Detta protokoll ger en tillförlitlig djurmodell av en ryggmärg laterala hemisection som härmar Brown-Sequard syndrom hos människor, och en ny kombinerad beteende skala för bedömning av asymmetriska beteende underskott. Denna mus hemisection modell kan ytterligare vår förståelse av de neurologiska funktionsnedsättningar som uppstår i Brown-Sequard syndrom hos människor. Till skillnad från dina nämnda bedömningar, kan vår nya kombinerade beteende skala tillämpas på alla mögel som krävs bedömning asymmetrisk, lokomotiv och i-lab underskott.
Med hjälp av denna, konsekvent, naturlig hemi-avsnitt modell kan underlätta jämförelsen av det experimentella resultatet mellan grund-och översättning forskning. Att använda konsekvent resultat med denna modell kan vara svårt för nybörjare. Det kritiska steget är att placera nålen vertikalt i mittlinjen, som en vägledning för att inducera skadan.
Efter att ha sett den här videon bör du ha en god förståelse för hur man utför både de kirurgiska och beteendemässiga procedurerna. På dagen för förfarandet, rengör operationsbordet med 70%etanol, och placera en förärmd uppvärmning pad på bordet. Efter täcker det kirurgiska området med en steril kirurgisk drapera, bekräfta en brist på svar på tå-nypa i en sövd råtta.
Applicera salva på djurets ögon för att förhindra hornhinnans torkning, och raka håret överliggande bröstkotorna. Rengör sedan den exponerade huden med tre alternerande jodbaserade och etanolscrubbar. När djuret är redo, lokalisera den trettonde revbenet och följ revbenet dorsally att identifiera dess samband med T-13 kotan.
Räkna upp för att identifiera T-9 kotan, och använda ett antal femton skalpell blad för att göra en tre till fyra centimeter mittlinjen hud snitt över de åtta till elfte vertebral spinous processer. Flytta råttan under ett kirurgiskt mikroskop, och rakt på sak dissekera och separera paraspinalmuskulaturen i lateralt från de spinösa processerna mot fasetterna av T-9 och T-10 kotor på båda sidor. Inaktivera ryggraden med en modifierad stabiliserande hållare, gör en slits på båda sidor av det laterala kotbenet och skjut hållarens rostfria armar under de exponerade tvärgående processasetterna.
Dra åt skruvarna för att fästa hållaren, och använd en gradskiva för att exponera T-8 till 11 vertebral laminae och spinous processer. Med hjälp av en rongeur, klipp bort T-9 spinous processen, och ta bort en liten del av lamina, vänster till mittlinjen och hela högra delen av lamina, så i övrigt som möjligt. Sätt sedan in ronguer försiktigt under lamina, och klipp en liten bit ben i taget, tills önskad region av laminectomy är klar.
Därefter identifiera rygg mittlinjen i ryggmärgen, och sätt in en 30-gauge nål vertikalt genom mittlinjen, i ryggmärgen, hela vägen till den ventrala väggen i kotkanalen, med avfasningen vänd till höger. Stoppa någon blödning med en liten bit av steril gel skum, och sätt in en spets av ett par iridectomy mikro-kirurgi sax genom mittlinjen av nålen spåret, och den andra spetsen längs den laterala ytan av rätt hemichord, att göra en komplett snitt på höger hemichord. Använd den laterala kanten av samma nål som en kniv, för att skära genom lesionsgapet för att bekräfta en komplett höger hemisection.
Och visualisera botten av kotkanalen, för att verifiera fullständigheten av den högra hemisection. Använd cementblandning för att bygga den smala bron över svampen, och T-8 och T-10 spinous processer. Suturera sedan muskel- och hudlagren separat med 4/0 silkestråd, och injicera 0,9%steril saltlösning subkutant för att bibehålla återfuktningen.
Trycka urinblåsan två till tre gånger dagligen under den första veckan, och en till två gånger under de följande veckorna, tills spontana urinblåsan makulering återvänder. Vid lämpliga experimentella tidpunkter efter ingreppet placerar du den vuxna råttan i ett försök med öppet fält och undersöker djurets förflyttning i fyra minuter. Med hjälp av tabellen, tilldela värdet 1 för ja'och 0 för no'for varje beteende kategori, och summera det totala värdet för att ge en slutlig ensidig hemisection stegning värdering av 0-8.
För grindkopplingsanalys, registrera försöksdjuret som går på en smal bananordning, och tilldela en poäng på 0 för no'1 för regular'and/or clumsy'and 2 för normal'för varje kopplingskategori. För bedömning av kontaktplacering, håll djuret i vertikalt läge, så att båda bakbenen finns tillgängliga för placeringssvaret, och borsta ryggytan på en bakben lätt framåt mot kanten av en yta. Observera foten placering på ytan, och tilldela en bakben kontakt placering poäng på 0 för ingen placering'och 1 för placement'For grid-walking utvärdering, placera råttan på en förhöjd trettio sex av trettio åtta centimeter plast-belagda trådnät nätet med 3 cm kvadrat öppningar, och video spela in råttan gå fritt över plattformen för 30 steg för att möjliggöra kvantifiering av antalet mul felsteg för varje att bestämma svårighetsgraden av motor underskott.
Amino fluorescerande färgning av ett tvärsnitt vid skadan epicentrum visar en fullständig förlust av rätt hemichord. Och bevarandet av den vänstra hemichorden kontralateral mot skadan. Scores av de enskilda gate bedömning åtgärder kan analyseras separat, eller de kan kombineras till en sammansatt kombinerat beteende efter hemisection poäng.
Under de första tre dagarna efter skada, råttor förlorar förmågan att steg, med steg-liknande rörelser börjar dyka upp igen på ipsilesional sidan på 7 10 dagar efter skada. Och med de flesta steg är ryggsteg. Med 28 dagar efter T-9 hemisection, råttorna kan ta plantar steg med praktiskt taget normal samordning.
Som jämförelse är den contralesional bakben mindre avbryts med den ensidiga hemisection poängen släppa inom de första fem dagarna efter skadan, och återvänder till baslinjen av dag 10, post-skada. För totalgrindskopplingsprovningen minskas både koordinationens stabilitet och anpassningsförmåga efter hemisection, markant under de första fem dagarna efter skada. Kontaktplacering och grid-walking av ipsilateral bakben påverkas också, vanligtvis återhämtar sig när djuret börjar ta plantar steg.
Det kan vara svårt att producera en ren-cut skada. Placera en nål i mitten kan vara en bra riktlinje för att försäkra en fullständig separation av vävnaden.