Name: a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation
Uploaded: 2018-06-08T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

Президент получил поддержку для это работать от совместных трансляционная исследовательский грант финансируется педаль Падрес Сан-Диего C3 причиной (#PTC2017).

Всех животных эксперименты следующее, что этот протокол должны быть утверждены соответствующие институциональные животное уход и использование Комитет (IACUC). Все описанные здесь процедуры были одобрены IACUC UCSD.
1. приобретение получателей животных
Примечан?...

<ol>
	<li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013. , (1975).</li><li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion.">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li><li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation:+ultrasound+and+immunohistological+correlation.">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li><li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors:+are+we+there+yet?.">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?.</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li><li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+Electroporation.">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li><li>Martin, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+200+locally+advanced+(stage+III)+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation:+safety+and+efficacy.">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li><li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+Our+preliminary+experience.">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li><li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer.">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38 (2017).</li><li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+ablation+of+tumours:+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy.">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li><li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits.">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li><li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma.">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li><li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response.">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li><li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma.">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li><li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25+Foxp3++T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer.">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li><li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy.">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li><li>Neal, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice.">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559 (2013).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination.">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li><li>Martin, R. C., McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+potential+improved+overall+survival.">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li><li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning.">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li></ol>

В этом исследовании мы продемонстрировали модель иммунокомпетентных мышь для ПК, который может использоваться для изучения последствий IRE на рост опухоли. В настоящее время IRE используется как метод-термальная абляция только в весьма выбранной местнораспространенного PC пациентов, ко?...

Протока поджелудочной железы аденокарцинома (PC) прогнозируется стать второй по значимости причиной смерти от рака в США вокруг 20201. Подавляющее большинство пациентов диагностированных с ПК в конечном итоге умирают от отдаленных метастазов2. PC микроокружения заведомо иммуносупрессивных и хемостойкие. Его desmoplastic стромы содержит нехватка эффектор (анти-опухолевых) Т-клеток и известность иммуносупрессивные лейкоцитов, включая связанный тумором макрофагов (ТАМС), миелоидной производных подавитель клетки (MDSCs), и регулирования T-клеток (Tregs)3 . В их основе лежат необходимость разрабатывать мультимодальной стратегии, позволяющие противодействовать эти эффекты микроокружения.
ГНЕВ был разработан как метод-термальная абляция опухолей. В отличие от методов тепловой абляции IRE не вызывает быстрое коагуляционное некроза, но вместо этого приводит к постепенному apoptotic клеток смерть4. Важно для опухолях поджелудочной железы IRE не подвержены воздействию «радиатор» и может быть выполнена рядом5кровеносные сосуды. Эта технология имеет 510(k) Распродажа от FDA6 и в настоящее время используется клинически, для отдельных пациентов с локально advanced или пограничным местнораспространённым раком поджелудочной железы. В крупнейших опубликованные серии IRE для PC7медиана выживаемости больных, перенесших IRE был приблизительно двойного выживания пациентов с современной химиотерапии без резекции8,9.
Несколько исследований показали, что тепловой абляции индуцирует системный иммунный ответ в других типах тумора (обзор в Чу et al. 10). радиочастотная абляция (РСР) в животных опухоли модели приводит к увеличению Т-клеток инфильтраты11,12, включая увеличение активированного природных убийца (НК) клетки в гепатоцеллюлярным раком пациентов13, 14и уменьшение иммуносупрессивной Tregs в больных раком легких15. Меньшее количество исследований изучили иммунной, microenvironmental и травмы ответы на IRE16. IRE было показано, чтобы стимулировать системный иммунный ответ в иммунокомпетентных мыши модели, в которых рост вторичных (контралатеральной) почечно-клеточной аллотрансплантантов был уменьшена или предотвращена IRE первичной опухоли две недели ранее17. Они также отметили, что иммунокомпетентных мышей требуется меньше напряжения для полной регрессии, чем у мышей. Предположили, что гнев может привести к презентации антигена улучшение, по сравнению с коагуляционное некроз тепловой абляции, но это не было специально изучал.
Мы разработали модель мышь сингенных ПК от линии клеток КЗК-Люк 4580 (подарок от J.J. Yeh в университете Северной Каролины), который был получен от опухоли, который разработан в мужской LSL-красG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 Люк / + мыши, для изучения местных и системных эффектов IRE18,19. Эта линия клетки Люцифераза выражая иммуногенность и также онкогенной иммунокомпетентных мышей C57BL/6, когда вводят кв.км или orthotopically и надежно производит метастазов в печени, когда вводят в селезенке. Мы использовали генератор импульсов программируемый квадратные волны доставить 100 МКС импульсов электроэнергии в соотношении напряжения/расстояние 1500 V/см с помощью массива двух игла зонда (разделенных 5 мм) или Платиновый пинцет электрода кв.км или ортотопическая опухоли, соответственно, в мыши для моделирования последствий IRE в мелких животных.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">ECM 830 square wave electroporator</td>
			<td style="width:147px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:344px;">BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2 needle array electrode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Safety foot switch</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Platinum Tweezer-trode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>&#160;45-0486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM-F12 media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lacrilube</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>19090646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Buprenorphine</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>NC1292810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-luciferrin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IVIS&#160; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse strain C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td>000664/Black 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cell line (KPC-Luc 4580)</td>
			<td colspan="2">J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>Z192406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital calipers</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-648-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable Scalpels, Sterile</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-iodine 10%</td>
			<td>BD</td>
			<td>29900-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable Warming Pad&#160;</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>TP-3E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Hair Clipper</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Drape</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>59-7421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation

Рак поджелудочной железы (PC), болезнь, которая убивает около 40,000 пациентов каждый год в США, успешно уклоняется несколько терапевтические подходы, включая перспективные иммунотерапевтических стратегии. Необратимой электропорации (IRE) — это метод-термальная абляция, что вызывает гибель клеток опухоли без разрушения прилегающих коллагеновых структур, таким образом позволяя процедуры должны быть выполнены в очень близко к кровеносных сосудов опухоли. В отличие от методов тепловой абляции IRE приводит к гибели клеток постепенно apoptotic, наряду с непосредственной абляции индуцированной некроза и в настоящее время клинических используется для отдельных больных местнораспространенным ПК. Абляционного непромысловых конкретные процедуры как гнев может вызвать множество ответов в микроокружения опухоли. Несколько исследований были рассмотрены последствия IRE на рост опухоли в других типов опухолей, но ни одна были сосредоточены на ПК. Мы разработали сингенных мыши модель компьютера, в котором подкожно (SQ) и ортотопическая опухоли может быть успешно обращались с IRE в высоко контролируемых условиях, содействия различные процедуры post продольных исследований. Это животное модель служит надежной системы для изучения последствий IRE и путей улучшения клинической эффективности IRE.

Мы следовали процедуре описано выше и созданный опухоли кв.М на 5-6 неделе старых мышей C57BL/6 дикого типа прививанным с 1 x 106 клеток с 50% BMM. Когда размер опухоли достиг 5-6 мм в диаметре, несколько мышей были умерщвлены, их опухоли были подакцизным, имплантированных orthot...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Модель мышь сингенных рака поджелудочной железы для изучения последствий необратимой электропорации

Необратимой электропорации (IRE) является не термальная абляция метод, используемый для лечения местнораспространенного рака поджелудочной железы. Будучи относительно новой техники, плохо понимают последствия IRE на рост опухоли. Мы разработали модель сингенных мышь, которая облегчает изучение последствий IRE на рак поджелудочной железы.

