Name: quantification of intracellular growth inside macrophages is a fast and reliable method for assessing the virulence of leishmania parasites
Uploaded: 2018-03-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites at JoVE.com

Эта работа была поддержана национальными институтами здравоохранения грант RO1 AI067979 NWA. YK является получателем Бакалавриат стипендии от Говард Хьюз медицинский институт/Университет Мэриленд, Колледж Парк.

Все экспериментальные процедуры были проведены в соответствии с рекомендаций, содержащихся в руководстве для ухода и использования лабораторных животных, национальные институты здравоохранения и были одобрены IACUC университета штата Мэриленд. Все шаги, описанные в разделах с 1 по 4 дол...

Количественные данные, подготовленные пробирного BMM инфекции, описанных выше, позволяет следователям получить показатели инфицирования и надежного определения изменения вирулентности свойств в относительно короткий период времени (максимум 2 недели, по сравнению с 2 месяцев, необход?...

Лейшманиоз ссылается на широкий спектр человеческих заболеваний, вызванных простейших паразитов видов рода Leishmania. В настоящее время примерно 12 миллионов человек инфицированы лейшмании во всем мире, и более чем 350 миллионов подвергаются риску. Патологии болезни зависит от видов Leishmania и принимающих факторов, и симптомы варьируются от безобидных самовосстановления поражениях кожи смертоносных visceralizing формы. Если untreated, Висцеральный лейшманиоз является фатальным, рейтинг только после малярии как смертоносных болезней человека, вызванного инфекцией с простейших паразитов1. Несмотря на широкие различия в патологии заболеваний и симптомов всех видов Leishmania имеют жизненный цикл digenic, чередуя Промастиготы и amastigote этапов внутри насекомых и позвоночных хозяев, соответственно. Внутри позвоночных, лейшмании целевой хост макрофагов для вторжения и вызвать образование parasitophorous вакуоли (PVs), кислой отсеков с свойства фаголизосомах скопирована Высоко вирулентным amastigote формы. Amastigotes сохраняется в тканях хост во время хронической инфекции и может быть передан на неинфицированных москитов, завершая цикл передачи. Таким образом в контексте развития болезней человека, amastigotes являются наиболее важным лейшмании жизненного цикла формы2. Расследование, как amastigotes репликацию внутри макрофагов PVs имеет решающее значение для понимания лейшмании вирулентности3,4,5,6,7 и для Разработка новых эффективных терапии.
Здесь мы описываем метод регулярно используется в нашей лаборатории для изучения лейшмании инфекции и репликации в костный мозг производные макрофагов (BMMs), который включает количественную оценку числа внутриклеточных лейшмании со временем. Этот процесс включает сбор моноциты из костного мозга мыши и дифференцировку макрофагов в культуре, в vitro инфекцию с инфекционный формы (metacyclic promastigotes или amastigotes) Leishmania и количественной оценки количество внутриклеточных паразитов в каждом интервале 24 ч в течение 72-96 ч после инфицирования. В нашей лаборатории был использован этот assay для определения влияния нескольких экологических факторов и паразита генов, включая определение критической роли железа в содействии вирулентности L. amazonensis , который был также подтвержден зверолов исследований развития поражения в мышей6,8,9,10,11,12,13,14,15 . Поскольку все патогенных видов Leishmania установить их репликативной нишу внутри узла макрофагов, этот assay может использоваться универсально для вирулентности определений всех видов Leishmania .
Выполнение BMM инфекций позволяет анализ основ паразито хозяинных взаимодействия на уровне отдельной ячейки и таким образом более широкое понимание как лейшмании паразитов взаимодействуют с их предпочтительным разместить микроокружения, PVs макрофагов. Макрофагов инфекцией assays успешно использовались несколько групп16,17,18,19,20,,2122 для изучения функции принимающей макрофагов и лейшмании специфических генов и их возможного участия в сложное взаимодействие, которое характеризует внутриклеточную инфекцию. БММ инфекции позволяют квантификации роста паразита как считывание влияния принимающей факторов, которые влияют внутриклеточных выживания, как производство оксида азота бактерицидных, генерации активных форм кислорода и других неблагоприятных условий с которыми внутри Лизосома как PVs23. Макрофагов инфекции анализов также были использованы для выявления потенциальных наркотиков приводит анти leishmanial для терапевтических развития13,24.
В vitro характер BMM инфекций обеспечивает несколько преимуществ перед другими методами для оценки лейшмании вирулентности. Однако несколько предыдущих исследований, изучения механизмов выживания внутриклеточный паразит со временем не количественно инфекции как ставка20,21,24. Кроме того многие исследования сосредоточены на после инфекции в естественных условиях со временем сделал это путем измерения размера кожные поражения и другие физиологические симптомы, которые лишь косвенно связаны с паразитом репликации25,26 , 27. в естественных условиях инфекции является строгий подход к оценке вирулентности возбудителя, но поражения размер измерения на основе зверолов, опухоль в одиночку часто являются неадекватными, поскольку они отражают воспалительной реакции в инфицированных тканях и не абсолютное количество паразитов. По этой причине развитие поражения зверолов