Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

هذا العمل وأيده العاملة المنح المقدمة من مؤسسة سافوي ومؤسسة الصرع علاج بمعدات المنح المقدمة من "المؤسسة الكندية" للابتكار إلى أ (مجهر [كنفوكل]) و G.H (الغزل القرص مجهر [كنفوكل]). الطوارىء يستلم جائزة مهنة من Fonds de بحوث دو كيبيك والصحة (فرق-S; جائزة كلينيسيانسسينتيست) كذلك من "المعاهد الكندية" "البحوث الصحية" (استوفوا؛ جائزة الشباب الباحث). الزمان أحد علماء كبار فرق-س. جنيه مصري من جائزة التدريب ما بعد الدكتوراه ستيريادي-سافوي من "مؤسسة سافوي"، مؤسسة سانت جوستين تشو التدريب ما بعد الدكتوراه والجائزة دا فرق التدريب ما بعد الدكتوراه، في شراكة مع "مؤسسة النجوم". هذا المشروع قد أصبح ممكناً الدماغ في كندا من خلال "الصندوق الكندي لأبحاث الدماغ"، بدعم مالي من وزارة الصحة الكندية، منحت إلى جنيه.

جميع التجارب التي تنطوي على الحيوانات قد وافقت ليه avec الممارسات المنازل des إينستيتوتيونيل لجنة البحوث الحيوانات الأليفة (سيببار) في مركز أبحاث سانت جوستين تشو وأجريت وفقا "المجلس الكندي" دليل "رعاية الحيوان" رعاية واستخدام الحيوانات التجريبية (الطبعة 2).
البروتوكول هو موضح ه...

في هذه المقالة، نحن نقدم وسيلة موثوق بها لأداء السابقين الرحم انهانسر الماوس MGE في e13.5 وتوليد أورجانوتيبيك ثقافات شرائح الدماغ الجنينية. على الرغم من أن في المختبر أساليب، مثل المقايسة الدائرة Boyden, هي سهلة نسبيا لتنفيذ، ويمكن استخدامها لتقييم الأدوار المحددة لمختلف الجينات والب...

