यह विधि आंखों के बैंकों में कॉर्नियल दाता ऊतकों की स्क्रीनिंग और चयन में सुधार कर सकती है, कॉर्निया प्रत्यारोपण के परिणामों को बढ़ा सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ इसकी उच्च रिज़ॉल्यूशन मूल्यांकन क्षमता है और यह कि कॉर्निया छवि अधिग्रहण के दौरान भंडारण माध्यम से भरे एक बंद कक्ष में डूबा रहता है, जिससे संदूषण का कोई भी संभावित जोखिम कम हो जाता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन हमारी प्रयोगशाला से पीएचडी स्नातक मैले विलबर्ट होगा।
शुरू करने के लिए, नमूना धारक में भंडारण माध्यम में डूबे कॉर्निया को उपकला के साथ रखें। कॉर्निया के शीर्ष पर नमूना धारक के साथ प्रदान की गई एक साफ सिलिका कवर स्लिप रखें। फिर, अपने आधार को धीरे से मोड़कर धारक को बंद करें जब तक कि नमूना थोड़ा चपटा न हो जाए और कवर स्लिप के नीचे स्थिर न हो जाए, जो अपेक्षाकृत समान इमेजिंग सतह प्रदान करता है।
किसी भी हवा के बुलबुले से बचने के लिए सावधानी बरतें। विसर्जन माध्यम के रूप में कवर स्लिप पर नेत्र या ऑप्टिकल जेल की मोटी परत लागू करें। डिवाइस के पीछे पावर स्विच चालू करके डिवाइस को प्रारंभ करें।
डिवाइस के सामने एक हरे रंग के एलईडी की रोशनी इंगित करती है कि शक्ति चालू है। सुनिश्चित करें कि चल ट्रे को छोड़कर इमेजिंग चरण स्पष्ट है। फिर प्रॉम्प्ट पर मोटर्स को प्रारंभ करने के लिए अधिग्रहण सॉफ़्टवेयर में ओके पर क्लिक करें।
डिवाइस सेट अप करने के लिए, निर्दिष्ट और अनिवार्य फ़ील्ड में नमूना पहचानकर्ता दर्ज करें. और वैकल्पिक रूप से एक नमूना विवरण और अध्ययन विवरण दर्ज करें। इसके बाद, नमूने का स्नैपशॉट बनाने के लिए मैक्रो छवि प्राप्त करें पर क्लिक करें जिसका उपयोग बाद में पार्श्व स्थिति और नेविगेशन उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है।
एक बार संतुष्ट होने के बाद, हाँ पर क्लिक करके संकेत पर छवि को मान्य करें। जिसके बाद डिवाइस नमूना ट्रे को उद्देश्य के नीचे ले जाएगा और ऑटो-समायोजन करेगा। सुनिश्चित करें कि माइक्रोस्कोप उद्देश्य आगे बढ़ने से पहले ऑप्टिकल जेल में अच्छी तरह से डूबा हुआ है।
एक्सप्लोर टैब पर जाकर अधिग्रहण तैयार करें। छवियों का ढेर प्राप्त करने से पहले, स्क्रीन पर जॉयस्टिक या मैनुअल चयन के माध्यम से कॉर्निया के केंद्र में नेविगेट करें। ग्राफिकल यूजर इंटरफेस में जॉयस्टिक के रोटेशन, स्लाइडर या मैनुअल कीबोर्ड इनपुट के समायोजन के माध्यम से इमेजिंग गहराई को अलग करें।
फिर इष्टतम कॉर्नियल इमेजिंग के लिए औसत मान को 40 में समायोजित करें। गहराई क्षेत्र में कॉर्नियल सतह मान या पहला छवि स्थान दर्ज करें। फिर छवियों को प्राप्त करने के लिए अधिग्रहण टैब का चयन करें।
डिवाइस के अक्षीय रिज़ॉल्यूशन से मेल खाने वाले स्लाइस स्पेसिंग का चयन करें और सेट करें। स्लाइस की संख्या के तहत कॉर्नियल मोटाई मान दर्ज करें। पैरामीटर और अधिग्रहण समय की समीक्षा करें।
और संतुष्ट होने पर, अधिग्रहण शुरू करने के लिए ओके दबाएं। अधिग्रहण के दौरान, उस मेज के संपर्क से बचें जिस पर माइक्रोस्कोप स्थित है। स्ट्रोमल और बोमन की परत की मोटाई का आकलन करने के लिए, कॉर्नियल क्रॉस-सेक्शन की दूरी को मापें।
