% v/v ethanol in a fume hood</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laminar flow-based assays to investigate leukocyte recruitment on cultured vascular cells and adherent platelets

הגיוס של לויקוציטים בעת פציעה או דלקת לאתרים של פציעה או נזק לרקמות נחקר במהלך העשורים האחרונים, הביא הרעיון של המפל אדהזיה ליקוציט. עם זאת, המנגנון המולקולרי המדויק מעורב ליקוציט גיוס לא עדיין מלא זוהו. מאז הגיוס ליקוציט נותר נושא חשוב בתחום של זיהום, דלקת, ומחקר (auto-) המערכת החיסונית, אנו מציגים assay מבוסס זרימה שכבתית פשוטה ללמוד מנגנונים הבסיסית של הדבקה, אדהזיה ולהשתחרר, ו גלגול של לויקוציטים תחת משטרים ורידים, עורקים זרימה. וזמינותו במבחנה ניתן ללמוד את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס האינטראקציות בין לויקוציטים ושותפים הסלולר שלהם במודלים שונים של דלקת בכלי הדם. פרוטוקול זה מתאר assay מבוסס זרימה שכבתית באמצעות תא במקביל זרימה במיקרוסקופ ניגוד שלב הפוכה מחובר מצלמה ללמוד את האינטראקציות של לויקוציטים, תאי אנדותל או טסיות הדם, אשר ניתן דמיינו הוקלט אז ניתח באופן לא מקוון. תאי אנדותל, טסיות דם או לויקוציטים יכול להיות pretreated עם מעכבי או נוגדנים כדי לקבוע את התפקיד של מולקולות ספציפיות בתהליך זה. הטיה תנאים, דהיינו עורקי או ורידי גזירה, ניתן להתאים בקלות על ידי צמיגות ו קצב זרימה של נוזלים perfused, ואת הגובה של הערוץ.

ללמוד אנדותל-ליקוציט אדהזיה, שכותרתו fluorescently תאים THP-1 היו perfused על טפט אנדותל TNFα - או אי-גירוי למשך 2 דקות-דיין 3/ס מ2. המספר הכולל של תאים monocytic חסיד נקבע לאחר 2 דקות של זלוף על-ידי לכידתו 6 שדות עצמאית על פני תקופה של 2-6 דקות. התאים חסיד היו לכמת לפחות 6 תמונות שנתפסו עם מיק?...

Watch this Scientific Journal Video about Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets at JoVE.com

Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets

מבחני מבוסס זרימה שכבתית לחקור ליקוציט גיוס על תאים בתרבית וסקולרית, טסיות חסיד

לויקוציטים בלהיטות אינטראקציה עם טסיות הדם והתאים כלי הדם לאחר פציעה קיר הספינה או בעת דלקת. כאן, אנו מתארים assay מבוסס זרימה שכבתית פשוטה כדי לאפיין את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס האינטראקציות בין לויקוציטים ושותפים הסלולר שלהם.

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

הדמיה הדבקה ליקוציט כדי האנדותל דם בלחץ גבוה Intraluminal

Worldwide, hypertension is reported to be in approximately a quarter of the population and is the leading biomedical risk factor for mortality worldwide. ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

תזרים הידבקות Assay ללמוד יקוציט גיוס לבדית אדם סינוסי תנאי האנדותל של מתח שאר

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Large-Scale Purification of Porcine or Bovine Photoreceptor Outer Segments for Phagocytosis Assays on Retinal Pigment Epithelial Cells

טיהור בקנה מידה גדולה של מגזרי בשר חזירים או שור קולטי אור חיצוני למבחני phagocytosis על תאי הרשתית פיגמנט אפיתל

Analysis of one of the vital functions of retinal pigment epithelial (RPE) cells, the phagocytosis of spent aged distal fragments of photoreceptor outer ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

ניתוח ההשפעות של תאי סטרומה על הגיוס של לויקוציטים מתזרים

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

במבחנת in vivo המודל ללמוד הידבקות חיידקים לכלי השיט וול תנאי זרימה תחת

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

אינטראקציות מיקרוסקופית Intravital של יקוציט-האנדותל וטסיות דם-יקוציט בMesenterial ורידים בעכברים

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Retroviral Transduction of Helper T Cells as a Genetic Approach to Study Mechanisms Controlling their Differentiation and Function

Retroviral תמרה של Helper T תאים כגישה גנטית לחקר מנגנוני בקרת הבידול והתפקוד שלהם

Helper T cell development and function must be tightly regulated to induce an appropriate immune response that eliminates specific pathogens yet prevents ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

קרינה המבוססת Assay Neuraminidase העיכוב להעריך את הרגישות של שפעת וירוסים אל Neuraminidase המונע המחלקה של תרופות אנטי-ויראליות

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Using Phylogenetic Analysis to Investigate Eukaryotic Gene Origin

באמצעות ניתוח פילוגנטי לחקור האיקריוטים מקור גנטי

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct ...