Name: isolation and in vitro culture of murine and human alveolar macrophages
Uploaded: 2018-04-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages at JoVE.com

हम पांडुलिपि संपादन के साथ सहायता के लिए क्लेयर Prendergast धन्यवाद । DKN Flinn फाउंडेशन से एक अनुसंधान अनुदान (#2095) द्वारा समर्थित है और TM स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों (R01HL056643 और R01HL092514) से अनुदान द्वारा समर्थित है । DKN विकसित तरीकों, अध्ययन डिजाइन और पांडुलिपि लिखा था; ओम पशु अध्ययन और नैदानिक नमूना खरीद के साथ सहायता प्रदान की; SB प्रवाह cytometric विश्लेषण और सेल छँटाई के साथ सहायता प्रदान की; टीएम ने पढ़ाई की निगरानी की और पांडुलिपि की समीक्षा की ।

यहां वर्णित सभी तरीकों को संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) और सेंट जोसेफ अस्पताल और चिकित्सा केंद्र में संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
1. Murine Bronchoalveolar लेवेज (BAL) ?...

<ol>
	<li>Westphalen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sessile+alveolar+macrophages+communicate+with+alveolar+epithelium+to+modulate+immunity.">Sessile alveolar macrophages communicate with alveolar epithelium to modulate immunity.</a> Nature. 506 (7489), 503-506 (2014).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+develop+from+fetal+monocytes+that+differentiate+into+long-lived+cells+in+the+first+week+of+life+via+GM-CSF.">Alveolar macrophages develop from fetal monocytes that differentiate into long-lived cells in the first week of life via GM-CSF.</a> J Exp Med. 210 (10), 1977-1992 (2013).</li><li>Cardani, A., Boulton, A., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+prevent+lethal+influenza+pneumonia+by+inhibiting+infection+of+type-1+alveolar+epithelial+cells.">Alveolar macrophages prevent lethal influenza pneumonia by inhibiting infection of type-1 alveolar epithelial cells.</a> PLoS Pathog. 13 (1), e1006140 (2017).</li><li>Ghoneim, H. E., Thomas, P. G., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+alveolar+macrophages+during+influenza+infection+facilitates+bacterial+superinfections.">Depletion of alveolar macrophages during influenza infection facilitates bacterial superinfections.</a> J Immunol. 191 (3), 1250-1259 (2013).</li><li>MacLean, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequestration+of+inhaled+particulate+antigens+by+lung+phagocytes.+A+mechanism+for+the+effective+inhibition+of+pulmonary+cell-mediated+immunity.">Sequestration of inhaled particulate antigens by lung phagocytes. A mechanism for the effective inhibition of pulmonary cell-mediated immunity.</a> Am J Pathol. 148 (2), 657-666 (1996).</li><li>Nakamura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+alveolar+macrophages+by+clodronate-liposomes+aggravates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+lung.">Depletion of alveolar macrophages by clodronate-liposomes aggravates ischemia-reperfusion injury of the lung.</a> J Heart Lung Transplant. 24 (1), 38-45 (2005).</li><li>Schneider, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+are+essential+for+protection+from+respiratory+failure+and+associated+morbidity+following+influenza+virus+infection.">Alveolar macrophages are essential for protection from respiratory failure and associated morbidity following influenza virus infection.</a> PLoS Pathog. 10 (4), e1004053 (2014).</li><li>Pribul, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+are+a+major+determinant+of+early+responses+to+viral+lung+infection+but+do+not+influence+subsequent+disease+development.">Alveolar macrophages are a major determinant of early responses to viral lung infection but do not influence subsequent disease development.</a> J Virol. 82 (9), 4441-4448 (2008).</li><li>Macdonald, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+alveolar+macrophages+for+sustained+mucosal+T-cell+recall+confers+long-term+protection+to+mice+against+lethal+influenza+challenge+without+clinical+disease.">Harnessing alveolar macrophages for sustained mucosal T-cell recall confers long-term protection to mice against lethal influenza challenge without clinical disease.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 89-100 (2014).</li><li>Benoit, A., Huang, Y., Proctor, J., Rowden, G., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alveolar+macrophage+depletion+on+liposomal+vaccine+protection+against+respiratory+syncytial+virus+(RSV).">Effects of alveolar macrophage depletion on liposomal vaccine protection against respiratory syncytial virus (RSV).</a> Clin Exp Immunol. 145 (1), 147-154 (2006).</li><li>Nayak, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+persistence+of+donor+alveolar+macrophages+in+human+lung+transplant+recipients+that+influences+donor+specific+immune+responses.">Long-term persistence of donor alveolar macrophages in human lung transplant recipients that influences donor specific immune responses.</a> Am J Transplant. 16 (8), 2300-2311 (2016).