Name: deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography
Uploaded: 2018-04-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra hjertet og Stroke Foundation of Canada og The Morris og Bella Fainman Family Foundation. Forfatterne vil gjerne takke Veronique Michaud for hennes teknisk hjelp med VEVO770 ultralyd imaging system.

Alle prosedyrer ble godkjent av institusjonelle dyr omsorg komiteen av McGill University Montréal, QC, Canada. Alt utstyr nødvendig er oppført i tabell jeg.
1. Trouble (C57BL/6J) IVC Stasis protokollen
<ol><li>Kirurgi forberedelse Merk: Dette er en overlevelse kirurgi og derfor riktig steril teknikk må følges til enhver tid. Dette inkluderer gjør at alle materialer er for hånden, rengjøring og sterilisering instrumenter før og mellom bruk og angi et sterilt områ...

<ol>
	<li>Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+diagnosed+deep+vein+thrombosis+in+the+general+population:+systematic+review.">Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).</li><li>McGuinness, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+labelled+monocytes+by+experimental+venous+thrombi.">Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi.</a> Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).</li><li>Singh, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+thrombus+to+resolve+in+urokinase-type+plasminogen+activator+gene-knockout+mice:+rescue+by+normal+bone+marrow-derived+cells.">Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells.</a> Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).</li><li>Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+kinetics+of+99mTc+labeled+recombinant+tissue+plasminogen+activator+in+rabbits.">In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits.</a> Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).</li><li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease.">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).</li><li>Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pulmonary+emboli+and+deep+venous+thrombi+with+99mTc-bitistatin,+a+platelet-binding+polypeptide+from+viper+venom.">Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom.</a> J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).</li><li>Wakefield, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+thrombosis+prophylaxis+by+inflammatory+inhibition+without+anticoagulation+therapy.">Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy.</a> J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).</li><li>Robins, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Gas6+contributes+to+thrombogenesis+and+promotes+tissue+factor+up-regulation+after+vessel+injury+in+mice.">Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice.</a> Blood. 121 (4), 692-699 (2013).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+synthase+is+upregulated+by+Gas6+during+cancer-induced+venous+thrombosis.">Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis.</a> Blood. 127 (6), 769-777 (2016).</li><li>Laurance, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas6+(Growth+Arrest-Specific+6)+Promotes+Inflammatory+(CCR2hiCX3CR1lo)+Monocyte+Recruitment+in+Venous+Thrombosis.">Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+venous+thrombosis+in+mice.">In vivo monitoring of venous thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Luther, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Effector-Memory+T+Cell+Activation+Regulates+Post-Thrombotic+Vein+Wall+Inflammation+and+Thrombus+Resolution.">Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution.</a> Circ Res. , (2016).</li><li>Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+contributions+of+complement+factors+to+platelet+activation+and+fibrin+formation+in+venous+thrombus+development.">Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development.</a> Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model.">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li></ol>

Det er flere viktige skritt for vellykket venøs dannelse ved hjelp av stasis modellen. Induksjon av venetrombose er mer utfordrende i gamle mus på grunn av opphopning av fett rundt de underlegne vena cava og aorta. Ideelt sett skal mus under denne prosedyren 8 - 10 uker gammel. Stor forsiktighet bør tas ikke å indusere endothelial skader i IVCEN i sløv disseksjon og ligatur. I tillegg er det avgjørende å holde dyr i en 34 ° C inkubator i minst 30 minutter etter operasjonen og returnere den til selskapet av andre ...

