Name: quantification of lipid abundance and evaluation of lipid distribution in caenorhabditis elegans by nile red and oil red o staining
Uploaded: 2018-03-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining at JoVE.com

यह काम NIH ग्रांट द्वारा ही संभव किया गया था: R01GM109028 (S.P.C.)

1. नील लाल (NR) लिपिड के दाग
<ol><li>तैयारी 5 मिलीग्राम/एमएल NR स्टॉक समाधान<ol>
<li>एक 500 मिलीलीटर की बोतल में 100 मिलीग्राम NR पाउडर 100% एसीटोन की 200 मिलीलीटर जोड़ें ।</li>
		<li>एल्यूमीनियम पंनी के साथ बोतल को कवर करने के लिए प्रक...

<ol>
	<li>Greenspan, P., Mayer, E. P., Fowler, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nile+red:+a+selective+fluorescent+stain+for+intracellular+lipid+droplets.">Nile red: a selective fluorescent stain for intracellular lipid droplets.</a> J Cell Biol. 100 (3), 965-973 (1985).</li><li>Guo, Y., Cordes, K. R., Farese, R. V., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+at+a+glance.">Lipid droplets at a glance.</a> J Cell Sci. 122 (6), 749-752 (2009).</li><li>Horobin, R. W., Kiernan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Conn's biological stains: a handbook of dyes, stains and fluorochromes for use in biology and medicine. , (2002).</li><li>Hulme, S. E., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+the+worm:+Caenorhabditis+elegans+as+a+platform+for+integrating+chemical+and+biological+research.">Chemistry and the worm: Caenorhabditis elegans as a platform for integrating chemical and biological research.</a> Angew Chem Int Edit. 50 (21), 4774-4807 (2011).</li><li>Khanna, A., Johnson, D. L., Curran, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+roles+for+mafr-1+in+reproduction+and+lipid+homeostasis.">Physiological roles for mafr-1 in reproduction and lipid homeostasis.</a> Cell Rep. 9 (6), 2180-2191 (2014).</li><li>Lynn, D. A., Dalton, H. M., Sowa, J. N., Wang, M. C., Soukas, A. A., Curran, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Omega-3+and-6+fatty+acids+allocate+somatic+and+germline+lipids+to+ensure+fitness+during+nutrient+and+oxidative+stress+in+Caenorhabditis+elegans.">Omega-3 and-6 fatty acids allocate somatic and germline lipids to ensure fitness during nutrient and oxidative stress in Caenorhabditis elegans.</a> P Natl Acad Sci USA. 112 (50), 15378-15383 (2015).</li><li>Pang, S., Lynn, D. A., Lo, J. Y., Paek, J., Curran, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1+and+Nrf2+couples+proline+catabolism+with+lipid+metabolism+during+nutrient+deprivation.">SKN-1 and Nrf2 couples proline catabolism with lipid metabolism during nutrient deprivation.</a> Nat Commun. 5, (2014).</li><li>Saltiel, A. R., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signalling+and+the+regulation+of+glucose+and+lipid+metabolism.">Insulin signalling and the regulation of glucose and lipid metabolism.</a> Nature. 414 (6865), 799-806 (2001).</li><li>Witting, M., Schmitt-Kopplin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+lipidome:+A+primer+for+lipid+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">The Caenorhabditis elegans lipidome: A primer for lipid analysis in Caenorhabditis elegans.</a> Arch Biochem Biophys. 589, 27-37 (2016).</li><li>Yen, K., Le, T. T., Bansal, A., Narasimhan, S. D., Cheng, J. X., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+fat+storage+quantitation+in+nematode+Caenorhabditis+elegans+using+label+and+label-free+methods.">A comparative study of fat storage quantitation in nematode Caenorhabditis elegans using label and label-free methods.</a> PloS One. 5 (9), e12810 (2010).</li><li>Zhang, Y., Zou, X., Ding, Y., Wang, H., Wu, X., Liang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+genomics+and+functional+study+of+lipid+metabolic+genes+in+Caenorhabditis+elegans.">Comparative genomics and functional study of lipid metabolic genes in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Genomics. 14 (1), 164 (2013).</li><li>Folick, A., Min, W., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+imaging+of+lipid+dynamics+using+Coherent+Anti-stokes+Raman+Scattering+(CARS)+and+Stimulated+Raman+Scattering+(SRS)+microscopy.">Label-free imaging of lipid dynamics using Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS) and Stimulated Raman Scattering (SRS) microscopy.</a> Curr Opin Genet Dev. 21 (5), 585-590 (2011).</li><li>Pino, E. C., Webster, C. M., Carr, C. E., Soukas, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+high+throughput+microscopic+assessment+of+fat+mass+in+Caenorhabditis+elegans.">Biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in Caenorhabditis elegans.</a> J Vis Exp. (73), (2013).</li><li>O'Rourke, E. J., Soukas, A. A., Carr, C. E., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+major+fats+are+stored+in+vesicles+distinct+from+lysosome-related+organelles.">C. elegans major fats are stored in vesicles distinct from lysosome-related organelles.</a> Cell Metab. 10 (5), 430-435 (2009).</li></ol>

