Name: laminar flow-based assays to investigate leukocyte recruitment on cultured vascular cells and adherent platelets
Uploaded: 2018-04-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets at JoVE.com

Vi takker Dr. Martin M. Schmitt og linjen Fraemohs. Dette arbeidet ble støttet av Nederland grunnlaget for vitenskapelig forskning (ZonMW VIDI 016.126.358, Landsteiner stiftelse for blodoverføring forskning (LSBR Nr. 1638) og Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB1123/A2) til R.R.K.

Alle metodene som er beskrevet her er godkjent av medisinsk etiske og dyr etiske styrene av Maastricht University.
1. flyten-baserte analysen med menneskelige celler
<ol><li>
Isolering av blodplater fra menneskelig blod
	<ol>
<li>Tegne venøst blod i citrate (3,2%) antikoagulerende.</li>
		<li>Legg 1/15 volumet av syre Citrate druesukker (ACD: 80 mM trisodium citrate, 52 mM sitronsyre og 183 mM glukose) til blodet.</li>
		<li>Sentrifuge 350 x g uten brems i 15 min å få Pla...

<ol>
	<li>Dinauer, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+immune+deficiencies+with+defects+in+neutrophil+function.">Primary immune deficiencies with defects in neutrophil function.</a> American Society of Hematology. 2016 (1), 43-50 (2016).</li><li>Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+cell+recognition:+three+(or+more)+steps+to+specificity+and+diversity.">Leukocyte-endothelial cell recognition: three (or more) steps to specificity and diversity.</a> Cell. 67 (6), 1033-1036 (1991).</li><li>Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traffic+signals+for+lymphocyte+recirculation+and+leukocyte+emigration:+the+multistep+paradigm.">Traffic signals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration: the multistep paradigm.</a> Cell. 76 (2), 301-314 (1994).</li><li>Nourshargh, S., Alon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+migration+into+inflamed+tissues.">Leukocyte migration into inflamed tissues.</a> Immunity. 41 (5), 694-707 (2014).</li><li>Legein, B., Temmerman, L., Biessen, E. A. L., Lutgens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+immune+system+interactions+in+atherosclerosis.">Inflammation and immune system interactions in atherosclerosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 70 (20), 3847-3869 (2013).</li><li>Wang, Y., Sakuma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+engagement+of+platelet+glycoprotein+Ibalpha+via+the+integrin+Mac-1+is+critical+for+the+biological+response+to+vascular+injury.">Leukocyte engagement of platelet glycoprotein Ibalpha via the integrin Mac-1 is critical for the biological response to vascular injury.</a> Circulation. 112 (19), 2993-3000 (2005).</li><li>Zhao, Z., Vajen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+junctional+adhesion+molecule+A+from+platelets+increases+early-stage+neointima+formation+after+wire+injury+in+hyperlipidemic+mice.">Deletion of junctional adhesion molecule A from platelets increases early-stage neointima formation after wire injury in hyperlipidemic mice.</a> Journal of cellular and molecular medicine. , (2017).</li><li>Wang, Y., Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+integrin+Mac-1+regulates+thrombosis+via+interaction+with+platelet+GPIb&#945;.">Leukocyte integrin Mac-1 regulates thrombosis via interaction with platelet GPIb&#945;.</a> Nature communications. 8, 15559 (2017).</li><li>Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDMS-based+microfluidic+devices+for+biomedical+applications.">PDMS-based microfluidic devices for biomedical applications.</a> Microelectronic Engineering. 61-62, 907-914 (2002).</li><li>Son, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+shear+viscosity+and+shear+rate+from+pressure+drop+and+flow+rate+relationship+in+a+rectangular+channel.">Determination of shear viscosity and shear rate from pressure drop and flow rate relationship in a rectangular channel.</a> Polymer. 48 (2), 632-637 (2007).</li><li>Brinkmann, V., Laube, B., Abu Abed, U., Goosmann, C., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+how+to+generate+and+visualize+them.">Neutrophil extracellular traps: how to generate and visualize them.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (36), e1724 (2010).</li><li>Swamydas, M., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+purification+and+labeling+of+mouse+bone+marrow+neutrophils+for+functional+studies+and+adoptive+transfer+experiments.">Isolation, purification and labeling of mouse bone marrow neutrophils for functional studies and adoptive transfer experiments.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (77), e50586 (2013).</li><li>Schmitt, M. M. N., Megens, R. T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+junctional+adhesion+molecule-a+guides+monocytes+into+flow-dependent+predilection+sites+of+atherosclerosis.">Endothelial junctional adhesion molecule-a guides monocytes into flow-dependent predilection sites of atherosclerosis.</a> Circulation. 129 (1), 66-76 (2014).</li></ol>