Venøse thromboembolism (VTE), som består av dyp venetrombose (DVT) og lunge embolism, er den tredje største dødsårsaken hjerte etter hjerteinfarkt og hjerneslag. Det er en vanlig tilstand som påvirker 1-2% av befolkningen, med en årlig forekomst av 1 i 5001. VTE kan føre til: 1) døden gjennom lunge embolism; 2) etter trombotiske syndrom, preget av kroniske smerter, hevelse og sår; eller 3) kronisk pulmonal hypertensjon fører til betydelig kroniske luftveissykdommer kompromiss. VTE er flere faktoriell sykdom og kan skyldes stasis av blodstrøm, skade på fartøyet veggene, og/eller hypercoagulable stater på grunn av en forstyrrelse av balansen mellom koagulering og fibrinolytisk systemer, som det har blitt beskrevet over hundre år siden av Virchow og er kjent som den Virchow Triad.
Fordi i de fleste tilfeller er det umulig å hente prøver fra mennesker DVT, har forskere utviklet eksperimentelle dyr modeller av DVT. Flere dyr inkludert rotten2, musen3, kanin4, gris5, hunden6og ikke-menneskelige primas7 har blitt brukt. Mus kan være genmodifisert og er den mest brukte dyr å studere DVT. Men som alle dyr, er spontane DVT ikke observert i mus. Dermed brukes fysisk eller kjemiske endringer i blodåre veggen til å opprette blodpropp i mus. Vi har brukt ferric chloride modellen for å indusere blodpropp i de underlegne vena cava (IVC) av mus8,9,10. Denne modellen har fordelen av å produsere pålitelig occlusive thrombi innen minutter og kan brukes til å undersøke rollen av anti-koagulere og anti-Platederivert narkotika under akutt DVT. Det er imidlertid en terminal prosedyre. Dermed for å studere akutte og kroniske DVT, er stasis modellen mer egnet. I denne modellen, er dannelse indusert av komplett avbrudd i blodtilførselen i IVC, en av faktorene i Virchows triaden for DVT utvikling. Denne modellen kan brukes å studere DVT dannelse og oppløsning, som er en fordel i forhold til FeCl3 modellen11.
Vi har utviklet en ikke-invasiv metode for å følge dannelse og oppløsning over tid ved hjelp av en mikro-imaging høy frekvens ultralyd systemet12. Vi har tidligere vist at måling av venous tromboser av ultralyd korrelerer positivt med thrombi oppnådd pathologically. Vi har bekreftet i to studier at mål oppnådd med ultralyd relatere blodpropp vekt og blodpropp kvantifisert ved histochemistry9,10. Enda viktigere, har vi viste at høyfrekvent ultralyd kan brukes til å overvåke dannelsen av dyp venetrombose i mus12. Det kan også brukes til å kvantifisere blodpropp oppløsning på en ikke-invasiv måte.
Her vil vi beskrive protokollen tillater dannelse stasis-indusert trombose musemodell og hvordan dannelse kan overvåkes ikke invasively over tid ved hjelp av høyfrekvente ultralyd.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 perma-hand silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>706G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt forceps (straight and curved)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G needles</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>Visualsonics</td>
			<td>No longer sold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SR Buprenorphine</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>Given to LDI by Vet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Systan eye oinment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>288/28062-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x2 sterile Gauze</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#104148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore hypoallergenic surgical tape</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#7411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td>
			<td>Dufort &#38; Lavigne</td>
			<td>#AKEN4061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair remover</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water heated hard pad</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>#HHP-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar heater water pump TP500</td>
			<td>MATVET Inc.</td>
			<td>#R-500305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infra-red heating lamp</td>
			<td>electrimat inc.</td>
			<td>#1R175R-PAR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse rectal temperature prope</td>
			<td>emkaTECHNOLOGIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography

Venetrombose er en vanlig tilstand som påvirker 1-2% av befolkningen, med en årlig forekomst av 1 i 500. Venetrombose kan føre til døden gjennom lunge embolism eller resultater etter trombotiske syndromet, preget av kroniske smerter, hevelse og sårdannelse eller kronisk pulmonal hypertensjon fører til betydelig kroniske luftveissykdommer kompromiss. Dette er den vanligste karsykdommer etter hjerteinfarkt og iskemiske hjerneslag er en klinisk utfordring for alle medisinske disipliner, som det kan komplisere løpet av andre sykdommer som kreft, systemisk sykdom, kirurgi og store traumer.
Eksperimentelle modeller er nødvendig å studere disse mekanismene. Stasis modellen induserer konsekvent blodpropp størrelse og en målbar mengde blodpropp. Det er imidlertid nødvendig å systematisk ligate sidegreiner den underlegne vena cava å unngå variasjon i blodpropp størrelser og noen feil data tolkning. Vi har utviklet en ikke-invasiv metode for å måle blodpropp størrelse ved hjelp av ultrasonography. Bruker denne teknikken, kan vi vurdere blodpropp utvikling og oppløsning over tid i samme dyret. Dette begrenser antall mus kreves for kvantifisering av venous tromboser samsvar med prinsippet om erstatning, reduksjon og raffinement av dyr i forskning. Vi har vist at blodpropp vekt og histologiske analyse av blodpropp størrelse relatere til måling oppnådd med ultrasonography. Derfor beskriver denne studien hvordan å indusere dyp venetrombose i mus med dårligere vena cava stasis modellen og overvåke den bruker høyfrekvente ultralyd.

Stasis venetrombose modell
I stasis modellen, mus er anesthetized, og et snitt er gjort for å avsløre den underlegne vena cava (IVC). Snittet er gjort på venstre eller høyre side av musen i stedet for en midtlinjen laparotomy på en måte som ikke ville forstyrre den ultralyd proben. Magemusklene og huden er fold tilbake å avsløre IVC (figur 1). Først er sidegreiner samskreve...

Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Nåværende protokollen beskriver fremgangsmåten for å få venetrombose bruker stasis modell. I tillegg bruker vi en ikke-invasiv metode for å måle dannelse og oppløsning over tid.

Dyp venetrombose indusert av Stasis i mus overvåket av høyfrekvente Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Granulocytt-avhengige autoantistoffer-indusert Skin Blemmer

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Akselerert Type 1 Diabetes Induksjon i Mus ved Adoptive Overføring av diabetogenic CD4 + T celler

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induksjon av murine tarmbetennelse etter adoptiv overføring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Høy</sup&gt; T-celler i immundefekte mus

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Imaging Neutrofiler og monocytter i mesenterisk Veins av intraMikros på bedøvet Mus i sanntid

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Høy throughput Påvisning av respiratoriske patogener i dyr eksemplarer av nanoskala PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induksjon av lammelse og visuelle systemet skade i mus ved T-celler spesifikke for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Stenose dårligere Vena cava: en Murine modell av dyp venetrombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

Evaluering av blod laktat og Plasma Insulin under høyintensiv trening av Antecubital åre Catheterization

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Visualisere leukocytter rullende og vedheft i Angiotensin II-tilført mus: teknikker og fallgruver

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...