मोटापा और चयापचय रोग दर में वृद्धि सी. एलिगेंस एक उपयुक्त मॉडल है कि कोशिकाओं और ऊतकों में वसा संचय को विनियमित तंत्र का अध्ययन करने के लिए बनाता है । हाल के सबूत से पता चलता है कि लिपिड स्तर में परिवर...

लिपिड जीवन के लिए आवश्यक हैं । वे झिल्ली के अभिंन घटक हैं, माध्यमिक दूत और संकेत ट्रांसड्यूसर के रूप में कार्य करते हैं, और ऊर्जा भंडारण में महत्वपूर्ण कार्य किया है । जब लिपिड चयापचय dysregulated है, यह मोटापा और प्रकार द्वितीय मधुमेह, जो सार्वजनिक स्वास्थ्य चिंताओं को दबा रहे हैं जैसे रोगों की ओर जाता है9. Caenorhabditis एलिगेंस (सी. एलिगेंस) एक उत्कृष्ट मॉडल जीव है जिसमें लिपिड चयापचय का अध्ययन करने के लिए क्योंकि यह एक अपेक्षाकृत कम जीवन चक्र, एक पारदर्शी शरीर, एक ज्ञात कोशिका वंश है, और एक पूरी तरह से अनुक्रम जीनोम. मुख्य रूप से एक द्विलिंग, सी. एलिगेंस शोधकर्ताओं ने समय की छोटी अवधि में isogenic पशुओं की बड़ी संख्या बढ़ाने के लिए carryout उच्च प्रवाह आगे आनुवंशिक स्क्रीन चयापचय जीन और रास्ते4की एक विस्तृत सरणी का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है । इस दृष्टिकोण से मानव, चूहों, चूहों और drosophila के बीच 273 C. एलिगेंस लिपिड चयापचय जीन में संरक्षण के एक उच्च डिग्री का पता चला है । इसके अलावा, C. एलिगेंस में 300 से अधिक लिपिड जीन मानव orthologues कि चयापचय सिंड्रोम11से असंबंधित रोगों के साथ जुड़े रहे हैं । परंपरागत रूप से, सी. एलिगेंस में लिपिड भंडारण की परीक्षा ज्यादातर डाई पर भरोसा किया है-परख, जो लिपिड संचय के बारे में मजबूत जानकारी प्रदान लेबल । कम आम जहां लिपिड स्थानीयकरण और ऊतकों में लिपिड बहुतायत में अंतर मापा का वर्णन है । हालांकि, हाल ही में काम से पता चला है कि लिपिड वितरण के रूप में लिपिड संचय6के रूप में महत्वपूर्ण हो सकता है ।
हाल ही में, अध्ययनों से उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (HPLC-ms), गैस क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (जीसी-ms), और सुसंगत विरोधी स्टोक्स रमन कैटरिंग (कारें) माइक्रोस्कोपी को संबोधित करने के रूप में तरीकों का घालमेल शुरू कर दिया है सीधे लिपिड निष्कर्षों की सामग्री का विश्लेषण करके दाग आधारित दृष्टिकोण की कमियों, विशिष्ट लिपिड भिन्न, और लिपिड जमा, क्रमशः10,11. इसके अलावा, कार माइक्रोस्कोपी से पता चला है कि नील लाल केवल वसा संचय के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में सेवा कर सकते है जब एक निर्धारण डाई के रूप में प्रयोग किया जाता है, एक महत्वपूर्ण दाग के रूप में इसके उपयोग के लिए रवाना ऑटो-फ्लोरोसेंट organelles10के धुंधला लक्ष्य की ओर जाता है । तथापि, आवश्यक तकनीकी विशेषज्ञता और इन क्रोमैटोग्राफी और सूक्ष्म तरीकों के साथ जुड़े लागत कई अनुसंधान सवालों के लिए उनके उपयोग अस्थिर बनाते हैं । इस अनुच्छेद में, हम एक सुविधाजनक और विश्वसनीय विधि को निर्धारित करने और C. एलिगेंस में तटस्थ लिपिड जमा दाग नील लाल और तेल लाल हे का उपयोग करने के लिए पूरे पशुओं में और विशिष्ट ऊतकों में लिपिड बहुतायत भेद चर्चा ।
नील लाल, 9-diethylamino-5H-benzo [α] phenoxazine-5-एक, एक benzophenoxazone डाई है कि आसानी से विभिंन कार्बनिक सॉल्वैंट्स में घुल, लेकिन पानी में ज्यादातर अघुलनशील है । यह एक उत्कृष्ट lysochrome जैसे ट्राइग्लिसराइड्स या कोलेस्ट्रॉल एस्टर के रूप में तटस्थ लिपिड दाग इस्तेमाल किया डाई है, क्योंकि यह एक मजबूत रंग सुविधाओं, लिपिड में अच्छी तरह से solubilizes, आसपास के ऊतकों के साथ नगण्य बातचीत है, और में से विलायक में कम घुलनशील है रक्तदाब. यह एक उत्तेजना और 450-500 और 520 एनएम के उत्सर्जन maxima, क्रमशः1है । जब नील लाल दाग सी. एलिगेंस हरे प्रतिदीप्ति के लिए देखा जाता है, असतत लिपिड निकायों आंत और अन्य ऊतकों में या तो समूहों में मनाया जा सकता है या समान रूप से फैलाया, जानवर के जीनोटाइप या प्रयोगात्मक उपचार पर निर्भर करता है 7.
तेल लाल हे एक lysochrome, वसा में घुलनशील डाई ट्राइग्लिसराइड्स और लिपो दाग के लिए इस्तेमाल किया है । इसे एक डाइज डाई कहा जाता है क्योंकि इसकी रासायनिक संरचना में तीन खुशबूदार छल्ले से जुड़ी दो डाइज समूह होती हैं. यह मुश्किल है, जो renders यह अत्यधिक लिपिड में घुलनशील । इसका दाग रंग लाल है और इसका प्रकाश अवशोषण अधिकतम 518 एनएम 3है । C. एलिगेंस तेल लाल ओ शो लाल लिपिड बूंदों है कि पशु पारदर्शी शरीर है, जो विभिंन ऊतकों के बीच लिपिड वितरण के गुणात्मक मूल्यांकन की सुविधा के खिलाफ बाहर खड़े6के साथ दाग ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Imager.M2m Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERC5s camera</td>
			<td>Axiocam</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Color-capable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRm camera</td>
			<td>Axiocam</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Fluorescence-capable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nile red</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>N1142</td>
			<td>Lipid Stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil red O</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12989</td>
			<td>Lipid Stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td>DNA stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH1133-1LP</td>
			<td>Fixative solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m seterile syringe filter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28145-477</td>
			<td>Cellulose acetate filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5430</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5428000015</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker Rotisserie</td>
			<td>Lab Quake</td>
			<td>400110Q</td>
			<td>Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Rotator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10136-084</td>
			<td>Rotator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7758-11-4</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7778-77-0</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>7786-30-3</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>57-88-5</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>211677</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>L9110</td>
			<td>NGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB media</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3147</td>
			<td>Bacterial growth</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of lipid abundance and evaluation of lipid distribution in caenorhabditis elegans by nile red and oil red o staining