Denne i vitro analysen er en enkel metode å undersøke underliggende mekanismene av leukocytter rekruttering under vaskulær betennelse, men det er noen kritiske punkter skal noteres. Det første kravet for å kunne utføre denne analysen er perfusjon av leukocytter over en intakt og confluent vaskulære eller blodplater monolayer. Dette kan oppnås ved tidligere belegg av overflater med kollagen type jeg. Vanligvis når du arbeider med primære vaskulære celler, er det viktig å forsiktig koble celler ved hje...

Ved skade, betennelse eller infeksjon reagere leukocytter raskt til patogen - eller skader-forbundet molekylær mønster (PAMPs, DAMPs), endre til en aktivert tilstand, og flytte ut av blodstrømmen til områder av betennelse og vev skade. Evne til leukocytter å samhandle med omgivelsene cellulære og molekylære er viktig for deres fungerer som immunceller, som fremhevet av genetiske lidelser som leukocytter vedheft mangel1. Leukocytter vedheft har vært gjenstand for intens granskning i løpet av de siste tiårene, og dette har ført til begrepet leukocytter vedheft gjennomgripende i tidlig på 1990-tallet2,3. Leukocytter vedheft er initiert av selectin mediert erobringen av leukocytter til endotelet, forårsaker cellene til å rulle over vaskulær overflaten. Dette rullende kan leukocytter skanne for endotelet-bundet vandrende Stikkordene, f.eks, chemokines, som induserer aktivering av integrins. Deretter megle aktivert integrins bindingen til endothelial ligander, resulterer i fast leukocytter arrestasjon. Leukocytter kan deretter forberede til extravasate ved gjennomgang og spre, gjennomtrengende endotelial monolayer og transmigrating til underliggende vev. Det grunnleggende konseptet av kanoniske leukocytter kaskade har vært stort sett uendret siden introduksjonen, med noen mellomliggende trinn lagt4. Likevel nøyaktig molekylære mekanismer og rollene til de mange spillerne involvert i leukocytter rekruttering har ikke avklart hittil, og leukocytter rekruttering er fortsatt et viktig tema innen infeksjon, betennelser og (auto-) immun forskning.
For eksempel økt under vaskulær inflammatoriske sykdommer som aterosklerose, leukocytter rekruttering til fartøyet veggen stasjoner plakk utvikling. Ustabil aterosklerotisk plaketter kan brudd, fører til massiv aktivering av blodplater og koagulering systemet og okklusjon av fartøyet5. Dette kan resultere i alvorlig hjerte resultater som hjerteinfarkt eller hjerneslag. I tillegg endotelial denudation som det oppstår klinisk, f.eks etter stenting av en koronar, fører til en rekke interaksjoner av leukocytter og blodplater til utsatte fartøyet veggen interiøret (f.eks, matrix komponenter og glatt muskel celler) og av leukocytter med blodplater dekker vaskulære skader. Disse interaksjonene er viktig for videre utvikling av sykdommen som monocytt-Platederivert interaksjoner kan kjøre neointima formasjon6,7. I tillegg blodplater-leukocytter interaksjoner formidlet av leukocytter integrin Mac-1 (αMβ2) og blodplater GPIbα har nylig blitt identifisert som roman driverne av tromboser i mus8.
Gitt bred tilgjengelighet for mennesker og dyr blod som leukocytter og blodplater for forskning og bredt spekter av isolerte matrix molekyler og udødeliggjort linjer av leukocytter og vaskulær opprinnelse, er det mulig å simulere leukocytter samhandlingene under flyt i et laboratorium innstilling, bruker spesialdesignet flyt perfusjon kamre. Mange varianter har utviklet over de siste tiårene, alt fra vakuum-drevet til selvklebende perfusjon kamre. Alle varianter har til felles at delen immobile (f.eks, kultivert vaskulære celler eller matrix proteiner) settes sammen til en større lekkasjefri kammer utstyrt med en forhåndsdefinert kanal aktivere perfusjon av væsker over delen immobile. I tillegg aktivert fremskritt i molding teknologien utvikling av skreddersydde løsninger basert på silica polymerer9. Viskositet og strømningshastighet på perfused væsker og høyden på kanalen bestemmer hovedsakelig skjæring stress kjennetegner flyt perfusjon enhet10. I denne artikkelen presenterer vi en i vitro metoden å studere underliggende mekanismene vedheft, de vedheft og transmigration av leukocytter under venøs og arteriell regimer. Fordelen av metodene presenteres her er at de utføres med et vanlig kamera koblet fluorescens mikroskop og krever ikke en forskere å ha høy teknisk kompetanse. I vitro analysen kan manipuleres i mange måter (f.eksved å legge hemmere eller blokkerer antistoffer), og gjelder dermed i forskjellige modeller av vaskulær betennelse og lar etterforskningen av vedheft protein funksjoner eller evaluering av bestemte forbindelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:939px;" width="938">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Inverted fluorescence microscope e.g. EVOS-FL</td>
			<td style="width:189px;">Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Pump e.g. model: 210-CE</td>
			<td style="width:189px;">&#160;world precision instruments</td>
			<td style="width:163px;">78-9210W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Falcon 35 mm TC-Treated Easy-Grip Style Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:189px;">corning</td>
			<td style="width:163px;">353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">50 mL syringe</td>
			<td style="width:189px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:163px;">300137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Silicone tubing&#160;</td>
			<td style="width:189px;">VWR</td>
