Name: canalostomy as a surgical approach to local drug delivery into the inner ears of adult and neonatal mice
Uploaded: 2018-05-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Canalostomy As a Surgical Approach to Local Drug Delivery into the Inner Ears of Adult and Neonatal Mice at JoVE.com

이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (보조금 번호 81570912, 81771016, 81100717)에 의해 지원 되었다.

모든 절차와 동물 수술 동물 관리 및 사용 위원회 중국의 자본 의료 대학의의 지침에 따라 실시 했다.
1. 장치 준비
<ol><li>주입 정 (그림 1A)을 하려면 폴 리 이미 드 튜브를 연결 (내부 직경 114.3 µ m, 외경 139.7 µ m, 길이 3 cm) 폴 리 에틸렌 튜브를 (내부 직경 280 μ m, 외경 640 µ m, 길이 40 cm). Superglue를 사용 하 여 적어도 3 개의 응용 프로그램과 함께 연결 인감...

<ol>
	<li>Stachler, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice+guideline:+sudden+hearing+loss.">Clinical practice guideline: sudden hearing loss.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 146 (3 Suppl), S1-S35 (2012).</li><li>Lentz, J. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+and+Atoh1+expression+during+hair+cell+regeneration+in+the+mouse+utricle.">Notch signaling and Atoh1 expression during hair cell regeneration in the mouse utricle.</a> Hear Res. 267 (1-2), 61-70 (2010).</li><li>Pietola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOX-GFP+and+WOX-GFP+lentivirus+vectors+for+inner+ear+gene+transfer.">HOX-GFP and WOX-GFP lentivirus vectors for inner ear gene transfer.</a> Acta Otolaryngol. 128 (6), 613-620 (2008).</li><li>Han, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgene+expression+in+the+guinea+pig+cochlea+mediated+by+a+lentivirus-derived+gene+transfer+vector.">Transgene expression in the guinea pig cochlea mediated by a lentivirus-derived gene transfer vector.</a> Hum Gene Ther. 10 (11), 1867-1873 (1999).</li></ol>

이 연구에서 우리는 canalostomy에 의해 약물 전달 달팽이 관 vestibular 끝-장기에 걸쳐 시 약의 광범위 한 배포 결과 다는 것을 보였다. 내가 유전자 전달 방법으로 canalostomy는 청각 및 vestibular 함수에 최소한의 피해와 성인 및 신생아 쥐의 내 귀에 GFP 식에서 결과. 또한, 여러 주사 같은 동물에서 쉽게 수행할 수 있습니다.
그것은 특히 성인 쥐16,<sup class="xre...