Caenorhabditis एलिगेंस एक असाधारण मॉडल जीव है जिसमें लिपिड चयापचय और ऊर्जा homeostasis का अध्ययन करने के लिए । इसके लिपिड जीन के कई मनुष्यों में संरक्षित कर रहे है और चयापचय सिंड्रोम या अंय रोगों के साथ जुड़े रहे हैं । इस जीव में लिपिड संचय की परीक्षा को निर्धारण रंजक या लेबल मुक्त तरीकों से किया जा सकता है । नील लाल और तेल लाल हे जैसे निर्धारण दाग सस्ती हैं, मात्रात्मक रूप से लिपिड स्तर को मापने के लिए विश्वसनीय तरीके और गुणात्मक ऊतकों में लिपिड वितरण का पालन करने के लिए, क्रमशः । इसके अलावा, इन दाग विभिंन लिपिड चयापचय जीन और रास्ते के उच्च प्रवाह स्क्रीनिंग के लिए अनुमति देते हैं । इसके अतिरिक्त, उनके hydrophobic प्रकृति लिपिड घुलनशीलता की सुविधा, आसपास के ऊतकों के साथ बातचीत कम कर देता है, और विलायक में पृथक्करण रोकता है । हालांकि इन तरीकों को सामान्य लिपिड सामग्री की जांच में प्रभावी रहे हैं, वे रासायनिक संरचना और लिपिड जमा की विविधता के बारे में विस्तृत जानकारी प्रदान नहीं करते । इन उद्देश्यों के लिए, जैसे GC-MS और कारों माइक्रोस्कोपी के रूप में लेबल मुक्त तरीकों बेहतर अनुकूल हैं, उनकी लागत के बावजूद ।

SKN-1 एक bZip, cytoprotective प्रतिलेखन कारक है कि शेयरों समरूपता स्तनधारी NRF2 के साथ और फैटी एसिड ऑक्सीकरण मध्यस्थता करने के लिए दिखाया गया है । उनके आहार में ग्लूकोज एकाग्रता पर निर्भर करता है, एक constitutively सक?...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining at JoVE.com

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

ठहराव लिपिड बहुतायत और लिपिड वितरण के मूल्यांकन में Caenorhabditis एलिगेंस द्वारा नील लाल और तेल लाल ओ धुंधला

नील लाल फिक्स्ड Caenorhabditis एलिगेंस के दाग तटस्थ लिपिड जमा की मात्रात्मक माप के लिए एक विधि है, जबकि तेल लाल हे दाग ऊतकों के बीच लिपिड वितरण के गुणात्मक आकलन की सुविधा ।

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

The overall goal of these staining methods is to quantify intracellular lipid abundance and evaluate lipid distribution among different tissues. This method can help answer key questions in lipid metabolism such as how are lipids genetically and biochemically regulated and which disease states this regulate lipid homeostasis. The main advantage of this technique is that it is relatively simple and inexpensive to carry out.To carry out Nile Red lipid staining, plate worms on Nematode Growth Medium or NGM seeded with late log OP50 E.coli and grow the worms at 20 degrees Celsius to early L4 stage. Wash the worms with one millimeter of PBST solution and transfer the worm suspension to a 1.5 milliliter microfuge tube. Centrifuge the worms at 560 times gravity for one minute.Then remove the supernatant and repeat the PBST wash until the E.coli is cleared from the suspension. Next, to the worm pellet, add 100 microliters of 40%isopropanol or 60%for ORO staining and incubate the sample at room temperature for three minutes. The addition of isopropanol is crucial for proper permeabilization of the worms before staining.Centrifuge the worms at 560 times gravity for one minute and remove the supernatant without disrupting the worm pellet. It is important to minimize light exposure during the centrifugation steps. Now while in the dark, add 600 microliters of previously prepared NR working solution to each sample.Invert the tubes three times and fully mix the worms and solution. Then incubate the sample in the dark at room temperature for two hours. Following incubation, centrifuge the worms and remove the supernatant.Then add 600 microliters of PBST and incubate the samples in the dark for 30 minutes to remove the excess NR stain. After spinning the samples again as before, remove all but approximately 50 microliters of supernatant and resuspend the worm pellet in the remaining solution. To prepare slides for imaging, pipette five microliters of worm suspension onto a microscope slide and carefully apply a coverslip to avoid trapping any