إينتيرنيورونس جابايرجيك القشرية (INs) متنوعة فيما يتعلق بخصائصها البيوكيميائية، الخصائص الفسيولوجية والربط، والتوسط في وظائف مختلفة في الشبكات ناضجة1،2،3 ،،من45. مواصفات أنواع فرعية مختلفة من وظائف القشرية محكم ينظم من خلال الشلالات الوراثية التي تم دراستها على نطاق واسع1،2. غالبية الوظائف جابايرجيك القشرية (70 في المائة) تنشأ من فروعه في نيافة ganglionic الآنسي (MGE)، بنية جنينية تقع بطنيا، ويجب ترحيل عبر مسافات طويلة نسبيا للوصول إلى لوحة القشرية1، 2 , 6-في حين تهاجر الخلايا الهرمية القشرية إشعاعيا من منطقة البطين (VZ) إلى لوحة القشرية على طول سقالة إطلاق شعاعي، هجرة عرضية من الوظائف، التي هي لم تعلق على هذه سقالة، يتطلب مجموعة متنوعة من الجوهرية و الرموز الخارجية لجذب الخلايا العصبية ترحيل نحو لوحة القشرية، بينما توجه لهم بعيداً عن هياكل غير القشرية2،،من78. بعد إنهاء دورة الخلية، وظائف هي صده من MGE الكيماوي الاشمئزاز العظة أعرب داخل VZ MGE، الذي يشغل الهجرة عرضية نحو9،القشرية اللوحة10. ترحيل الوظائف تجنب المخطط مع المعونة من منبهات مختلفة مثيرة للاشمئزاز11 ، وبعد أن وصلت إلى لوحة القشرية، أنهم التبديل من عرضية إلى وضع هجرة شعاعي وتصل إلى مركزها الصفحي النهائي، جزئيا في استجابة لمنبهات من الهرمية خلايا12 وسائر السكان الخلوية13. هجرة الوظائف، أما بالنسبة لسائر السكان الخلايا العصبية، يشمل مختلف التغييرات الشكلية الدينامية للسماح بالحركة الفعلية للخلايا العصبية. تتميز هذه الحركة العصبية ما يسمى بدورات متكررة من ثلاث خطوات متتالية: استطالة عملية رائدة، حركة نشطة أنتيروجرادي من النواة (نوكليوكينيسيس)، والتراجع عن عملية زائدة14. في الهجرة وينظم العديد من الإشارات الذاتية والخارجية التي محرك المتفرعة ويعيد البناء النشط لعملية رائدة لتوجيه الوظائف في الاتجاه السليم، تحديد اتجاه وسرعة الهجرة14،15 ،16.
وقد درست المحددات تنظم القشرية في الهجرة على نطاق واسع في السنوات الأخيرة1،2،7،17،18،،من1920، وقد تم افترض تعطل في بعض هذه الجهات الفاعلة الجزيئية يؤدي إلى الاضطرابات النمائية، مثل طب الأطفال صهر الصرع أو التوحد طيف اضطرابات1،2،21، 22 , 23 , 24-ولذلك سعى تطوير مختلف النهج في المختبر و في فيفو تقدم كبير في قدرتنا على دراسة هذه العملية الدينامية، ب استعراضها في السابق25. أساليب في المختبر ، بما في ذلك مقايسة الدائرة Boyden و "المقايسة خيار شريطية"، توفير الوسائل الأسرع والأكثر استنساخه من تقييم الشرط وخلية مستقلة من جينات معينة أو بروتينات أثناء الهجرة العصبية، دون تأثير العوامل الأخرى25. هذه الاختبارات مفيدة بشكل خاص عندما جنبا إلى جنب مع تصوير يعيش8،،من2627. مع هذه التقنيات، هي وظائف بسهولة استرجاعها من e13.5 MGE ومعزولة من جراء تفكك الانزيمية والميكانيكية، بعد الذي يمكن أن يحقق في مسارات إشارات مختلفة ورموز التوجيه، كما هو موضح سابقا8،28 . ومع ذلك، تجري هذه الاختبارات في مصفوفة خارج الخلية اصطناعية في غياب بنية الأنسجة الثلاثية الأبعاد، التي قد تغير من خصائص السلوك والخلايا العصبية، يحتمل أن تؤثر على خلية الهجرة و/أو بقاء25. وقد وضعت explants MGE السابقين فيفو للتحايل على هذه القيود، كأداة بديلة لقياس التغيرات المورفولوجية الدينامية التي تحدث أثناء الترحيل جنبا إلى جنب مع المعلمات مثل سرعة واتجاه14، 29. توليد MGE explants بسيط نسبيا، وقد تم على نطاق واسع الوارد وصفها في أماكن أخرى من30. ويترتب عليها الطلاء من خلاصة صغيرة من MGE في أحادي الطبقة الخلايا القشرية المختلطة أو في مزيج من ماتريجيل والكولاجين حضور25من منبهات جذابة أو مثيرة للاشمئزاز، على الرغم من أن هذه الأخيرة هي اختيارية31. MGE explants تسمح بدقة عالية التصوير للخلايا المسماة قليلة، وتبسيط دراسة العمليات داخل الخلايا، مثل إعادة عرض cytoskeletal أثناء العملية الرائدة التفريع، كما هو موضح سابقا33 32، ،34 وفي هذه الدراسة. MGE explants قد استخدمت بنجاح لتقييم التغيرات cytoskeletal ديناميكية خلال في الهجرة في بيئة ثنائية الأبعاد، على سبيل المثال بعد المعالجات الدوائية أو تشيموتاكتيك محددة (انظر، على سبيل المثال، تيلينس et al. عام 201633) . ومع ذلك، مع هذا النهج، ترحيل الوظائف داخل مصفوفة مصطنعة، وهذا قد تغير في السلوك، وإمكانية تكرار نتائج وأهمية النتائج التجريبية.
على النقيض من ذلك، يسمح التلاعب بالجينات للوظائف في بيئتها الأصلية في الرحم انهانسر وهو أسلوب مستخدمة على نطاق واسع لسرعة وكفاءة تقييم أثر اكتساب وفقدان وظيفة الجينات بينما التحايل على القيود المفروضة على خروج المغلوب مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً وتدق في استراتيجيات25،35. انهانسر في الرحم يمكن أن تكون منحازة في فروعه باستخدام نوع الخلية المروجين محددة ووضع أقطاب كهربائية نحو الهياكل فينتروميديال، بما في ذلك MGE36. وعلاوة على ذلك، في الرحم انهانسر يسمح للتعبير المناسب عن الثوابت التجريبية في غضون أيام 1-2، بالمقارنة مع 7-10 أيام المطلوبة لبناء التعبير استخدام الفيروسية متجهات25. ومع ذلك، في الرحم انهانسر من فروعه يميل إلى أن يكون المنخفضة الغلة. في الواقع، على الرغم من أن يمكن تكون transfected الخلايا الهرمية فروعه الموجودة في منطقة البطين الظهرية كفاءة استخدام في الرحم انهانسر، تستهدف الهياكل تقع أكثر بطنيا، مثل MGE، هو أكثر من الناحية الفنية تحديا، لا سيما في e13.5 الصغيرة يقلل الأجنة، وارتفاع معدل الفتك الجنينية زيادة الغلة التجريبية25.
للالتفاف حول بعض القيود الفنية المرتبطة في المختبر MGE explant التجارب و في فيفو في الرحم انهانسر، تم السابقين فيفو أورجانوتيبيك شريحة الثقافات المتقدمة8،37، ،من 3839. المخ أورجانوتيبيك عرض الثقافات شريحة شروط الاستفادة من محاكاة في فيفو ، رغم أنها أقل تكلفة واستهلاكا للوقت مما الحيوان توليد نماذج25. في الواقع، هذه التحضيرات تسمح سهولة وصول إلى MGE، جنبا إلى جنب مع التصور محددة من الوظائف، ويمكن دمجها مع انهانسر المحورية للتحقيق في مسارات جزيئية محددة في ترحيل في بيئة فيزيولوجية أكثر8 وظائف , 39 , 40 , 41-أننا قد الأمثل ولذلك نهج من أجل أورجانوتيبيك الثقافات38، التي نحن جنبا إلى جنب مع انهانسر الرحم السابقين والوقت الفاصل بين التصوير [كنفوكل]، لمواصلة تقييم حدوث عملية دينامية والمورفولوجية أثناء الهجرة عرضية ل MGE الإضافية. تم تكييف هذا البروتوكول والأمثل من الآخرين الذين استخدموا الرحم السابقين أو في الرحم المخ انهانسر أورجانوتيبيك شريحة الثقافات ودراسة هجرة الخلايا الهرمية42،43 و القشرية الإضافية36،،من3944. على وجه التحديد، الأجنة الماوس يتم قطع رأسه و MGE اليكتروبوراتيد السابقين فيفو بعد حقن داخل البطيني والبلازميدات التجريبية، مما يسمح أكثر كفاءة ودقة استهداف MGE موروث من ما يمكن تحقيقه مع انهانسر في الرحم . ثم يتم استخراج العقول ومقطوع إلى شرائح الاكليلية الدماغ الجامع الذي يمكن أن يكون مثقف لبضعة أيام، مما يتيح استمرار تتبع والتصوير من الوظائف ترانسفيكتيد. وهذا النهج عادة تسميات الوظائف عرضية ترحيل 5-20 كل شريحة الدماغ، تقليل عدد مرات التكرار التجريبية اللازمة للتوصل إلى دلالة إحصائية، بينما وصف سكان العصبية متفرقة بما فيه الكفاية لضمان سهولة فصل الخلايا العصبية الفردية لإعادة الإعمار وتقييم الخصائص المورفولوجية غرامة. وعلاوة على ذلك، مقارنة ب explants MGE، أورجانوتيبيك الثقافات ضمان أن ترحيل الوظائف يتعرض لبيئة أكثر طبيعية، بما في ذلك المستقطبات يفرز محلياً والمدخلات من أفيرينتس ثالاميك. وهذا النهج هكذا مناسبة تماما لتحديد اتجاه ومسار الهجرة اعتمدته transfected الإضافية، بينما تقدم التفاصيل التشريحية كافية للسماح لتوصيف أدق العمليات الحيوية مثل رائد عملية التفريع، نوكليوكينيسيس وتراجع عملية زائدة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