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

The overall goal of this model is to study the effects of irreversible electroporation or IRE, on pancreatic cancer in immunocompetent mice. This model can help answer many key questions regarding the role of IRE in pancreatic cancer. Such as, how does IRE affect the local tumor microenvironment?The main advantage of this model is that it facilitate accurate tumor growth assessment in an immunocompetent system, without requiring knockout or mutant mouse models. This method can provide insight into the effects of IRE on the immune system, in an immunocompetent mouse model of pancreatic cancer. For subcutaneous tumor induction, first, shave the injection site on an anesthetized six-week old, male, C57 black six mouse, and use an alcohol swab to clean the site two times.Next, load a cold one-milliliter syringe with one to two times ten to the seven cells per milliliter and 250 microliters of basement membrane matrix. Attach a 25-gauge needle to the syringe, and load the needle with the tumor cell suspension. Press and retract the plunger a few times to remove any air bubbles.Carefully insert the needle under the skin of the injection site, at a 30 degree angle. With the needle parallel to the body, slowly inject 50 microliters of the tumor cells. After 10 seconds, slowly withdraw the needle, keeping it parallel without any sideways movement, and gently clean the injection site with an alcohol swab, before returning the mouse to its cage.When the tumor reaches five to seven millimeters, use sterile forceps and micro scissors to excise the subcutaneous tumor, under sterile conditions in a biosafety level two hood, taking care not to puncture the peritoneal cavity. Immediately wash the excised tumor, two times, in sterile PBS. And use sterile scalpels to mince the tumor into one to two cubed millimeter pieces.Then, transfer the tumor pieces into a Petri dish, containing cold, sterile DMEM basal medium on ice. To implant the tumor fragments, after confirming a lack of response to toe pinch, apply ointment to the anesthetized recipient animal's eyes, and place the mouse on its right side, so that the left side of the abdomen is exposed. Remove the abdominal hair with depilatory cream, and remove the cream with gauze.After disinfecting the exposed skin with three sequential 10%povidone plus iodine and alcohol wipes, use a sterile scalpel to make a 1.5 centimeter incision in the skin, one centimeter to the left of the midline, below the rib cage, and slightly medial to the spleen. Gently externalize the spleen with flat-tipped forceps and a sterile cotton applicator, and use the forceps to laterally retract the tail of the pancreas, at the bottom of the spleen. Using sterile forceps, grasp one finely-minced tumor piece, and pass a fine 6-O sterile suturing needle through the piece.Insert the needle containing tumor fragment into the tail of the pancreas, passing the suture slowly through the tissue. Take care to avoid contact between the tumor and the abdominal wall musculature and peritoneum, to prevent tumor seeding. When the tumor fragment has been secured, completely remove the needle from the tissue, and keep the organs completely externalized, for an additional 60 seconds, while inspecting for any signs of hemorrhage.If no bleeding is observed, use blunt forceps, or a cotton tip applicator, to gently return the spleen, pancreas, and tumor to the abdominal cavity. Before the tumor reaches six millimeters in diameter, place the anesthetized animal on its right side to allow access to the tumor, and use clippers and an alcohol swab to clean the tumor site. Using forceps, elevate the skin directly under the tumor, and insert two needle array electrodes through the skin, parallel to the body, to bracket the tumor, taking care that the electrodes do not penetrate the peritoneal cavity.Set the electroporator to deliver 100 microsecond pulses at a one hertz frequency, at 1500 volts per centimeter, for a total of 150 pulses, and use the foot pedal to deliver the pulses, separating each set of 10 pulses by 10 seconds, to allow heat dissipation between each set of pulses. As muscle twitching occurs during the IRE delivery, and is more pronounced during the initial set of pulses, ensure that the electrodes are still in the desired location, and that the animal is still sedated after each set of pulses. After no more than 200 seconds of dosing, remove the electrodes and record the actual voltage delivered, as displayed on the electroporator.Then, return the mouse to its cage. For IRE of an orthotopic tumor, eight to 10 days post tumor implantation, use blunt-nosed forceps to externalize the tumor with the forceps, and tightly capture the tumor with the platinum electrodes of the Tweezertrode, deliver the electroporation pulses, as just demonstrated, keeping the tumor externalized for the last set of pulses, for at least 60 seconds, to monitor for any signs of hemorrhage. Then, return the tumor to the abdominal cavity and close the incision, as demonstrated, monitoring the animal until it has fully recovered.In this representative experiment, subcutaneous tumors, in nearly 50%of the mice, regressed completely after 150 IRE pulses, with only minor regression after 75 pulses. Histological analysis of the tumor tissue, one week post IRE, revealed large regions of central tumor necrosis, that were not observed in control, untreated tumors, and that were flanked by live tumor tissue, in cases of incomplete tumor regression. Monitoring implanted orthotopic tumors growth rates revealed a consistent tumor growth over time in recipient animals, that could also be disrupted by IRE, demonstrating the ability of this model to simulate the effects of IRE, in an immunocompetent mouse model.Once mastered, this technique can be completed in 15 minutes per mouse, if it is performed properly. While attempting this procedure, it is important to remember to keep the tumor size within the working distance of the IRE electrodes available, as larger tumors will produce inconsistent responses due to incomplete ablation. Other treatment approaches, such as radiation or chemotherapies, can also be used to answer additional questions about whether combining treatments can improve tumor responses to IRE.After watching this video, you should have a good understanding of how to establish subcutaneous and orthotopic pancreatic cancers in mice, and how to perform IRE on these tumors.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Флуоресцентные Ортотопическая Мышь Модель панкреатического рака

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 РАК-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ мышь в качестве модели для изучения рака кахексия

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

Метод для определения последствий экологических обогащения на биоразнообразие Микрофлора толстой кишки в мышиной модели опухоли толстой кишки

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Биолюминесцентных и флуоресцентный ортотопическая сингенных мышиных модель андроген зависимых и кастрация стойкие рака простаты

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Иммунофенотипирование ортотопическая Homograft (сингенных) из мышиных первичной КЗК аденокарциномы поджелудочной железы протоковой подачей Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Ортотопическая трансплантация клеток аденокарциномы сингенных легкого учиться выражение PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Мышь сингенных B-клеточной лимфомы модель для предварительно клинической оценки CD19 автомобилей Т-клеток

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ультразвуковая ортотопическая имплантация мурин поджелудочной железы Ductal Аденокарцинома

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

Ортотопическая резекционная мышиная модель рака поджелудочной железы

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...