			<td style="width:163px;">228-0700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Elbow Luer Connector Male</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td style="width:163px;">10802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Female Luer Lock Coupler</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td style="width:163px;">10823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Flow chamber</td>
			<td style="width:189px;">University Hospital RWTH Aachen</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td>Patent DE10328277A1: Baltus T, Dautzenberg R, Weber CPD. Str&#246;mungskammer zur in-vitro-Untersuchung von physiologischen Vorg&#228;ngen an Zelloberfl&#228;chen. 2005.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Ibidi sticky slide VI 0.4</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td>80608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Coverslips for sticky slides&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Ibidi</td>
			<td>10812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagen Type I, rat tail</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;">A1048301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Recombinant Human TNF-&#945;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>300-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thrombin Receptor Activator for Peptide 6 (TRAP - 6)</td>
			<td>Anaspec / Eurogentec</td>
			<td>24191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SYTO 13 green fluorescent nucleic acid stain</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td>S7575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Hanks&#8217; Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>H4641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES buffer solution 1M, liquid</td>
			<td>Life Technologies Europe bv</td>
			<td>15630049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BUMINATE Albumin, 25%&#160;</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>60010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Water for injection</td>
			<td style="width:189px;">B. Braun</td>
			<td style="width:163px;">3624315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td style="width:189px;">Merck</td>
			<td style="width:163px;">102382&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Magnesium chloride hexahydrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td style="width:163px;">M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Apyrase</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>A6535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-12203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Endothelial Cell Growth Medium (Ready-to-use)</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-22010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Aortic Endothelial Cells (HAoEC)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">&#160;PCS-100-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Vascular Cell Basal Medium&#160;</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Endothelial Cell Growth Kit-BBE</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Primary Human Aortic Smooth Muscle Cells (HAoSMC)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Vascular Smooth Muscle Cell Growth Kit</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">PCS-100-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Human endothelial cell line, EA.hy926</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">CRL-2922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">30-2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Mouse endothelial cell line, SV 40 transformed (SVEC4-10)</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">CRL-2181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Human Monocytic cell line, THP-1</td>
			<td style="width:189px;">DSMZ</td>
			<td style="width:163px;">ACC-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RPMI 1640 with Ultra-Glutamine</td>
			<td style="width:189px;">Lonza</td>
			<td>BE12-702F/U1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Mouse monocyte/macrophage RAW264.7</td>
			<td style="width:189px;">ATCC</td>
			<td style="width:163px;">TIB-71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:420px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM), high glucose</td>
			<td style="width:189px;">Gibco</td>
			<td style="width:163px;">11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Accutase</td>
			<td style="width:189px;">Promocell GmbH</td>
			<td>C-41310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Percoll</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>P1644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">Histopaque 1119</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td>11191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:420px;">10x PBS</td>
			<td style="width:189px;">Life Technologies Europe bv</td>
			<td style="width:163px;">14200075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:420px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tubes with Sodium Heparin</td>
			<td style="width:189px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:163px;">367876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:420px;">VACUETTE TUBE 9 ml 9NC Coagulation sodium citrate 3.2%&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Greiner Bio</td>
			<td style="width:163px;">455322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:420px;">HCl/EtOH mixture (1.2 mol/L HCl and 50% ethanol) in water</td>
			<td style="width:189px;">Sigma-Aldrich Chemie</td>
			<td style="width:163px;">Prepare by mixing 0.3L HCl (4 mol/L) with 0.7L of 70% v/v ethanol in a fume hood</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laminar flow-based assays to investigate leukocyte recruitment on cultured vascular cells and adherent platelets