감각 청력 손실 및 영향을 vestibular 부전 환자와의 밀접 하 게 연관 된 내가 장애. 내가 치료 약물의 배달 내가 질환의 치료에 대 한 약속을 보여줍니다. 조직 또는 로컬 접근 내가 약물을 전달 하기 위해 사용할 수 있습니다. 일부 내가 질병 idiopathic 갑자기 청력 상실, 일반적으로 전신 스테로이드1처리 등 조직의 약국 성공적으로 처리 됩니다. 또한, Lentz 외. 센스 oligonucleotide의 체계적 관리는 난청을 개선 하 고 Ush1c 돌연변이 마우스 모델2에서 기능을 균형 있게 보여주었다. 그러나, 내가 질환의 많은 부분이 처리 되지 않습니다 효과적으로 조직의 의약품 안전 청에 의해 내가3,4에 마약 사용을 제한 하는 혈액-미로 장벽 때문에. 반면, 지역 마약 배달 전략 내가 장애를 보다 효율적으로 처리할 수 있습니다. 사실, 내가 잠재적으로 로컬 약물 전달;에 대 한 이상적인 목표 한 사이트 유포 또는 주입 후 약의 보급을 용이 하 게, 유체로 가득 그리고 인접 장기에서 상대적으로 고립 된 부작용5,6제한.
지역 마약 배달 전략 intratympanic 및 intralabyrinthine 메서드가 포함 됩니다. Intratympanic 루트의 효과 크게 둥근 창 막 (RWM)와 RWM3,4,,78에 약물의 체류 시간을 통해 마약 침투성에 의존합니다. 따라서, 약물 이나는 RWM 뚫을 수 없는 시 약의 납품에 대 한 적당 하다. Intralabyrinthine 메서드는 약물의 높은 복용량에 광범위 하 게 배포 결과 내가 직접 접종을 포함 한다. 그러나, intralabyrinthine 방법 섬세 한 수술을 요구 하 고 침략 적, 선도 내가 기능을 손상 하는. 현재, 인간9에 사용 하기 위해 충분히 안전한 것으로 증명 되지 않았습니다 intralabyrinthine 주입 약물의 동물 연구에만 사용 됩니다. 따라서, 수술 절차를 단순화 해야 합니다, 그리고 상해의 위험 감소 병원에 intralabyrinthine 접근을 번역 하.
몇몇 intralabyrinthine 접근 RWM5,,1011 와 스칼라 미디어12,,1314, scala tympani에 주입 하 여 동물에 부과 하 고 있다 15 , 16, 스칼라 현관17, 반원의 운하16,18,,1920그리고21endolymphatic sac. 방법 마다 장단점6. 납품은 RWM 통해 신생아 쥐5,22에 atraumatic입니다. 그러나, 가벼운 난청 RWM 주입23, 수술24후 중이 토로 인해 가능성이 후 성인 쥐에서 관찰 됩니다. 대상 최종 기관12,14, 에서 높은 시 약 농도 달성 하는 스칼라 미디어 주입, 직접 우주로 endolymphatic 감각 상피를 포함 하는 시 약의 주입을 포함 한다, 25 , 그러나 26.,이 이렇게 복잡 한 절차를 요구 한다 고 심리 임계값의 상당한 상승 산 후 날 5 (P5) 보다 수행 하는 경우25,27, 그것의 응용 프로그램을 제한.
위에서 언급 한 intralabyrinthine 방식에 비해, canalostomy 특히 성인 쥐16,18,,2829,30에서 내가 최소한의 손상을 일으키는합니다 보호 효과 및 변환 측면의 평가 대 한 중요 한. 또한, 설치류, 반원의 운하 넘어 물집, 수술 절차를 용이 하 게 하 고 수술 하는 동안 중이 장애를 피할 수 있습니다. 클리닉, 반원의 운하 수술 다루기 힘든 양성 발작의 자세 현기증31,,3233, canalostomy의 임상 타당성을 제안에 대 한 사용 됩니다. 이후 처음가 모토 외설명. 16 , 2001 년에 canalostomy murine 내가18,,1928,29로 바이러스 성 벡터, siRNA, 줄기 세포, aminoglycoside, 등 다양 한 시 약을 제공 하는 데 사용 되었습니다. ,,3435,,3637. Canalostomy에 의해 adeno 관련 바이러스 (AAV) 벡터의 접종 가능 감각 상피에 외 인 유전자의 overexpression 달팽이 관 및 vestibular 끝-장기18,28, 의 기본 신경 29,30. Canalostomy에 의해 유전자 치료를 whirlin 균형 기능을 복원 하 고 인간의 안내인 증후군19, 그 canalostomy 유전자 cochleovestibular 질병에 대 한 유전자 치료의 연구에 대 한 유용한 제안 마우스 모델에서 청력을 향상 시킵니다. Canalostomy에 의해 중간 엽 줄기 세포의 이식 결과 인공 fibrocytes와 급성 감각 청각 손실35의 쥐 모델에서 청력 회복의 개편. 또한, canalostomy aminoglycosides vestibular 병 변18,,3438, 확립 하 내가 사용할 수 있습니다. 그리고18 필요한 경우 여러 주사를 수행할 수 있습니다. , 34.
현재 문서에서 우리, 자세히 설명, 성인 및 신생아 쥐에 canalostomy 기술. 우리 canalostomy 후 즉각적이 고 장기 결과 평가 하기 위해 마우스 내가 녹색 형광 단백질 (GFP) 유전자 (AAV8-GFP)와 스, 빠른 녹색 염료 및 AAV serotype 8 (AAV8)를 포함 하 여 다양 한 시 약을 주사.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Polymide Tubing</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>823400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc.</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#956;l Microsyringe</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>80001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine HCL</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. Llc.</td>
			<td>X-1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Miroscope</td>
			<td>Carl Zeiss Optical LLC.</td>
			<td>Pico</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Forceps</td>
			<td>Dumont Dumostar</td>
			<td>10576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-green Dye</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. Llc.</td>
			<td>F7252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV8-GFP</td>
			<td>BioMiao Biological Technology Co. Ltd (Beijing, China)</td>
			<td>20161101</td>
			<td>Titer: 2&#215;10e12 vg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. Llc.</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection Pump</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>789100S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Pad</td>
			<td>Pet Fun</td>
			<td>11072931136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc Syringe</td>
			<td>Mishawa Medical Industries Ltd. (Shanghai, China)</td>
			<td>2011-3151258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine HCL</td>
			<td>Gutian Pharmaceutical Co., Ltd. (Fujian, China)</td>
			<td>H35020148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Animal Clipper</td>
			<td>Codos Electrical Appliances Co., Ltd. (Guangdong, China)</td>
			<td>CP-8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Pellet</td>
			<td>Yatai Healthcare Ltd. (Henan, China)</td>
			<td>Yu-2008-1640081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. (Shanghai, China)</td>
			<td>Hu-2013-2650207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment</td>
			<td>Beijing Shuangji Pharmaceutical Ltd. (Beijng China)</td>
			<td>H11021270</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

canalostomy as a surgical approach to local drug delivery into the inner ears of adult and neonatal mice

