Denne protokollen gir en pålitelig dyremodell av en ryggmargs lateral hemisection som etterligner Brown-Sequard syndrom hos mennesker, og en ny kombinert atferdsskala for å vurdere asymmetriske atferdsunderskudd. Denne muse hemisection modellen kan fremme vår forståelse av nevrologiske funksjonsnedsetteringer som oppstår i Brown-Sequard syndrom hos mennesker. I motsetning til dine nevnte vurderinger, kan vår nye kombinerte atferdsskala brukes på enhver form som krevde vurdering asymmetrisk, lokomotivet og i laboratoriet underskudd.
Ved hjelp av denne kan konsekvent, naturlig hemi-seksjonsmodell lette sammenligningen av det eksperimentelle resultatet mellom grunnleggende og oversettelsesforskning. Bruk av konsistent resultat med denne modellen kan være vanskelig for nybegynnere. Det kritiske trinnet er å plassere nålen vertikalt i midtlinjen, som en veiledning for å indusere skaden.
Etter å ha sett denne videoen, bør du ha en god forståelse av hvordan du utfører både kirurgiske og atferdsprosedyrer. På prosedyrens dag rengjør du det kirurgiske bordet med 70% etanol, og legg en forvarmet varmepute på bordet. Etter å ha dekket operasjonsområdet med en steril kirurgisk drapering, bekreft mangel på respons på tåklemme i en bedøvet rotte.
Påfør salve på dyrets øyne for å forhindre hornhinnen tørking, og barber håret overlying thorax ryggvirvler. Rengjør deretter den eksponerte huden med tre vekslende jodbaserte og etanolskrubber. Når dyret er klart, finn det trettende ribben og følg ribben dorsally for å identifisere forbindelsen med T-13 vertebra.
Telle opp for å identifisere T-9 vertebra, og bruke en nummer femten skalpell blad for å gjøre en tre til fire centimeter midtlinje hud snitt over åtte til ellevte vertebrale spinøse prosesser. Flytt rotten under et kirurgisk mikroskop, og rett ut dissekere og skill paraspinalmuskulaturen sidealt fra de spinøse prosessene mot fasetter av T-9 og T-10 ryggvirvler på begge sider. Disablise ryggraden med en modifisert stabiliserende holder, lag en spalte på begge sider av lateral vertebral bein, og skyv de rustfrie stålarmene på holderen under den eksponerte tverrgående prosessen faseter.
Stram skruene for å feste holderen, og bruk en vinkelmåler for å utsette T-8 til 11 vertebral laminae og spinøse prosesser. Bruk en rongeur, klipp bort T-9 spinøs prosess, og fjern en liten del av lamina, venstre til midtlinjen og hele høyre del av lamina, så lateralt som mulig. Sett deretter ronguer forsiktig under lamina, og klipp ett lite stykke bein om gangen, til ønsket region av laminektomi er fullført.
Deretter identifiserer du ryggsalmidtlinjen i spinalakkordet, og setter inn en 30-gauge nål vertikalt gjennom midtlinjen, inn i spinalakkordet, helt til vertebralkanalens ventrale vegg, med skråkanten vendt mot høyre. Stopp blødning med et lite stykke sterilt gelskum, og sett inn den ene spissen av et par iridektomi mikrokirurgi saks gjennom midtlinjen av nålesporet, og den andre spissen langs den laterale overflaten av høyre hemichord, for å gjøre et komplett kutt på høyre hemichord. Bruk sidekanten på samme nål som en kniv, for å skjære gjennom lesjonsgapet for å bekrefte en fullstendig høyre hemiseksjon.
Og visualiser bunnen av vertebralkanalen, for å verifisere fullstendigheten av høyre hemiseksjon. Bruk sementblanding til å bygge den smale broen over svampen, og T-8 og T-10 spinøse prosesser. Deretter suturerer muskel- og hudlagene separat med 4/0 silketråd, og injiser 0,9% steril saltvann subkutant for å opprettholde hydrering.
Trykke urinblæren to til tre ganger daglig for den første uken, og en til to ganger i de følgende ukene, til spontan blære annullering returnerer. På de riktige eksperimentelle tidspunktene etter prosedyren, plasser den voksne rotten i et åpent felteksperiment, og undersøk dyrets bevegelse i fire minutter. Bruk tabellen til å tilordne en verdi på 1 for ja og 0 for nei for hver atferdskategori, og summere den totale verdien for å gi en endelig ensidig hemisection stepping score på 0-8.
For gate kobling analyse, registrere eksperimentelle dyr går på en smal rullebane enhet, og tildele en score på 0 for no'1 for vanlig'og/ eller klønete'og 2 for normal'for hver kobling kategori. For kontaktplasseringsvurdering, hold dyret i vertikal stilling, slik at begge baklemmer er tilgjengelige for plasseringsresponsen, og børst den dorsale overflaten av ett baklem lett fremover mot kanten av en overflate. Observer foten plassering på overflaten, og tildele en baklem kontakt plassere score på 0 for ingen plassering'og 1 for plassering'For grid-walking evaluering, plassere rotte på en forhøyet trettiseks med trettiåtte centimeter plast-belagt wire-mesh rutenett med 3 cm kvadrert åpninger, og video registrere rotte går fritt over plattformen for 30 trinn for å tillate kvantifisering av antall fot feiltrinn for hver lem for å bestemme alvorlighetsgraden av motorunderskuddet.
Amino fluorescerende farging av et tverrsnitt på skade epicenter viser et fullstendig tap av høyre hemichord. Og bevaring av venstre hemichord kontralateral til skaden. Resultatene av de individuelle gatevurderingstiltakene kan analyseres separat, eller de kan kombineres til en sammensatt kombinert atferd etter hemisection score.
I de første tre dagene etter skaden mister rotter evnen til å gå, med trinnlignende bevegelser som begynner å dukke opp igjen på ipsilesional side på 7 10 dager etter skade. Og med de fleste trinn er dorsal trinn. Ved 28 dager etter T-9 hemisection, kan rottene ta plantar skritt med nesten normal koordinering.
Til sammenligning blir det kontralesjonale baklemmet mindre avbrutt med den ensidige hemisection-poengsummen som faller innen de første fem dagene etter skaden, og går tilbake til baseline etter dag 10, etter skade. For den totale gatekoblingstesten reduseres både stabiliteten og tilpasningsevnen til koordineringen etter hemiseksjon, i løpet av de første fem dagene etter skade. Kontaktplasseringen og nettvandringen av det ipsilaterale baklemmeret påvirkes også, vanligvis gjenoppretter når dyret begynner å ta plantar-trinn.
Det kan være vanskelig å produsere en ren skade. Å plassere en nål i midten kan være en nyttig retningslinje for å sikre en fullstendig separasjon av vevet.