анализов должны сопровождаться количественная оценка нагрузки паразита в инфицированных тканях, процедура, которая требует продолжительного ограничения разрежения assays28. Кроме того в vivo исследования часто связаны, жертвуя несколько животных в различные моменты времени для извлечения тканей интерес6,,8,9,,10, 11 , 13. В отличие от этого, большое количество BMMs могут быть получены только одно животное, и эти клетки могут быть покрытие в условиях, которые позволяют оценку инфекции в различные моменты времени. Кроме того по сравнению с в vivo исследований, выполняя в vitro BMM инфекций позволяет больший контроль над экспериментальных условиях. Количественная оценка макрофаги быть инфицированы наряду с паразитами, сами позволяет точный контроль кратности инфекции (МВД) и условий, культуры. Точный контроль над этими факторами могут быть ключом в определении характеристики дискретных сотовой пути и в понимании их влияния на ход инфекции.
С учетом этих преимуществ, это несколько удивительно, что очень немногие группы изучения лейшмании вирулентности пока полной мере воспользовались количественной оценки внутриклеточных репликации в макрофагах. В этой статье мы обсудим распространенных ошибок, которые могут быть затрудняет более широкое использование этот assay и предоставляют пошаговые протокол для облегчения ее надлежащего осуществления. Учитывая ее точность и универсальность пробирного BMM инфекции, которую мы опишем здесь могут не только быть использованы для изучения взаимодействия хост патогена, влияющие на лейшманий вирулентности, но и для изучения других микроорганизмов, которые реплицируют внутри макрофаги29. Важно отметить, что этот assay также могут быть разработаны как метод быстрый и экономичный доклинические скрининга для анти leishmanial разработки лекарственных препаратов.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipet Tips (100-1000 &#956;L)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-707-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipet Tips (20-200 &#956;L)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-707-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipet Tips (2-20 &#956;L)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-707-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bard-Parker Rib-Back Carbon Steel Surgical Blade #10</td>
			<td>Aspen Surgical</td>
			<td>371110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Tip 10 mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Precisionglide Needle, 25G&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td>305124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dish 35 mm x 10 mm</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>627 160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Flask</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>660175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glasses: 12 mm circles</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-545-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Biotin</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>C272-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol 200 proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 100 mm x 15 mm non-TC-treated polystyrene Petri dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll400</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>E200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG Texas red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T-862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG AlexaFluor488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemin</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co. LTD</td>
			<td>H0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoton II Diluent</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8546719</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199 (10X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11825-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (-/-)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14200166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropyline conical Centrifuge Tubes 15 mL</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>188 271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropyline conical Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td>Cellstar</td>
			<td>227 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold antifade reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-mouse Lamp-1 antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>1D4B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human M-CSF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reichert Bright-Line&#160; Hemocytometer&#160;</td>
			<td>Hausser Scientific</td>
			<td>1492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 Surfactant</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>TX1568-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Scissors, 4 1/2&#34;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Forceps, Fine Tip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z1 Coulter Particle Counter, Dual Threshold</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>6605699</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of intracellular growth inside macrophages is a fast and reliable method for assessing the virulence of leishmania parasites