</li><li>Sekine, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+passenger+leukocytes+in+allograft+rejection:+effect+of+depletion+of+donor+alveolar+macrophages+on+the+local+production+of+TNF-alpha,+T+helper+1/T+helper+2+cytokines,+IgG+subclasses,+and+pathology+in+a+rat+model+of+lung+transplantation.">Role of passenger leukocytes in allograft rejection: effect of depletion of donor alveolar macrophages on the local production of TNF-alpha, T helper 1/T helper 2 cytokines, IgG subclasses, and pathology in a rat model of lung transplantation.</a> J Immunol. 159 (8), 4084-4093 (1997).</li><li>Borie, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+alveolar+proteinosis.">Pulmonary alveolar proteinosis.</a> Eur Respir Rev. 20 (120), 98-107 (2011).</li><li>Greenhill, S. R., Kotton, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+alveolar+proteinosis:+a+bench-to-bedside+story+of+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+dysfunction.">Pulmonary alveolar proteinosis: a bench-to-bedside story of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor dysfunction.</a> Chest. 136 (2), 571-577 (2009).</li><li>Happle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+transplantation+of+macrophage+progenitors+as+effective+and+long-lasting+therapy+for+hereditary+pulmonary+alveolar+proteinosis.">Pulmonary transplantation of macrophage progenitors as effective and long-lasting therapy for hereditary pulmonary alveolar proteinosis.</a> Sci Transl Med. 6 (250), 250ra113 (2014).</li><li>Suzuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+macrophage+transplantation+therapy.">Pulmonary macrophage transplantation therapy.</a> Nature. 514 (7523), 450-454 (2014).</li><li>Hashimoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophages+self-maintain+locally+throughout+adult+life+with+minimal+contribution+from+circulating+monocytes.">Tissue-resident macrophages self-maintain locally throughout adult life with minimal contribution from circulating monocytes.</a> Immunity. 38 (4), 792-804 (2013).</li><li>Murphy, J., Summer, R., Wilson, A. A., Kotton, D. N., Fine, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prolonged+life-span+of+alveolar+macrophages.">The prolonged life-span of alveolar macrophages.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 38 (4), 380-385 (2008).</li><li>Maus, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+alveolar+macrophages+are+replaced+by+recruited+monocytes+in+response+to+endotoxin-induced+lung+inflammation.">Resident alveolar macrophages are replaced by recruited monocytes in response to endotoxin-induced lung inflammation.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 35 (2), 227-235 (2006).</li><li>Perdiguero, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophages+originate+from+yolk-sac-derived+erythro-myeloid+progenitors.">Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors.</a> Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).</li><li>Bitterman, P. B., Saltzman, L. E., Adelberg, S., Ferrans, V. J., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophage+replication.+One+mechanism+for+the+expansion+of+the+mononuclear+phagocyte+population+in+the+chronically+inflamed+lung.">Alveolar macrophage replication. One mechanism for the expansion of the mononuclear phagocyte population in the chronically inflamed lung.</a> J Clin Invest. 74 (2), 460-469 (1984).</li><li>Misharin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte-derived+alveolar+macrophages+drive+lung+fibrosis+and+persist+in+the+lung+over+the+life+span.">Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span.</a> J Exp Med. , (2017).</li><li>Zheng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+pulmonary+intravascular+nonclassical+monocytes+recruit+recipient+neutrophils+and+mediate+primary+lung+allograft+dysfunction.">Donor pulmonary intravascular nonclassical monocytes recruit recipient neutrophils and mediate primary lung allograft dysfunction.</a> Sci Transl Med. 9 (394), (2017).</li><li>Nayak, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zbtb7a+induction+in+alveolar+macrophages+is+implicated+in+anti-HLA-mediated+lung+allograft+rejection.">Zbtb7a induction in alveolar macrophages is implicated in anti-HLA-mediated lung allograft rejection.</a> Sci Transl Med. 9 (398), (2017).</li><li>Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+macrophages+and+dendritic+cell+subsets+in+the+mouse+lung.">Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (4), 503-510 (2013).</li><li>Kopf, M., Schneider, C., Nobs, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+and+function+of+lung-resident+macrophages+and+dendritic+cells.">The development and function of lung-resident macrophages and dendritic cells.</a> Nat Immunol. 16 (1), 36-44 (2015).</li><li>Eguiluz-Gracia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+persistence+of+human+donor+alveolar+macrophages+in+lung+transplant+recipients.">Long-term persistence of human donor alveolar macrophages in lung transplant recipients.</a> Thorax. 71 (11), 1006-1011 (2016).</li><li>Yu, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+myeloid+cells+in+human+blood,+bronchoalveolar+lavage,+and+lung+tissues.">Flow cytometric analysis of myeloid cells in human blood, bronchoalveolar lavage, and lung tissues.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. , (2015).</li></ol>