air bubbles.Using the FITC GFP channel to image NR stained worms and trying different exposure times, image the worms at five-fold magnification to capture several animals per field of view. Then switch to 10-fold magnification for better quantification of individual worms. To quantify the images, upload the micrographs to ImageJ.In the image pull down menu, adjust the brightness, contrast of the image deck, and propagate changes to all the images by clicking apply. Use the polygon selection tool to delineate each imaged worm and under the analysis pull down menu, use the measure function to qualify fluorescence intensity emitted by NR.For each image, measure five background locations and calculate the average background fluorescence intensity. Add 600 microliters of Oil Red O or ORO working solution to each sample and invert the tube three times to mix the worms well and the ORO.Rotate the samples at 30 RPM and RT for two hours. Centrifuge the samples at 560 times gravity for one minute and aspirate all the supernatant except for 100 microliters. Then use 600 microliters of PBST to resuspend the samples and rotate the tubes at 30 RPM for 30 minutes to remove excess ORO staining.To better distinguish the location of the animals'germ line in the intestinal cells, stain nuclei by adding one microliter of DAPI for every one milliliter of ORO working solution. Then to prepare slides for imaging, resuspend the worms and the remaining supernatant and mix the solution well. Put five microliters of worm suspension on a microscope slide and carefully apply a coverslip ensuring that no air bubbles form.To image the ORO stained worms, use a color capable camera at five-fold magnification to image several worms in one field of view. Then switch to 10-fold magnification for better examination of individual worms. Finally, after uploading the images to ImageJ and creating an image deck according to the text protocol, categorize the images according to lipid accumulation throughout the animal's body or in specific tissues.SKN-1 shares homology with mammalian Nrf2 and has been shown to mediate fatty acid oxidation. This figure shows activated SKN-1 animals exposed to conditions that lead to increasing lipid levels. As seen in these images, NR fluorescence captured using the FITC GFP channel is prominent along the intestine, but is dimmer in the head, tail, and intestinal lumen.While it is easy to categorize the worms according to the presence or absence of Age-dependent Somatic Depletion of Fat or ASDF, it may be difficult to identify animals with intermediate fat loss. Compared to non-ASDF animals, which show bright red staining throughout the body with few translucent areas, ASDF worms exhibit noticeable fat depletion in intestinal cells. Animals in the process of developing ASDF often show translucent spots where most of the fat loss eventually occur.Moreover, ASDF worms may still feature bright red staining in the head and tail regions because the phenotype is not defined by complete somatic fat loss, but by extensive fat depletion relative to non-aged animals. Once mastered, this technique can be done in three hours plus imaging time if it is performed properly. While attempting this procedure, it's important to remember to wash and permeabilize worms no more than 30 minutes before staining.Following this procedure, other methods like CARS microscopy can be performed to compare the type of lipid species each technology identifies and to determine which method is better suited for specific types of questions. After watching this video, you should have a good understanding of how to quantify lipids and evaluate lipid distribution in the worms using Nile Red and Oil Red O staining, followed by ImageJ micrograph analysis.