Жизненный цикл лейшманий, возбудителя лейшманиоз, попеременно Промастиготы и amastigote этапов внутри насекомого и позвоночных хозяев, соответственно. Хотя патогенные симптомы лейшманиоза может широко варьировать, от доброкачественных кожных высоко смертельным заболеванием висцеральных форм в зависимости от видов инфекционный, всех видов Leishmania находятся внутри узла макрофаги этапе позвоночных их жизненный цикл. Таким образом, лейшмании инфективности напрямую связана с его способность вторгнуться, выжить и воспроизвести в пределах parasitophorous вакуоли (PVs) внутри макрофагов. Таким образом оценки паразита возможность реплицировать внутриклеточно служит надежный метод для определения вирулентности. Изучение развития лейшманиоз, с использованием животных моделей является длительным, утомительно и часто трудно, особенно с разработаны патогенетически важные висцеральные формы. Здесь мы описываем методологии следовать внутриклеточных развитие лейшманий в костный мозг производные макрофагов (BMMs). Внутриклеточный паразит чисел определяются интервалом 24 ч для 72-96 h после инфицирования. Этот метод позволяет для надежного определения воздействия различных генетических факторов на лейшманий вирулентности. В качестве примера мы покажем, как исключить один аллель гена лейшмании митохондриальной железа транспортера (LMIT1) ухудшает способность мутантный штамм лейшмании amazonensis LMIT1/ΔLmit1 расти внутри BMMs, отражая резкое сокращение в вирулентности, по сравнению с одичал типа. Этот assay также позволяет точно контролировать экспериментальных условиях, которые могут управляться индивидуально для анализа влияния различных факторов (питательные вещества, реактивнооксигенных видов, и т.д.) на хост возбудитель взаимодействия. Таким образом соотвествующего исполнения и количественной оценки BMM инфекции исследования обеспечивают неинвазивный, быстрым, экономичным, безопасный и надежный альтернативу обычным животной модели исследования.

Лейшмании имеет две формы инфекционный - metacyclic promastigotes, что дифференцировать от procyclic promastigotes на стационарном этапе культуры и amastigotes, которые являются внутриклеточные стадии (рис. 1). В некоторых видов Leishmania , таких как л amazonensisamastigotes может т...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites at JoVE.com

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

Все патогенных видов Leishmania проживают и репликацию внутри макрофагов их позвоночных хозяев. Здесь мы представляем протокол заразить мышиных макрофаги костного мозга, полученных в культуре с лейшманий, следуют точную количественную оценку роста внутриклеточных кинетики. Этот метод полезен для изучения отдельных факторов, влияющих на взаимодействие хост возбудителя и лейшмании вирулентности.

Количественная оценка внутриклеточных роста внутри макрофагов является быстрый и надежный метод оценки вирулентности лейшмании паразитов

The lifecycle of Leishmania, the causative agent of leishmaniasis, alternates between promastigote and amastigote stages inside the insect and vertebrate ...