एंस के लंबे समय से रह रहे है फेफड़े के निवासी मैक्रोफेज है कि जंम के समय फेफड़ों आबाद और पूरे जीवन पर स्थाई26अवधि । फुफ्फुसीय फिजियोलॉजी7 और पैथोलॉजी12 में उनकी भूमिकाओं और फुफ?...

फेफड़ों microenvironment एक विस्तृत हवा नाली और vasculature के साथ एक विशिष्ट जटिल पारिस्थितिकी तंत्र है । सांस हवा श्वासनली के माध्यम से यात्रा और ब्रांकाई और ब्रांकिओल्स की कई शाखाओं के माध्यम से alveoli, जहां रक्त हवा गैस विनिमय होता है तक पहुंचने से पहले । वातावरण के साथ सीधी बातचीत के कारण, श्वसन सतह हवाई कणों और प्रदूषकों के संभावित हानिकारक प्रभावों से सुरक्षा की आवश्यकता है । शारीरिक, रासायनिक, और immunologic अवरोधों की एक संख्या फेफड़ों की रक्षा । विशेष रूप से, श्वसन सतह पर फ़ैगोसाइट की तैनाती एक महत्वपूर्ण पहली लाइन रक्षा प्रणाली का कार्य करता है । वायुकोशीय मैक्रोफेज (एंस) फेफड़ों के निवासी फ़ैगोसाइट का एक प्रकार हैं, और वे फेफड़ों मैक्रोफेज पूल के विशाल बहुमत बनाते हैं । के रूप में उनके नाम का सुझाव है, एंस के मुख्य रूप से वायुकोशीय लुमेन के लिए स्थानीयकृत रहे है और sessile कोशिकाओं है कि लगातार परिवेश वातावरण नमूना और वायुकोशीय उपकला1के साथ संवाद के रूप में होते हैं । स्थिर राज्य फेफड़ों में, वायुकोशीय अंतरिक्ष में फ़ैगोसाइट के ९५% से अधिक एंस के2, जिनकी संरचना सूजन, संक्रमण, या प्रदूषकों के लिए पुरानी जोखिम के कारण बदल सकते हैं ।
एंस के कार्यों की एक विस्तृत श्रृंखला है कि फेफड़ों के लिए स्थानीय हो सकता है में भाग लेने के लिए और/ उदाहरण के लिए, एंस के विकास में आवश्यक है और फेफड़ों के इष्टतम कार्य; प्रतिरक्षा निगरानी; और सेलुलर मलबे की मंजूरी, रोगजनकों पर हमला, और सांस कणों3,4,5,6,7। एम्स के लक्षित घट श्वसन वायरस और बैक्टीरिया की मंजूरी ख़राब करने के लिए जाना जाता है4,8. फ़ैगोसाइट और फुफ्फुसीय homeostasis के एक पहली लाइन रक्षक के रूप में उनकी भूमिका के अलावा, एंस के रूप में कार्य करने के लिए जाना जाता है प्रतिजन-में पेश कोशिकाओं टी सेल उन्मुक्ति9, potentiating intranasal वैक्सीन की प्रभावकारिता10 और फेफड़े प्रत्यारोपण11,12के बाद फेफड़ों प्रतिबंधित उन्मुक्तिकोप्रभावित. AM समारोह में कमी फुफ्फुसीय वायुकोशीय proteinosis (पीएपी), एक आनुवंशिक उत्परिवर्तन, द्रोह या संक्रमण है कि फुफ्फुसीय सर्फेक्टेंट13,14की मंजूरी बाधित से उत्पंन हालत से जोड़ा गया है । एम्स की रोपाई अब पीएपी 15,16के इलाज के लिए चिकित्सीय दृष्टिकोण के तौर पर तलाशी जा रही है ।
एंस के लिए embryogenesis के दौरान उत्पंन और जीवन भर फेफड़ों में ल्यूकोसाइट्स2,17परिसंचारी द्वारा प्रतिस्थापित किया जा रहा बिना बनाए रखने के लिए जाना जाता है । हालांकि, am टर्नओवर समस्थिति फेफड़ों में undetectable है, am टर्नओवर का स्तर अलग इंफ्लूएंजा वायरस4द्वारा संक्रमण सहित कुछ नैदानिक स्थितियों में सूचित किया गया है, myeloablative विकिरण18, endotoxin के लिए जोखिम 19, और वृद्धावस्था20। एंस के एक कम ग्रेड प्रसार17,21के माध्यम से स्वयं को नवीनीकृत माना जाता है, लेकिन कुछ हाल के अध्ययनों का दावा है कि monocytes intravascular फेफड़ों की आबादी को जंम दे सकते है मैक्रोफेज22,23 के तहत प्रयोगात्मक स्थितियों, लेकिन इन नए परिवर्तित फुफ्फुसीय मैक्रोफेज की कार्यक्षमता अभी तक फेफड़ों के रोगों में परिभाषित किया जाना है । इसके अलावा, AM सक्रियकरण के संदर्भ में उत्तेजना की दहलीज को समझना एक संभावित दिलचस्प क्षेत्र है, के रूप में फेफड़ों के लिए भड़काऊ संकेतों और immunoregulatory मशीनरी के बीच एक संतुलन बनाए रखने का प्रयास करता है ।
शारीरिक या रोग परिवर्तन है कि प्रतिरक्षा विनियमन के नुकसान के लिए नेतृत्व के लिए विभिंन नैदानिक सेटिंग्स में मूल्यांकन महत्वपूर्ण है (जैसे, श्वसन संक्रमण, भड़काऊ फेफड़ों के रोग और fibrotic फेफड़ों के रोग) । फिर भी, एम्स तेजी से संकेतक या फेफड़े के स्वास्थ्य के11,24के निर्धारकों के रूप में मांयता प्राप्त कर रहे हैं । वर्तमान में, कोई एकीकृत प्रोटोकॉल संचयन, निस्र्पक, और/या मनुष्यों और नैदानिक murine मॉडल से एंस को बनाए रखने के लिए उपलब्ध हैं । am पुरोगामी और phenotypes पर एक आम सहमति की कमी है, और एक विस्तृत पद्धति के अभाव फुफ्फुसीय स्वास्थ्य और रोग में हूं की भूमिका (ओं) को समझने में प्रमुख अंधी गली गया था । निंनलिखित प्रोटोकॉल एक निश्चित पहचान, अलगाव प्रदान करता है, और इन विट्रो संस्कृति रणनीति है कि बहुत व्यवहार कर रहा हूं की समझ अग्रिम होगा और सुविधाजनक बनाने के नैदानिक और चिकित्सीय अध्ययन लक्षित कर रहा हूं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="910">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Non-enzymatic cell dissociating solution</td>
			<td style="width:223px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:220px;">C5789</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td style="width:223px;">Dechra</td>
			<td>620300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">22G Catheter&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Terumo Medical Products</td>
			<td>SR-OX2225CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Non-absorbable silk braided suture&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Kent Scientific</td>
			<td>SUT-15-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td style="width:220px;">21-031-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Fc block&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lysis buffer (PureLink RNA Kit)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>12183018A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">b-Mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>M6250&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACSAria II cell sorter&#160;</td>
			<td style="width:223px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:220px;">644832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine&#160; (Ketathesia)</td>
