Denna metod kan förbättra screening och urval av hornhinnedonatorvävnader i ögonbanker, förbättra resultaten av hornhinnetransplantation. Den största fördelen med denna teknik är dess högupplösta bedömningsförmåga och att hornhinnan förblir nedsänkt i en sluten kammare fylld med lagringsmedium under hela bildinsamlingen, vilket minskar eventuell risk för kontaminering. Demonstrerar proceduren kommer att vara Maelle Vilbert, en doktorsexamen från vårt laboratorium.
Börja med att placera hornhinnan nedsänkt i lagringsmedium i provhållaren med epitelet uppåt. Placera en ren kiseldioxidtäcke som medföljer provhållaren ovanpå hornhinnan. Stäng sedan hållaren genom att försiktigt vrida basen tills provet är något platt och immobiliserat under täckglaset, vilket ger en relativt jämn bildyta.
Vidta försiktighetsåtgärder för att undvika luftbubblor. Applicera ett tjockt lager oftalmisk eller optisk gel på täcket som nedsänkningsmedium. Initiera enheten genom att slå på strömbrytaren på enhetens baksida.
Belysning av en grön lysdiod på enhetens framsida indikerar att strömmen är på. Se till att bildsteget är tydligt, förutom det rörliga facket. Klicka sedan på OK i förvärvsprogramvaran för att initiera motorerna vid prompten.
Om du vill konfigurera enheten anger du en exempelidentifierare i det angivna och obligatoriska fältet. Och eventuellt ange en provbeskrivning och studiebeskrivning. Klicka sedan på Hämta makrobild om du vill skapa en ögonblicksbild av exemplet som senare kan användas för sidopositionering och navigering.
När du är nöjd validerar du bilden vid uppmaningen genom att klicka på Ja. Därefter flyttar enheten provbrickan under målet och utför en automatisk justering. Se till att mikroskopmålet är väl nedsänkt i den optiska gelén innan du fortsätter vidare.
Förbered förvärvet genom att gå till fliken Utforska. Innan du får en bunt bilder, navigera till mitten av hornhinnan via joysticken eller manuellt val på skärmen. Variera bilddjupet via rotation av joysticken, justering av skjutreglaget eller manuell tangentbordsinmatning i det grafiska användargränssnittet.
Justera sedan medelvärdesvärdet till 40 för optimal avbildning av hornhinnan. Ange hornhinnans ytvärde eller första bildplats i djupfältet. Välj sedan fliken Hämta för att hämta bilder.
Välj och ställ in segmentavståndet som matchar enhetens axiella upplösning. Ange värdet för hornhinnans tjocklek under Antal segment. Granska parametrar och förvärvstid.
Och när du är nöjd, tryck på OK för att starta förvärvet. Under förvärvet, undvik kontakt med bordet på vilket mikroskopet är placerat. För att bedöma stromal och Bowmans skikttjocklek, mäta avstånd av hornhinnans tvärsnitt.
Lägg till exempel till fem punkter med lika stora avstånd över tvärsnittet enligt beskrivningen i textmanuskriptet. Rita en linje mellan två punkter med känt avstånd enligt standardsynfältet. Gå sedan till fliken Analysera och välj Ange skala.
Ange känt avstånd och längdenhet i lämpliga fält. Ställ in på 1024 pixlar eller 780 mikrometer och klicka på OK. Rita en linje mellan två punkter med okänt avstånd och läs längden eller avståndet mätt direkt från statusfältet. Anteckna medelvärde och variationskoefficient.
Klicka på fliken Bild och välj Skiva Z under Staplar för att bestämma keratinocytdensiteten. Detta kommer att summera stromala ansiktsbilder i grupper om sju för att producera skivor med jämförbar tjocklek. För vidare analys, inkludera alla tillgängliga ansiktsskivor för det främre stroma, 15 bilder för det främre stroma, fem bilder för mitten av stroma och fem bilder för det bakre stroma.
På varje bild med ansiktet väljer du ett område av intresse på 300 x 300 mikrometer. Om du vill förbättra kärnvisualiseringen inverterar du bilden med Invertera under fliken Redigera. Justera kontrast och ljusstyrka genom att klicka på fliken Bild och navigera till Ljusstyrka-kontrast.
För att manuellt räkna cellkärnor, gå till Plugins och navigera till Cell Counter under fliken Analysera. Tryck på Initiera och välj sedan en räknartyp. Räkna sedan cellkärnorna genom att klicka på mörka ovala funktioner i den inverterade bilden, med tanke på de som landar på en bildkant endast för två av bildens fyra sidor.
Den utvalda mänskliga donatorhornhinnan svullnade efter lagring i organodlingsmedium, vilket gav en patofysiologisk modell av den edematösa hornhinnan och förhindrade bildförvärv genom hela hornhinnans tjocklek på grund av begränsat penetrationsdjup. Överföring till dextrin kompletterade organodlingsmedium, minskade svullnaden och resulterade i donatorhornhinnor av normal tjocklek. Sjuka hornhinnor kändes igen av morfologiska förändringar och typiska stromaegenskaper, inklusive en minskning av variabel stromatjocklek eller Bowmans lager.
Bedömning av keratinocytdensiteten och stromal reflektivitet bidrog ytterligare till histologiliknande analys och differentiering av normala från patologiska hornhinnevävnader med optisk koherensmikroskopi i hela fältet, vilket ligger utanför kapaciteten hos kliniska optiska koherenstomografisystem. Efter att ha tittat på den här videon bör du ha en god förståelse för hur man utför kvalitativ och kvantitativ histologiliknande analys av hornhinnans stroma som möjliggör differentiering av sjukdom från normala mänskliga hornhinnevävnader.