The overall goal of this experiment is to assess the virulence of various Leishmania strains through the infection of murine bone marrow-derived macrophages in vitro, and the subsequent quantification of parasite intracellular growth kinetics. This method can help us answer key questions about the factors from both the host's macrophage and the pathogen that determine the virulence of the infective Leishmania parasites. The main advantage of this technique is that it is a fast, economic, and reliable method that require significantly fewer animals, compared to in vivo studies.The implications of this technique extend toward the therapy of Leishmaniasis, as it can be used to assess the infectivity of mutated Leishmania strains, or the efficacy of therapeutic compounds. Visual demonstration of this method is critical, as the bone marrow-derived macrophage isolation and intracellular parasite quantification steps are difficult to learn from written protocols alone. Begin by securing a four to six week old female mouse to a dissection board, and disinfecting the animal with 70%ethanol.Use scissors to make a one centimeter incision near one hip joint and cut the skin all the way around the joint. Pull the skin from the leg toward the ankle to carefully deglove the limb, and cut off the foot at or below the ankle joint to leave the tibia in tact. To locate the hip joint, manipulate the femur to identify the point of rotation, and use the scissors to sever the leg above the hip joint, leaving the proximal head of the femur in tact.Remove as much muscle and connective tissue from the leg as possible, and place the cleaned bones in Petri dish containing sterile RPMI supplemented with antibiotics on ice. After harvesting the second set of leg bones, use sterilized forceps and a number ten blade to remove any remaining muscle and connective tissue. Transfer the cleaned bones to an empty Petri dish lid, and use the scalpel to remove both ends of each tibia to access the marrow.Using forceps, place one tibia over the mouth of a 50 milliliter conical tube on ice, and insert the tip of a 25 gauge needle attached to a 10 milliliter syringe filled with mediums supplemented with antibiotics into one end of the tibia. Flush approximately five to 10 milliliters of medium through the bone into the conical tube until all of the red bone marrow tissue has been harvested and the bone appears white. When all of the marrow has been collected, centrifuge the pooled bone marrow, and re-suspend the bone marrow cell palette in five milliliters of bone marrow-derived macrophage medium.Transfer the bone marrow cell suspension into a 175 square centimeter cell culture flask containing 60 milliliters of sterile bone marrow-derived macrophage medium, and rinse the tube two times with medium from the culture flask to ensure maximal cell recovery. After the second wash, transfer a 30 milliliter aliquot of cells into a second 175 square centimeter cell culture flask, and close each flask with a filter cap. Then, incubate both cultures overnight at 37 degrees Celsius and 5%carbon dioxide to allow separate of the resident macrophages from any contaminating fibroblasts or other adherent cells.The next morning, transfer 10 milliliters of undifferentiated bone marrow cell-containing supernatant from each flask into individual 100 by 15 millimeter non-tissue culture treated polystyrene Petri dishes, and return the cells to the cell culture incubator for two to three more days. Then, feed the cultures with five milliliters of fresh 37 degree Celsius bone marrow-derived macrophage medium per dish, and return the plates to the incubator. On day seven or eight after culture, use an aspirating tip fitted to a vacuum line to transfer four autoclave sterilized 12 millimeter glass cover slips to the bottom of each well of a six well culture plate without overlapping.Prepare identical plates for each time points of the experiment. Next, wash the bone marrow-derived macrophage cultures two times with fresh 37 degree Celsius PBS and five milliliters of PBS without calcium and magnesium supplemented with one millimolar EDTA to each plate. After five minutes at 37 degrees Celsius, pool the detached cells in a 50 milliliter conical tube, rinsing each plate two times with an additional five milliliters of PBS without calcium and magnesium.After centrifugation, re-suspend the macrophages in five to 10 milliliters of fresh bone marrow-derived macrophage medium on ice. After counting, dilute the cells to five time 10 to the fifth per milliliter concentration in fresh bone marrow-derived macrophage medium, and add two milliliters of cells per well to the six well plate. Then, incubate the cells overnight in the cell culture incubator.To infect the cells with L.amazonesis, dilute the parasite suspension to the appropriate experimental multiplicity of infection, and add 50 to 100 microliters of parasites to each well of all six well plates, including all time points of the experiment. Incubate the bone marrow-derived macrophages for the appropriate infection period and temperature. Then, wash the wells three times with two milliliters of fresh 37 degree Celsius PBS without calcium or magnesium per well, and fix the initial time point samples with 1.5 to 2 milliliters of 2%paraformaldehyde for 10 minutes.For the plates corresponding to the later time points, add two milliliters of fresh bone marrow-derived macrophage medium to each well, and return the plates to the appropriate incubator. Then, fix and wash the cells for each of the remaining time point, as just demonstrated, and store the samples at four degrees Celsius in fresh PBS. To stain the cells with DAPI, replace the supernatant with 1.5 milliliters of fresh PBS without calcium and magnesium, supplemented with 0.1%non-ionic detergent for 10 minutes at room temperature, followed by three two milliliter washes with PBS without calcium or magnesium.Next, stain the cells with two micrograms per milliliter of DAPI in one milliliter of PBS for one hour at room temperature. After three washes, place the cover slips cell side down onto individual glass microscope slide mounted with a commercially anti-fade mounting reagent. Then, to quantify the number of infected cells, use the 100x emersion oil objective of a fluorescence microscope and a manual counter to identify the number of smaller amastigote nuclei clustered around each large DAPI stained nucleus.Leishmania has two infective forms, metacyclic promastigotes, which differentiate from procyclic promastigotes at the stationary phase of culture, and amastigote, the intracellular infective form found within the vertebrate host. Here, axenically differentiated amastigotes can be visualized within a bone marrow-derived macrophage one hour after the initial infection and before the formation of parasitophorous vacuoles via phagolysosomal fusion. At 48 hours, distinct large parasitophorous vacuoles harboring multiple parasites can be observed, characteristic of a virulent Leishmania infection.Non-virulent log phase promastigotes, in contrast, are unable to initiate parasitophorous vacuole development, fail to replicate, and are eventually killed within host macrophages. In this experiment, a steady increase in the number of intracellular wild type metacyclic Leishmania parasites was observed up to 72 hours after infection, while little to no intracellular growth for mutant parasites with a impaired mitochondrial iron import was measured, suggesting that mitochondrial activity is required for parasite growth within macrophages. Macrophage infections carried out with wild type and mutant axenic amastigotes showed an intracellular growth pattern similar to that observed with metacyclic promastigotes, but with an even higher wild type parasite infectivity than seen from metacyclic promastigotes.It is important to note that there is an initial 24 hour delay for metacyclic promastigote infections, representing the time required for internalized metacyclic promastigotes to first differentiate into amastigotes before beginning to replicate. Once mastered, this technique can be completed in 15 days if it is performed properly. While attempting this procedure, it's important to use the appropriate mouse strains and to perform careful quantification of both the macrophage and parasite cells to ensure consistent MOIs across all experiments.After watching this video, you should have a good understanding of how to culture bone marrow-derived macrophages and to infect them with Leishmania for quantification of their intracellular parasite growth, following nuclear staining with DAPI. Don't forget that working with Leismania can be extremely hazardous, and that precautions, such as using a biological safety cabinet, and personal protective equipment, and avoiding sharp instruments should always be taken while performing this procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Intracellular Growth Inside Macrophages is a Fast and Reliable Method for Assessing the Virulence of Leishmania Parasites