			<td style="width:223px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:220px;">56344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine&#160; (AnaSed)</td>
			<td style="width:223px;">Akorn</td>
			<td style="width:220px;">139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td style="width:220px;">10-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td style="width:220px;">10-017-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Liberase TL&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:220px;">5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase I</td>
			<td style="width:223px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>AMPD1-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100&#956;m cell strainer&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Human Fc block</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">EDTA</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Trypan Blue Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">HEPES</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>25-060-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">L-929 cell line</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>ATCC,&#160;CCL-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>25-000-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T25 Tissue culture flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>156367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60 mm culture dish&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Millipore-Sigma</td>
			<td>CLS3261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">15 mL Conical tube&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td style="width:220px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">50 mL Conical tube&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSRFortessa cell analyzer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>657669</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">FlowJo</td>
			<td style="width:223px;">FlowJo</td>
			<td>v10.4</td>
			<td>Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD45 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>147709</td>
			<td>Clone I3/2.3, FITC conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD11b (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>101228</td>
			<td>Clone M1/70, PerCP/Cy5.5 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD11c (Mouse)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565452</td>
			<td>Clone N418, BV 421 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-I-Ab (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>116420</td>
			<td>Clone AF6-120.1, PE/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-Siglec-F (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">BD Biosciences</td>
			<td>562757</td>
			<td>Clone E50-2440, PE-CF594 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-Siglec-H (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>129605</td>
			<td>Clone 551, PE conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-F4/80 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>123118</td>
			<td>Clone BM8, APC/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-Ly-6C (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>128035</td>
			<td>Clone HK1.4, BV605 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD64 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>139311</td>
			<td>Clone X54-5/7.1, BV711 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD24 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">BD Biosciences</td>
			<td>563115</td>
			<td>Clone M1/69, BV510 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD103 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">BD Biosciences</td>
			<td>745305</td>
			<td>Clone OX-62, BV650 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD317 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>127015</td>
			<td>Clone 927, APC conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CXCR1 (Mouse)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>149029</td>
			<td>Clone SA011F11, BV785 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD45 (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>304017</td>
			<td>Clone HI30, AF488 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD11b (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>101216</td>
			<td>Clone M1/70, PE/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-HLA-DR (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>307618</td>
			<td>Clone L243, APC/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD169 (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>346008</td>
			<td>Clone 7-239, APC conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD206 (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>321106</td>
			<td>Clone 15-2, PE conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:301px;">Anti-CD163 (Human)</td>
			<td style="width:223px;">Biolegend</td>
			<td>333612</td>
			<td>Clone GHI/61, BV421 conjugated</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and in vitro culture of murine and human alveolar macrophages

वायुकोशीय मैक्रोफेज के जंम के पूर्व मूल के टर्मिनल विभेदित, फेफड़े के निवासी मैक्रोफेज हैं । वायुकोशीय मैक्रोफेज उनके लंबे जीवन में अद्वितीय है और फेफड़ों के विकास और कार्य में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका है, साथ ही साथ अपने फेफड़ों में संक्रमण और सूजन के लिए स्थानीय प्रतिक्रियाओं । तिथि करने के लिए, पहचान, अलगाव, और मनुष्यों और चूहों से वायुकोशीय मैक्रोफेज की हैंडलिंग के लिए कोई एकीकृत विधि मौजूद है । इस तरह के एक विधि विभिंन प्रयोगात्मक सेटिंग्स में इन महत्वपूर्ण जंमजात प्रतिरक्षा कोशिकाओं पर अध्ययन के लिए आवश्यक है । विधि यहां वर्णित है, जो आसानी से किसी भी प्रयोगशाला द्वारा अपनाया जा सकता है, bronchoalveolar लेवेज द्रव से या फेफड़े के ऊतकों से कटाई वायुकोशीय मैक्रोफेज के लिए एक सरलीकृत दृष्टिकोण है और उंहें इन विट्रो मेंबनाए रखने । क्योंकि वायुकोशीय मैक्रोफेज मुख्य रूप से alveoli में अनुयाई कोशिकाओं के रूप में होते हैं, इस पद्धति का ध्यान उंहें कटाई और पहचान से पहले विघटित पर है । फेफड़ों एक उच्च संवहनी अंग है, और माइलॉयड और लसीकावत् मूल के विभिन्न सेल प्रकार निवास, बातचीत, और फेफड़ों microenvironment से प्रभावित हैं । सतह मार्करों के सेट का उपयोग करके यहां वर्णित है, शोधकर्ताओं को आसानी से और स्पष्ट रूप से अंय ल्यूकोसाइट्स से वायुकोशीय मैक्रोफेज भेद कर सकते हैं, और उंहें बहाव अनुप्रयोगों के लिए शुद्ध । इस के साथ विकसित संस्कृति विधि दोनों मानव और माउस वायुकोशीय मैक्रोफेज के लिए इन विट्रो विकास में समर्थन करता है, और सेलुलर और आणविक अध्ययन के साथ संगत है ।