Research

JoVE Journal

Biology

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Evaluation of the Spatial Distribution of &gamma;H2AX following Ionizing Radiation

Evaluation of the Spatial Distribution of &#947;H2AX following Ionizing Radiation

विकिरण के बाद γH2AX के स्थानिक वितरण का मूल्यांकन

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

बुनियादी<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; तरीके तुल्यकालन और निरीक्षण:

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Extracellular फ्लक्स विश्लेषण का उपयोग Explanted रेटिना ऊतक में ऊर्जा चयापचय का मापन

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...

Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae

Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae

ड्रोसोफिला लार्वा में ओएनोसाइट्स का विच्छेदन और लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला

Lipids are essential for animal development and physiological homeostasis. Dysregulation of lipid metabolism results in various developmental defects and ...

Isolation and Characterization of Adult Cardiac Fibroblasts and Myofibroblasts

एडल्ट कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट और माओफीब्रोब्लास्ट का अलगाव और लक्षण वर्णन

Cardiac fibrosis in response to injury is a physiological response to wound healing. Efforts have been made to study and target fibroblast subtypes that ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

उत्तेजित रमन स्कैटरिंग माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस में लिपिड स्टोरेज डायनेमिक्स की लेबल-फ्री इमेजिंग

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस में कुल मात्रा का ठहराव स्वचालित करना

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This ...

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

केनोरहाब्डिस एलिगेंस में दीर्घायु और जीन ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण के लिए लिपिड पूरकता

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

तेल लाल ओ और BODIPY का उपयोग लिपिड छोटी बूंद आकार और संलयन की लाइव सेल इमेजिंग

Evaluation of Lipid Droplet Size and Fusion in Bovine Hepatic Cells

लेखक स्पॉटलाइट: लिपिड छोटी बूंद आकार और गोजातीय यकृत कोशिकाओं में संलयन का मूल्यांकन  

गोजातीय यकृत कोशिकाओं में लिपिड बूंद आकार और संलयन का मूल्यांकन

Lipid droplets (LDs) are organelles that play an important role in lipid metabolism and neutral lipid storage in cells. They are associated with a variety ...