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

В естественных изображений трансгенных Паразиты Leishmania в реальный хост

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

Протокол по производству Генетические Креста Паразиты грызунов малярией

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

Анализ паразитов спасению и преобразованию Antileishmanial для скрининга против внутриклеточных<em&gt; Leishmania donovani</em&gt; Amastigotes в THP1 человека Острые линии моноцитов клеточной лейкемии

Leishmaniasis is  one of the world's most neglected diseases, largely affecting the  poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Создание<em&gt; В пробирке</em&gt; Система по изучению внутриклеточных Поведение<em&gt; Candida glabrata</em&gt; В человека ТНР-1 макрофагов

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

A Microscopic Phenotypic Assay for the Quantification of Intracellular Mycobacteria Adapted for High-throughput/High-content Screening

Микроскопический фенотипический анализ для количественной оценки внутриклеточных микобактерий, адаптированных для скрининга с высокой пропускной способностью/высоким содержанием

Despite the availability of therapy and vaccine, tuberculosis (TB) remains one of the most deadly and widespread bacterial infections in the world. Since ...

Monitoring the Assembly of a Secreted Bacterial Virulence Factor Using Site-specific Crosslinking

Мониторинг Ассамблею секретируемым бактериального вирулентности фактор Использование сайт-специфической сшивания

This article describes a method to detect and analyze dynamic interactions between a protein of interest and other factors in vivo. Our method is based on ...

ScanLag: High-throughput Quantification of Colony Growth and Lag Time

ScanLag: Высокая пропускная Количественная оценка колонии роста и время запаздывания

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

Применяя INDUCIBLE системы экспрессии для изучения помех бактериальных факторов вирулентности с внутриклеточной сигнализации

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

Определение маркеров вирулентность микобактерий abscessus для внутриклеточного репликации в фагоцитов

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

In Vivo Infection with Leishmania amazonensis to Evaluate Parasite Virulence in Mice

In Vivo Infection with Leishmania amazonensis to Evaluate Parasite Virulence in Mice

В Vivo инфекции с Лейшмания amazonensis для оценки паразитов virulence у мышей

Leishmania spp. are protozoan parasites that cause leishmaniases, diseases that present a wide spectrum of clinical manifestations from cutaneous to ...