माउस एंस की पहचान करने के लिए प्रवाह cytometric दृष्टिकोण चित्रा 1में दिखाया गया है । यह अंय फेफड़े निवासी या फेफड़ों में घुसपैठ फ़ैगोसाइट से अलग एम्स में आवश्यक सतह मार्करों का एक ंयू?...

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Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

अलगाव और इन विट्रो संस्कृति Murine और मानव वायुकोशीय मैक्रोफेज

इस संचार के अलगाव और प्रयोगात्मक प्रयोजनों के लिए मनुष्यों और murine मॉडल से वायुकोशीय मैक्रोफेज की संस्कृति के लिए तरीके का वर्णन करता है ।

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

मानव टी लिम्फोसाइट अलगाव, और प्रवासन की संस्कृति विश्लेषण इन विट्रो में</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

प्रवाह कार्यात्मक और आण्विक अध्ययन के लिए प्राथमिक murine प्रकार द्वितीय वायुकोशीय उपकला कोशिकाओं के cytometric अलगाव

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Isolation of Human Monocytes by Double Gradient Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags

मानव डबल ढाल centrifugation द्वारा Monocytes और Teflon लेपित सेल संस्कृति बैग में मैक्रोफेज के लिए उनके भेदभाव का अलगाव

Human macrophages are involved in a plethora of pathologic processes ranging from infectious diseases to cancer. Thus they pose a valuable tool to ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा अलग वायुकोशीय मैक्रोफेज की एंटी फंगल गतिविधि का आकलन

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Murine पेरिटोनियल मैक्रोफेज के अलगाव टोल की तरह रिसेप्टर्स उत्तेजना पर जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण बाहर ले जाने के लिए

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

जनरेशन और जीएम-सीएसएफ की पहचान व्युत्पन्न वायुकोशीय तरह मैक्रोफेज और वृक्ष के समान माउस अस्थि मज्जा से कोशिकाओं

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

बृहतभक्षककोशिका कॉलोनी उत्तेजक कारक विभेदित मानव monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज की संस्कृति

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

बढ़ाता मानव Monocyte Chemotaxis इन विट्रो और Murine लिम्फोसाइट ्े में Vivo

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...