उदाहरण के लिए, पाठ पांडुलिपि में वर्णित क्रॉस सेक्शन में पांच समान रूप से स्थान बिंदु जोड़ें। दृश्य के डिफ़ॉल्ट क्षेत्र के अनुसार ज्ञात दूरी के दो बिंदुओं के बीच एक रेखा खींचें। फिर विश्लेषण टैब पर जाएं और स्केल सेट करें का चयन करें।
उपयुक्त फ़ील्ड में ज्ञात दूरी और लंबाई की इकाई दर्ज करें। 1024 पिक्सेल या 780 माइक्रोमीटर पर सेट करें और ठीक पर क्लिक करें। अज्ञात दूरी के दो बिंदुओं के बीच एक रेखा खींचें और स्थिति पट्टी से सीधे मापी गई लंबाई या दूरी पढ़ें। भिन्नता के माध्य और गुणांक को रिकॉर्ड करें।
छवि टैब पर क्लिक करें और केराटिनोसाइट घनत्व निर्धारित करने के लिए स्टैक्स के तहत रेसलिस जेड का चयन करें। यह तुलनीय मोटाई के स्लाइस का उत्पादन करने के लिए सात के समूहों में स्ट्रोमल एन फेस छवियों को जोड़ देगा। आगे के विश्लेषण के लिए, पूर्ववर्ती सबसे स्ट्रोमा के लिए सभी उपलब्ध फेस स्लाइस, पूर्ववर्ती स्ट्रोमा के लिए 15 छवियां, मध्य-स्ट्रोमा के लिए पांच छवियां और पश्चवर्ती स्ट्रोमा के लिए पांच छवियां शामिल हैं।
प्रत्येक एन-फेस छवि पर, रुचि के 300 बाय 300 माइक्रोमीटर क्षेत्र का चयन करें। न्यूक्लियस विज़ुअलाइज़ेशन को बढ़ाने के लिए, संपादन टैब के तहत इनवर्ट का उपयोग करके छवि को उलटा करें। छवि टैब पर क्लिक करके और ब्राइटनेस-कंट्रास्ट पर नेविगेट करके कंट्रास्ट और चमक समायोजित करें।
सेल नाभिक को मैन्युअल रूप से गिनने के लिए, प्लगइन्स पर जाएं और विश्लेषण टैब के तहत सेल काउंटर पर नेविगेट करें। आरंभ करें और फिर एक काउंटर प्रकार का चयन करें। फिर उल्टे छवि में अंधेरे अंडाकार विशेषताओं पर क्लिक करके सेल नाभिक की गणना करें, छवि के चार पक्षों में से केवल दो के लिए छवि सीमा पर उतरने वालों पर विचार करें।
चयनित मानव दाता कॉर्निया को अंग संवर्धन माध्यम में भंडारण के बाद सूज दिया गया था, जिससे एडेमेटस कॉर्निया का एक पैथोफिजियोलॉजिकल मॉडल दिया गया और सीमित प्रवेश गहराई के कारण पूरे कॉर्नियल मोटाई के माध्यम से छवि अधिग्रहण को रोका गया। डेक्सट्रिन पूरक अंग संवर्धन माध्यम में स्थानांतरण, सूजन को कम करता है और इसके परिणामस्वरूप सामान्य मोटाई के दाता कॉर्निया होते हैं। रोगग्रस्त कॉर्निया को रूपात्मक परिवर्तनों और विशिष्ट स्ट्रोमल विशेषताओं द्वारा पहचाना गया था, जिसमें चर स्ट्रोमल मोटाई या बोमन की परत में कमी शामिल थी।
केराटिनोसाइट घनत्व और स्ट्रोमल परावर्तकता का आकलन हिस्टोलॉजी जैसे विश्लेषण और पूर्ण-क्षेत्र ऑप्टिकल सुसंगतता माइक्रोस्कोपी के साथ पैथोलॉजिकल कॉर्नियल ऊतकों से सामान्य के भेदभाव में सहायता करता है, जो नैदानिक ऑप्टिकल सुसंगतता टोमोग्राफी सिस्टम की क्षमताओं से परे है। इस वीडियो को देखने के बाद, आपको इस बात की अच्छी समझ होनी चाहिए कि सामान्य मानव कॉर्नियल ऊतकों से बीमारी के भेदभाव की अनुमति देने वाले कॉर्नियल स्ट्रोमा के गुणात्मक और मात्रात्मक हिस्टोलॉजी जैसे विश्लेषण कैसे करें।