내가 치료 약물의 로컬 배달 내가 질병에 대 한 유망한 요법입니다. 사출 반원의 운하 (canalostomy)를 통해 내가 지역 약물 전달에 대 한 유용한 접근 될 표시 되었습니다. 이 문서의 목표는 설명, 세부 사항, 성인 및 신생아 쥐에 있는 canalostomy에 관련 된 수술 기법입니다. 빠른 녹색 염료 및 adeno 관련 바이러스 serotype 8 녹색 형광 단백질 유전자에 의해 표시 된,는 canalostomy vestibular 끝-기관 청력에 최소한의 손상으로 달팽이 관에 삽입 된 시 약의 광범위 한 배포를 촉진 하 고 vestibular 기능입니다. 수술은 성인과 신생아 쥐;에서 성공적으로 구현 실제로, 다 수 수술 필요한 경우 수행할 수 수 있습니다. 끝으로, canalostomy 성인 및 신생아 쥐의 내 귀에 약물 전달에 효과적이 고 안전한 방법 이며 미래에 인간의 내가 질병을 치료 하는 데 사용할 수 있습니다.

빠른 녹색 염료는 내가 있는 그것의 즉각적인 배포를 평가 하는 성인 및 신생아 쥐의 PSC에 주입 했다. 염료 (그림 4) 수술 후 바로 달팽이 관, 현관, 반원의 운하에 걸쳐 발견 되었다.
안전 및 내가 유전자 납품에 대 한 canalostomy의 효율성 평가, AAV8 GFP 성인 및 신생아 쥐의 내가 주입 했다. 모든 동물 전시 정?...

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Canalostomy As a Surgical Approach to Local Drug Delivery into the Inner Ears of Adult and Neonatal Mice

성인 및 신생아 쥐의 내 귀에 로컬 약물 전달에 대 한 외과 접근으로 Canalostomy

여기는 청각 및 vestibular 함수에 최소 손상 반원의 운하를 통해 성인 및 신생아 쥐의 내 귀에 로컬 약물 전달 수 있는 canalostomy 절차에 설명 합니다. 이 메서드는 마우스 내가 바이러스 성 벡터, 제약, 그리고 작은 분자를 접종을 사용할 수 있습니다.

Local delivery of therapeutic drugs into the inner ear is a promising therapy for inner ear diseases. Injection through semicircular canals (canalostomy) ...

Research

JoVE Journal

Genetics

In Vitro Transcription Assays and Their Application in Drug Discovery

In Vitro Transcription Assays and Their Application in Drug Discovery

시험 관내 전사 분석 실험 및 약물 발견에의 응용

In vitro transcription assays have been developed and widely used for many years to study the molecular mechanisms involved in transcription. This process ...

연구

유전학

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

여러 형광에 의한 간 염색체 안정 수차의 검출<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드 (mFISH) 및 방사선 조사 마우스의 스펙트럼 핵형 분석 (SKY)

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

Controllable Ion Channel Expression through Inducible Transient Transfection

유도 성 과도 형질을 통해 제어 이온 채널 식

Transfection, the delivery of foreign nucleic acids into a cell, is a powerful tool in protein research. Through this method, ion channels can be ...

Systemic Delivery of MicroRNA Using Recombinant Adeno-associated Virus Serotype 9 to Treat Neuromuscular Diseases in Rodents

설치류에 신경 근육 학 질병을 치료 하는 재조합 형 Adeno 관련 바이러스 Serotype 9를 사용 하 여 예측에 관한 체계적 전달

RNA interference via the endogenous miRNA pathway regulates gene expression by controlling protein synthesis through post-transcriptional gene silencing. ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

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소설 Transposon 중재 방식을 사용 하 여 대장균 의 DNA 요소에 대 한 최적의 염색체 위치 결정

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

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오버랩2 방법으로 시너지 약물 조합의 높은 처리량 식별

Although antimicrobial drugs have dramatically increased the lifespan and quality of life in the 20th century, antimicrobial resistance threatens our ...

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복제 설정된 방법: 양적 측정 꼬마 선 충 수명에 접근 높은 처리량

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A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

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Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

작은 분자 조사를 시험관 및 셀 모양을 사용 하 여 사전 mRNA 구조 변화 유도

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...