Rekruttering av leukocytter skade eller betennelse områder for skade eller skade på vev har blitt undersøkt i løpet av de siste tiårene, og har resultert i begrepet leukocytter vedheft cascade. Men nøyaktig molekylære mekanismer involvert i leukocytter rekruttering ennå ikke blitt fullt har identifisert. Siden leukocytter rekruttering fortsatt et viktig tema innen infeksjon og betennelse (auto-) immun forskning, presenterer vi en enkel laminær strømning-baserte analysen studere underliggende mekanismene vedheft, de vedheft, og Transmigration av leukocytter under venøs og arteriell regimer. I vitro analysen kan brukes å studere molekylære mekanismer underlie samspillet mellom leukocytter og deres cellular partnere i forskjellige modeller av vaskulær betennelse. Denne protokollen beskriver en laminær strømning-baserte analysen ved hjelp av en parallell-flow chamber og en invertert fase kontrast mikroskop koblet til et kamera for å studere samspillet av leukocytter og endotelceller eller blodplater, som kan visualisere og spilt inn så analysert frakoblet. Endotelceller, blodplater eller leukocytter kan være forbehandlet med hemmere eller antistoffer finne rollen bestemt molekyler under denne prosessen. Skjær forhold, dvs venøs eller arteriell skjæring stress, kan lett tilpasses av viskositet og strømningshastighet på perfused væsker og høyden på kanalen.

For å studere endothelial-leukocytter vedheft, var fluorescently merket THP-1 celler perfused over en TNFα - eller ikke-stimulert endotelial monolayer i 2 minutter på 3 Dyn/cm2. Totalt antall tilhenger monocytic celler ble bestemt etter 2 min av perfusjon av fange 6 uavhengige felt over en periode på 2-6 min. Tilhenger cellene kvantifisert i minst 6 bilder tatt med en invertert fase kontrast/fluorescens mikroskopet (f.eksEVOS-FL) 10 X forstørrelse er koblet til et...

Watch this Scientific Journal Video about Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets at JoVE.com

Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets

Laminær strømning-baserte analyser undersøke leukocytter rekruttering på kulturperler vaskulære celler og tilhenger blodplater

Leukocytter samhandle ivrig med vaskulære celler og blodplater etter fartøyet veggen skade eller under betennelse. Her beskriver vi en enkel laminær strømning-baserte analysen betegner molekylære mekanismer underlie samspillet mellom leukocytter og deres cellular partnere.

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

Worldwide, hypertension is reported to be in approximately a quarter of the population and is the leading biomedical risk factor for mortality worldwide. ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Insektet<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftig infeksjon Model for å etterforske Bakteriell Patogenese

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

En Flow Adhesion analysen til Study leucocyte Rekruttering til humane Sinus endotelet under forhold med Skjær Stress

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Large-Scale Purification of Porcine or Bovine Photoreceptor Outer Segments for Phagocytosis Assays on Retinal Pigment Epithelial Cells

Large-Scale Rensing av Svinekjøtt eller Bovine fotoreseptor Outer Segmenter for fagocytose Analyser på Retinal Pigment Epitelceller

Analysis of one of the vital functions of retinal pigment epithelial (RPE) cells, the phagocytosis of spent aged distal fragments of photoreceptor outer ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Analysere effekten av stromalceller på rekruttering av leukocytter fra Flow

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In vitro og in vivo modell for å studere bakteriell adhesjon til fartøyet veggen under strømningsforhold

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Intramikroskopi av Leukocytt-endothelial og blodplater-leukocytt Interaksjon i Mesenterial Vener i Mus

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Retroviral Transduction of Helper T Cells as a Genetic Approach to Study Mechanisms Controlling their Differentiation and Function

Retroviral Transduksjon T-hjelpeceller som genetisk tilnærming å studere mekanismer kontrollere sine Differensiering og funksjon

Helper T cell development and function must be tightly regulated to induce an appropriate immune response that eliminates specific pathogens yet prevents ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescens-baserte Neuraminidase inhiberingsanalyse for å vurdere i hvilken grad influensavirus til neuraminidase Inhibitor Class of Antivirale

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Using Phylogenetic Analysis to Investigate Eukaryotic Gene Origin

Bruke fylogenetisk analyse å undersøke eukaryote Gene opprinnelse

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct ...