Name: partial lobular hepatectomy: a surgical model for morphologic liver regeneration
Uploaded: 2018-05-31T13:30:00
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우리 감사 피 추 H & E와 조직학; C. 왕 및 유용한 토론에 대 한 A. 맥. 연구는 암 연구에 대 한 버지니아와 D. K. 루드비히 기금에서 자금을 통해 지원 되었다 국가 심 혼, 폐, 혈액 연구소 (R01HL058770 및 U01HL099999); 그리고 캘리포니아 연구소의 재생 의학 (RC1 00354) 보조금 I.W. 승 하는 인간 프론티어 과학 프로그램 경력 개발 상 (CDA00017), 독일 연구 재단 (RI 2787/1), Siebel 줄기 세포 연구소에 의해 지원 되었다 그리고 토마스 고 스테이 시 Siebel 재단 (1119368-104-GHBJI). J.M.T.는 새로운 미국인을 위한 NIH (T32GM007365), 국가 연구 봉사 상 (1F30DK108561), 그리고 바울과 데이지 소로 스 장학금에 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 평가 및 인증의 실험실 동물 케어 인터내셔널 (AAALAC) 및 스탠포드 대학 행정 패널 실험실 동물에 대 한 협회에 의해 명시 된 지침에 따라 실시 했다 케어 (APLAC), (프로토콜 번호 #10266) 미국, 또는 유럽 동물 복지 행위, 지침 2010/63/유럽에서. 프로토콜과 정부 바바리아, 독일의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 더 허가 받았다: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. 동물 준?...

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Behav. 2, 241-244 (1974).</li><li>Smotherman, W. P., Bell, R. W., Starzec, J., Elias, J., Zachman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+responses+to+infant+vocalizations+and+olfactory+cues+in+rats+and+mice.">Maternal responses to infant vocalizations and olfactory cues in rats and mice.</a> Behav. Biol. 12, 55-66 (1974).</li></ol>

급성 간 상해는 전통적으로 화학 (아 세트 아미노 펜, 에탄올, 사염화 탄소), 또는 외과 모델 (70% 부분 hepatectomy)를 사용 하 여 연구 되었습니다. 재생 반응 후 70% 부분 hepatectomy 글로벌 hepatocyte 비 그리고 세포 분열4,5의 여러 라운드 특징 되었습니다. 그러나 출혈을 중지 하,이 모델은 제한으로 주요 혈관 재생에 대 한 비정상적인 환경을 떠나 출혈 해야 합?...

기관를 다시 생성 하거나 복원 하는 형태와 기능, 능력 주로 진화 시간이 지남에 손실 될 생각 되었다. 급성 화학 또는 물리적 손상 후 성인 포유류 간의 재생 잠재력 비 대의 파도 세포 분열, 작동 하지만에서 결과의 몇 라운드에서 발생 하는 모든 나머지 hepatocytes의 동원을 포함 발견 되었습니다. 구조적으로 다른 장기1,2,3,,45. 최근, 연구 특성화 생활6,,78의 첫 번째 주 내에서 부상 신생아 포유류 장기의 재생 반응 하기 시작 했다. 이러한 연구 신생아 개발 하는 동안 부상 때 특정 포유류 장기 보상 성장 또는 섬유 증7,8대신 형태학 중생과 반응으로 나타났습니다.
최근 연구 글로벌 구조와 기능 둘 다의 재생 초기 신생아 기간6,,78중 발생 하는 것으로 나타났습니다. 화학 상해 또는 에탄올9,,1011, 아 세트 아미노 펜12,,1314,15의 설립된 간 부상 프로토콜 포함 , 사염화 탄소16,,1718,19, 70% 부분 hepatectomy4,,2021또는 왼쪽의 제거 및 중간로 브입니다. 화학 관리 hepatocyte 세포 죽음에 이르게 되지만 종종 마이크로 및 매크로 구조 그대로. Morphologic 재생 이러한 맥락에서로 전체 간 건축은 말소 되지 쉽게 공부 될 수 없습니다. 70% 부분 hepatectomy 봉합 결 찰, 주요 혈관의 출혈을 멈추게 하는 데 필요한는 포함 되지만 맥 관 구조의 영구 중단 하면서 비 생리 환경. 또한,이 방법은 성인 설치류에만 사용 되 고 신생아의 응용 기술적으로 매우 어렵습니다. 이 염두에서에 두고, 우리 개발 왼쪽된 엽의 꼭대기의 20-30%는 신생아 P0 마우스에서 제거 하는 방법 (그림 1A-1B). 이 메서드와 보수적인 수술, 최소 침 습, 아니라 기술적으로 도전적인, 총 체 맥 관 구조, 발생 하는 재생을 위한 공간을 떠나 결 찰 하지 않고 형태학의 손실에 지도. 아래에서 설명 하는 결과 단계별 프로토콜 출생 후 생활의 초기 단계에서 포유류 신생아 재생을 공부 하기 위하여 부분 lobular hepatectomy 신생아 쥐에 수행 하기 위해 어떤 연구원에 대 한 수 있습니다. 이 방법은 또한 있다 재생 의학 및 줄기 세포 생물학, 비교 연구 분명 응용 프로그램으로 생활의 나중 단계 동안에 사용할 수 있습니다.
가장 일반적인 급성 간 상해 연구는 화학적으로 유도 된 손상, 성인 간 절단, 또는 70% 부분 hepatectomy. 화학 손상 자주 아 세트 아미노 펜, 사염화 탄소, 또는 에탄올, 정 맥, 복 또는 구두 관리를 포함 하 고 비교적 간단 하 고 비-침략 적 부상 모델 이다. 이전, 화학 손상 결과를 hepatocyte 세포 죽음, 하지만 종종 잎 기질 및 실질 구조 그대로, morphologic 중생에 대 한 주장을 하 고 어려운 논의 했다. 화학 손상 종종 간장 혈관에 센터 공부 사이트와 셀 관련 부상, 유용한 기술 하기가 하지만 또한 어려운가, 전체 기관 수준에서 다른 인구는 선박에서 놓일 수 고를 수 있습니다. 재생에 기여 한다. 이러한 제한에도 불구 하 고 화학 손상에 유용 하 고 매우 순수 관련 부상 모델 아직도 남아 있다.
성인 70% 부분 hepatectomy 결 찰 간 맥 관 구조에 따라 왼쪽과 중간 엽의 제거를 포함. 응답 hepatectomy로 잘 특징 되었습니다: 절단된 간 게시물 70% 부분 hepatectomy 나머지 오른쪽 고 꼬리가 돌출부의 hepatocytes로 원래 손상된 엽의 조잡 한 다른 아키텍처를 개발 하는 14 일 비 대 및 세포 분열4,5의 몇 라운드를 받 다. 이 분실 된 질량와 기능, 하지만 두 절단된 돌출부를 다시 생성 실패 하 고 따라서 총 형태를 대체 하지 않습니다. 그 결과, 70% 부분 hepatectomy 부상 응답 제한 재생으로 보상 성장 메커니즘 연구 유용 합니다.
여기, 우리는 완전히 신생아 부분 lobular hepatectomy에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 절차에는 적절 한 동물 선택 및 준비, 수술 필드 준비, 수술, 및 복구 포함 한다. 각이 단계 적응과 최적화 프로토콜의 다른 응용 프로그램에 대 한 필요할 수 있습니다.
그러나, 다른 세포 인구와 재생성의 메커니즘 연구, 우리 또한 사용 다양 한 Cre를 은닉 하는 쥐를 포함 하 여 다양 한 유전자 변형 동물, 우리는 광범위 하 게 수행 하 고 야생 유형 C57BL/6J 강아지 (잭 스 000664)에이 프로토콜을 최적화 하 고 CreERT2 transgenes 또는 노크 기능 (잭 스Axin2CreERT2 018867, 및 Sox9CreERT2 잭 스 018829) 무지개 및 mTmG 시스템 (R26VT2/GK3, 같은 형광 기자와 함께 R26 mT/mG) 22 , 23. 우리 발견 다른 마우스 변종에 대 한이 방법론을 변경할 필요가 없습니다 생존 결과 또는 재생 잠재력에 차이가 관찰 했다.
다른 동물 긴장을 사용 하 여, 우리는 또한 4-hydroxy-tamoxifen 등 5-ethynyl-2-deoxyuridine (듀) 작은 분자 치료 신생아 쥐에 부분 lobular hepatectomies 수행. 옥수수 기름은 사망률의 중요 한 원인 발견으로 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)와 에탄올 용 매로 사용 되었다. 우리는 그렇지 않으면 작은 분자의 복 관리 생존 또는 재생 결과 미치지 않았다 것을 발견. 우리는이 프로토콜 중생의 다양 한 측면이 다른 작은 분자와 함께 사용 하기 위해 적용할 것 이다 예측.
신생아 마우스 수술 기술적으로 도전적 일 수 있다 고 동물 처리 및 해 부 현미경에서 특별 한 전문성을 요구할 수 있습니다. 축산 전문 산 모 식인 풍습을 방지 해야 하는 수술 하 고 즉각적인 복구 기간 동안.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mother with litter of day 0 neonatal pups (any strain)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surrogate mother and surrogate litter (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Serum (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providine-iodine or equivalent antiseptic solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3mm straight spring micro scissors</td>
			<td>Vannas</td>
			<td>72932-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5SF Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Kelly forceps</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>17-050G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>000771-810-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott Labs</td>
			<td>0044-5260-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>1205S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze, 10.16 x 10.16cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 monocryl sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>MCP489G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;S35839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet-Aid, Plain, 110V</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>4-000-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mettler Toledo NewClassic ME Analytical Balances</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-912-402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Cost Induction Chamber</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SOMNO-0730</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

