Denne protokol giver en pålidelig dyremodel af en rygmarv lateral nemisection, der efterligner Brown-Sequard syndrom hos mennesker, og en ny kombineret adfærd skala for vurdering asymmetrisk adfærd underskud. Denne mus hemisection model kan fremme vores forståelse af de neurologiske funktionsnedsættelser, der opstår i Brown-Sequard syndrom hos mennesker. I modsætning til dine nævnte vurderinger, kan vores nye kombinerede adfærd skala anvendes på enhver form, der kræves vurdering asymmetriske, lokomotiv og in-lab underskud.
Ved hjælp af denne, konsekvente, naturlige hemi-sektion model kan lette sammenligningen af det eksperimentelle resultat mellem grundforskning og oversættelse forskning. Brug konsekvent resultat med denne model kan være svært for begyndere. Det kritiske trin er at placere nålen lodret i midterlinjen, som en vejledning til at fremkalde skaden.
Efter at have set denne video, bør du have en god forståelse af, hvordan man udfører både den kirurgiske og adfærdsmæssige procedurer. På dagen for proceduren, rense det kirurgiske bord med 70% ethanol, og placere en forvarmet varmepude på bordet. Efter dækker det kirurgiske område med en steril kirurgisk drapere, bekræfte en manglende reaktion på tå-knivspids i en bedøvet rotte.
Påfør salve til dyrets øjne for at forhindre hornhinde tørring, og barbere håret overliggende brysthvirvler. Derefter rense den eksponerede hud med tre vekslende jod-baserede og ethanol scrubs. Når dyret er klar, skal du finde det trettende ribben og følge ribbenet dorsally at identificere dens forbindelse med T-13 ryghvirvel.
Tæl op for at identificere T-9 ryghvirvel, og bruge en række femten skalpel klinge til at gøre en tre til fire centimeter midline hud snit i løbet af de otte til ellevte vertebrale spinous processer. Flyt rotten under et kirurgisk mikroskop, og ligefrem dissekere og adskille paraspinal muskler sidespor fra spinøse processer mod facetter af T-9 og T-10 ryghvirvler på begge sider. Disablise rygsøjlen med en modificeret stabiliserende holder, lave en slids på begge sider af den laterale vertebrale knogle, og skub rustfrit stål arme af holderen under de udsatte tværgående proces facets.
Stram skruerne for at fastgøre holderen, og brug en vinkelmåler til at udsætte T-8 til 11 vertebrale laminae og spinøse processer. Ved hjælp af en rongeur, klip væk T-9 spinous processen, og fjern en lille del af lamina, venstre til midterlinjen og hele højre del af lamina, så lateralt som muligt. Sæt derefter ronguer forsigtigt under lamina, og klip et lille stykke knogle ad gangen, indtil den ønskede region af laminectomy er afsluttet.
Dernæst identificere dorsal midterlinjen af spinal akkord, og indsætte en 30-gauge nål lodret gennem midterlinjen, ind i spinal akkord, hele vejen til ventralvæggen af rygmarvskanalen, med facet vender mod højre. Stop enhver blødning med et lille stykke sterilt gel skum, og indsætte en spids af et par iridectomy mikrokirurgi saks gennem midterlinjen af nålen sporet, og den anden spids langs den laterale overflade af højre hemichord, at gøre en komplet snit på højre hemichord. Brug den laterale kant af den samme nål som en kniv, at skære gennem læsionen hul for at bekræfte en komplet højre ømme.
Og visualisere bunden af rygsøjlen kanalen, for at kontrollere fuldstændigheden af den rigtige neing. Brug cementblanding til at bygge den smalle bro over svampen, og T-8 og T-10 spinøse processer. Derefter sutur muskel og hud lag separat med 4/0 silketråd, og injicere 0,9% steril saltvand subkutanely at opretholde hydrering.
Trykke urinblæren to til tre gange dagligt for den første uge, og en til to gange i de følgende uger, indtil spontan blære voiding vender tilbage. På de relevante forsøgstidspunkter efter indgrebet skal den voksne rotte sættes i et forsøg på åbent felt, og dyrets bevægelse undersøges i fire minutter. Ved hjælp af tabellen skal du tildele en værdi på 1 for ja'og 0 for nej'for hver adfærdskategori, og du kan opsummere den samlede værdi for at give en endelig ensidig ømmesejr på 0-8.
Ved analyse af gatekobling registreres forsøgsdyrets gang på en smal baneanordning, og der tildeles en score på 0 for nr. Til vurdering af kontaktplacering skal dyret holdes i lodret stilling, således at begge bagbenene er tilgængelige til placeringsrespons, og børste den ene baglems dorsale overflade let fremad mod kanten af en overflade. Overhold foden placering på overfladen, og tildele en hind lemmer kontakt placering score på 0 for ingen placering'og 1 for placering'For grid-walking evaluering, placere rotten på en forhøjet tredive seks med tredive otte centimeter plast-belagt trådnet gitter med 3 cm kvadrerede åbninger, og video optage rotte gå frit på tværs af platformen for 30 trin for at tillade kvantificering af antallet af fod fejltrin for hver lemmer til at bestemme sværhedsgraden af motorunderskud.
Amino fluorescerende farvning af et tværsnit på skade epicentret viser et fuldstændigt tab af højre hemichord. Og bevarelsen af venstre hemichord kontralaterale til skaden. Scores af de enkelte gate vurdering foranstaltninger kan analyseres separat, eller de kan kombineres i en sammensat kombineret adfærd efter hemisection score.
I de første tre dage efter skaden, rotter mister evnen til at træde, med trin-lignende bevægelser begynder at dukke op igen på ipsilesional side på 7 10 dage efter skade. Og med de fleste trin er dorsale skridt. Ved 28 dage efter T-9 hemisection, rotterne kan tage plantar skridt med næsten normal koordinering.
Til sammenligning er den kontraformiske baglem lidt underlig afbrudt, da den ensidige 6-1-score falder inden for de første fem dage efter skaden og vender tilbage til baseline efter dag 10 efter skaden. Ved den samlede gatekoblingsprøvning reduceres både koordinationens stabilitet og tilpasningsevne efter neing markant i løbet af de første fem dage efter skaden. Kontakten placering og grid-walking af ipsilaterale bagekstremiteter er også påvirket, normalt inddrive, når dyret begynder at tage plantar skridt.
Det kan være svært at producere en ren-cut skade. Placering af en nål i midten kan være en nyttig retningslinje for at sikre en fuldstændig adskillelse af vævet.