Name: deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography
Uploaded: 2018-04-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door een subsidie van het hart en de Stichting van de lijn in Canada en de Morris en Bella Fainman Family Foundation. De auteurs bedank Veronique Michaud voor haar technische hulp bij de VEVO770 echografie imaging systeem.

Alle procedures werden goedgekeurd door de institutionele Animal Care Comité van McGill University Montreal, QC, Canada. Al het nodige materiaal wordt vermeld in tabel I.
1. RattenUitrustingen (C57BL/6J) IVC Stasis Protocol
<ol><li>Operatie voorbereiding Nota: Dit is een survival chirurgie en dus juiste aseptische techniek moet te allen tijde worden gevolgd. Het gaat hierbij om ervoor te zorgen dat alle materialen zijn bij de hand, reinigen en steriliseren van instrument...

<ol>
	<li>Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+diagnosed+deep+vein+thrombosis+in+the+general+population:+systematic+review.">Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).</li><li>McGuinness, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+labelled+monocytes+by+experimental+venous+thrombi.">Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi.</a> Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).</li><li>Singh, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+thrombus+to+resolve+in+urokinase-type+plasminogen+activator+gene-knockout+mice:+rescue+by+normal+bone+marrow-derived+cells.">Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells.</a> Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).</li><li>Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+kinetics+of+99mTc+labeled+recombinant+tissue+plasminogen+activator+in+rabbits.">In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits.</a> Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).</li><li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease.">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).</li><li>Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pulmonary+emboli+and+deep+venous+thrombi+with+99mTc-bitistatin,+a+platelet-binding+polypeptide+from+viper+venom.">Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom.</a> J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).</li><li>Wakefield, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+thrombosis+prophylaxis+by+inflammatory+inhibition+without+anticoagulation+therapy.">Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy.</a> J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).</li><li>Robins, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Gas6+contributes+to+thrombogenesis+and+promotes+tissue+factor+up-regulation+after+vessel+injury+in+mice.">Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice.</a> Blood. 121 (4), 692-699 (2013).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+synthase+is+upregulated+by+Gas6+during+cancer-induced+venous+thrombosis.">Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis.</a> Blood. 127 (6), 769-777 (2016).</li><li>Laurance, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas6+(Growth+Arrest-Specific+6)+Promotes+Inflammatory+(CCR2hiCX3CR1lo)+Monocyte+Recruitment+in+Venous+Thrombosis.">Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+venous+thrombosis+in+mice.">In vivo monitoring of venous thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Luther, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Effector-Memory+T+Cell+Activation+Regulates+Post-Thrombotic+Vein+Wall+Inflammation+and+Thrombus+Resolution.">Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution.</a> Circ Res. , (2016).</li><li>Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+contributions+of+complement+factors+to+platelet+activation+and+fibrin+formation+in+venous+thrombus+development.">Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development.</a> Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model.">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li></ol>

Er zijn verschillende kritische stappen voor succesvol veneuze trombose vorming met behulp van het stasis-model. Inductie van veneuze trombose is moeilijker in oude muizen als gevolg van de ophoping van vet rond de vena cava inferior en de aorta. Idealiter moet de muizen ondergaan deze procedure 8 - 10-weken oude. Grote zorg moet worden genomen niet ertoe endothelial schade in het IVC tijdens de botte dissectie en ligatuur. Daarnaast is het essentieel om te houden van het dier in een incubator 34 ° C gedurende ten minst...

Veneuze thromboembolism (VTE), die uit diepe veneuze trombose (DVT) en longembolie bestaat, is de derde belangrijkste oorzaak van cardiovasculaire dood na een hartinfarct en beroerte. Het is een veel voorkomende aandoening treft 1-2 procent van de bevolking, met een jaarlijkse incidentie van 1 in 5001. VTE kan leiden tot: 1) dood door longembolie; 2) post-trombotische syndroom, gekenmerkt door chronische beenpijn, zwelling en ulceratie; of 3) chronische pulmonale hypertensie resulteert in aanzienlijke chronische respiratoire compromis. VTE is een multi factoriële ziekte en kan voortvloeien uit stase van de bloedstroom, schade aan wanden en/of hypercoagulable Staten als gevolg van een verstoring van het evenwicht tussen de stolling en de fibrinolytic systemen, zoals het is meer dan honderd jaar geleden beschreven door Virchow en staat bekend als de Virchow van triade.
Omdat in de meeste gevallen het onmogelijk is om menselijke DVT monsters krijgen, hebben de onderzoekers experimentele dierlijke modellen van DVT ontwikkeld. Verschillende dieren waaronder rat2, muis3, konijn4, varken5, hond6en7 van de niet-menselijke primaten hebben ingezet. Muizen genetisch kunnen worden gewijzigd en zijn de meest gebruikte dier te bestuderen van DVT. Echter zoals alle dieren, wordt spontane DVT niet waargenomen bij muizen. Dus, fysische of chemische veranderingen van de wand van de ader worden gebruikt voor het maken van trombose bij muizen. Eerder hebben we de ferrichloride model gebruikt voor het opwekken van trombose in de vena cava inferior (IVC) van muizen8,9,10. Dit model heeft het voordeel dat het betrouwbaar produceren occlusieve stolseltjes binnen minuten en kan worden gebruikt voor het onderzoeken van de rol van anti-coagulans en anti-bloedplaatjes geneesmiddelen tijdens acute DVT. Het is echter een terminal procedure. Dus, om te bestuderen van acute en chronische DVT, de stase-model is meer geschikt. In dit model wordt trombus vorming geïnduceerd door de volledige onderbreking van de bloedstroom in het IVC, een van de factoren in de Virchow triade voor DVT ontwikkeling. Dit model kan worden gebruikt om te studeren van DVT vorming en resolutie, wat een voordeel ten opzichte van de FeCl3 model11.
Wij hebben een niet-invasieve methode te volgen van vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd met behulp van een micro-imaging hoge-frequentie echografie systeem12ontwikkeld. Wij hebben eerder aangetoond dat meting van veneuze trombose door echografie gunstig met stolseltjes verkregen pathologisch correleert. Wij hebben in twee latere studies bevestigd dat metingen met echografie correlaat met trombose gewicht en trombose gebied gekwantificeerd door histochemie9,10 verkregen. Nog belangrijker, hebben we aangetoond dat hoge frequentie echografie kan worden gebruikt voor het controleren van de vorming van diepe veneuze trombose in muizen12. Het kan ook worden gebruikt om het kwantificeren van trombose resolutie in een niet-invasieve manier.
Hier beschrijven we het protocol waardoor trombose vorming met behulp van de muismodel stase-geïnduceerde trombose en hoe trombose vorming niet-gebeurt na verloop van tijd met behulp van hoge frequentie echografie kan worden gecontroleerd.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 perma-hand silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>706G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt forceps (straight and curved)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G needles</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>Visualsonics</td>
			<td>No longer sold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SR Buprenorphine</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>Given to LDI by Vet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Systan eye oinment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>288/28062-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x2 sterile Gauze</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#104148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore hypoallergenic surgical tape</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#7411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td>
			<td>Dufort &#38; Lavigne</td>
			<td>#AKEN4061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair remover</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water heated hard pad</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>#HHP-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar heater water pump TP500</td>
			<td>MATVET Inc.</td>
			<td>#R-500305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infra-red heating lamp</td>
			<td>electrimat inc.</td>
			<td>#1R175R-PAR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse rectal temperature prope</td>
			<td>emkaTECHNOLOGIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography

Veneuze trombose is een veel voorkomende aandoening treft 1-2 procent van de bevolking, met een jaarlijkse incidentie van 1 in 500. Veneuze trombose kan leiden tot de dood door middel van longembolie of resultaten in het post-trombotische syndroom, gekenmerkt door chronische beenpijn, zwelling en ulceratie, of in chronische pulmonale hypertensie resulteert in aanzienlijke chronische respiratoire compromis. Dit is de meest voorkomende hart-en vaatziekten na myocardinfarct en ischemische beroerte en een klinische uitdaging voor alle medische disciplines, zoals het het verloop van andere aandoeningen zoals kanker, systemische ziekten, chirurgie en belangrijk trauma kan bemoeilijken.
Experimentele modellen zijn nodig om deze mechanismen te bestuderen. De stase model induceert consistente trombose grootte en een meetbare hoeveelheid trombose. Het is echter moet systematisch afbinden kant takken van de vena cava inferior variabiliteit in maten van de trombose en eventuele foutieve interpretatie te voorkomen. Wij hebben een niet-invasieve techniek voor het meten van trombose grootte met behulp van Ultrasonografie ontwikkeld. Met behulp van deze techniek kunnen we trombose ontwikkeling en resolutie beoordelen na verloop van tijd in hetzelfde dier. Deze benadering beperkt het aantal muizen die nodig zijn voor de kwantificering van veneuze trombose overeenstemming met het beginsel van vervanging, vermindering en verfijning van dieren in het onderzoek. We hebben aangetoond dat trombose gewicht en histologische analyse van trombose grootte correlaat met meting met Ultrasonografie verkregen. Daarom beschrijft de huidige studie hoe voor het opwekken van diep-veneuze trombose in muizen met behulp van de vena cava inferior stase model en hoe om te controleren met behulp van hoge frequentie echografie.

Stase veneuze trombose model
In het model van stase, muizen zijn verdoofd en een snede is gemaakt om de vena cava (IVC), inferior bloot te stellen. De incisie wordt gemaakt aan de linker- of rechterkant van de muis in plaats van een middellijn laparotomie op een manier die niet met de ultrasone sonde interfereren zou. De buikspieren aan te spannen en de huid zijn vouwen terug naar het blootstellen van het IVC (<...

Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Dit protocol beschrijft de stappen voor het verkrijgen van veneuze trombose met behulp van een stase-model. Daarnaast zijn we met behulp van een niet-invasieve methode voor het meten van de vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd.

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Het identificeren van ontregelde genen geïnduceerd door Kaposi-sarcoom-geassocieerde herpesvirus (KSHV)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Granulocyt-afhankelijke auto-antilichaam-geïnduceerde blaarvorming

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Versnelde Type 1 diabetes inductie in muizen door adoptieve overdracht van diabetogenische CD4 + T cellen

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoog</sup&gt; T cellen in immunodeficiënte muizen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Beeldvorming van neutrofielen en monocyten in Mesenteriale Veins door Intravitale Microscopie op verdoofd muizen in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

High-throughput detectie van respiratoire pathogene in dierlijke specimens door nanoschaal PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Inductie van verlamming en visuele systeem schade in muizen door T cellen specifiek voor Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

Beoordeling van bloed lactaat en Plasma insuline tijdens hoge intensiteit oefening door Antecubital ader catheterisatie

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Visualiseren van leukocyten rollen en hechting in angiotensine II-geïnfundeerd muizen: technieken en valkuilen

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...