partial lobular hepatectomy: a surgical model for morphologic liver regeneration

형태학 기관 재생 급성 조직 손실 다음 낮은 척추 동물 중 일반적 이지만 거의 포유류 출생 후 생활에서 관찰 됩니다. 성인 간 재생 70% 부분 hepatectomy 후 남은 엽 대사 활동의 복원 하지만 부상된 엽의 형태와 건축의 영구 손실에 일부 복제 hepatocyte 비 결과. 여기, 우리는 생리 환경 재생에 도움이 되는 신생아에서 새로운 수술 방법 선발. 이 모델 왼쪽된 엽 정점 및 후속 보수적인 관리 처방의 절단을 포함 하 고 주요 간 선박 또는 생리 환경 재생 발생할 수 있습니다 떠나는 화학 상해의 결 찰에 대 한 필요성을 결여 된다. 우리는 자르고 있는 동안 부상된 간 전환 기관 재생에서 보상 성장에 비 대에 의해 청소년 (p 7-14) 쥐에 게이 프로토콜을 확장 합니다. 제시, 짧은 30 분 프로토콜 중생, 포유류에서 그것의 나이 관련 된 감소 및 상 상속 간 줄기 또는 창시자의 특성화의 메커니즘을 연구 하는 프레임 워크를 제공 합니다.

그림 1A ( 그림 1B에서 도식), 신생아 부분 lobular hepatectomy의 일반적인 타임 라인과 재생 관찰 될 때까지 대기 하는 시간의 예상된 길이 자세히 설명 합니다. 왼쪽된 엽의 미묘한 재생 관찰된 7-14 일 게시물 수술 수 있습니다. 전체 재생 56 일 게시물 수술 후에 종종 관찰 되었다. 마우스는 수술 후 생리 이상이의 흔적을 표시 합니다....

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Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

여기, 우리 신생아 (0 일) 쥐에서 왼쪽된 간 엽의 부분 절제 하는 새로운 방법을 제시. 이 새로운 프로토콜은 급성 간 상해 및 신생아 속에서 상해 응답 공부 적합 합니다.

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

겐타 마이신 유도 부상으로 성인 Zebrafish의에서 신장 재생

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

연구

발생학

Deriving Retinal Pigment Epithelium (RPE) from Induced Pluripotent Stem (iPS) Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

Deriving Retinal Pigment Epithelium RPE from Induced Pluripotent Stem iPS Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

배아의 몸의 다른 크기에 의해 유도 다 능성 줄기에서 망막 색소 상피 세포 (RPE)를 도출 (IPS) 세포

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of ...

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

담즙 중심의 간 재생을 연구하는 Zebrafish의에서 간세포 특이 절제

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

Simultaneous Assessment of Cardiomyocyte DNA Synthesis and Ploidy: A Method to Assist Quantification of Cardiomyocyte Regeneration and Turnover

심근 DNA 합성 및 배수성의 동시 평가 : Method는 심근 재생 및 회전율의 정량을 지원합니다

Although it is accepted that the heart has a limited potential to regenerate cardiomyocytes following injury and that low levels of cardiomyocyte turnover ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Zebrafish의에서 에탄올에 의한 섬유 성 간 모델의 개발은 전구 세포 매개 간세포의 재생을 연구하는

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Surgical Ablation Assay for Studying Eye Regeneration in Planarians

수술 절제 분석 플라나리아에 아이 재생을 유학을위한

In the study of adult stem cells and regenerative mechanisms, planarian flatworms are a staple in vivo model system. This is due in large part to their ...

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

화학 절단 및 Planarian Schmidtea 지중해 에 인 두의 재생

Planarians are flatworms that are extremely efficient at regeneration. They owe this ability to a large number of stem cells that can rapidly respond to ...

A Familial Hypercholesterolemia Human Liver Chimeric Mouse Model Using Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocytes

가족성 콜레스테롤 혈 증 인간의 간 공상 마우스 모델을 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포 유래 Hepatocytes

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset ...

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Stentor 에 중생의 연구 방법

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

성인 피부 조직에서 기본 인간의 Keratinocytes를 분리 하는 단순 하 고 효율적인 방법

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...