جابايرجيك إينتيرنيورونس (INs) هي عناصر حاسمة للشبكات العصبية التي تدفع الإدراك والسلوك. الوظائف الموجهة لملء القشرة ترحيل عرضية من موطنهم الأصلي في تيلينسيفالون البطني (بما في ذلك من امينينسيس ganglionic الآنسي ووالذيليه (MGE، فريق الخبراء الاستشاري)) إلى لوحة القشرية الظهرية في الاستجابة لمجموعة متنوعة من الذاتية والخارجية العظة. وقد وضعت منهجيات مختلفة على مر السنين التلاعب بمسارات محددة وراثيا والتحقيق في كيفية تنظيم ديناميكية cytoskeletal التغييرات المطلوبة للسليم في الهجرة. في الرحم انهانسر قد استخدمت على نطاق واسع لدراسة تأثير الجينات القمع أو الأنواع الفرعية overexpression في محددة في حين تقييم الأثر على مورفولوجيا والموقف النهائي. ومع ذلك، رغم سهولة استخدام هذا النهج لتعديل الخلايا الهرمية ترحيل إشعاعيا، أنه أكثر من الناحية الفنية يتحدى عند استهداف انهانسر INs. في الرحم يولد عائد منخفض نظراً لمعدلات البقاء على قيد الحياة انخفضت من الجراء عندما ويجري انهانسر قبل e14.5، كما هي العادة عند دراسة الإضافية المستمدة من MGE. في نهج بديل، توفير إمكانية وصول سهلة إلى MGE MGE explants وتسهيل تصوير وظائف معدلة وراثيا. بيد في هذه اكسبلانتس، ترحيل الوظائف داخل مصفوفة مصطنعة، تخلو من إشارات التوجيه الذاتية والمدخلات ثالاميك. هذا ما حدا بنا إلى تحسين أسلوب حيث يمكن ترحيل الإضافية في بيئة أكثر طبيعي، بينما التحايل على التحديات التقنية في الرحم النهج. في هذه الورقة، ويصف لنا مزيج انهانسر الرحم السابقين من أدمغة الفأر الجنينية متبوعاً أورجانوتيبيك شريحة الثقافات سهولة تعقب والصورة وإعادة بناء الوظائف المعدلة وراثيا ترحيل على طول مساراتها الطبيعية استجابة الرموز الذاتية. ويسمح هذا النهج لكل التقدير الكمي لجوانب حيوية في الهجرة مع الوقت الفاصل بين التصوير [كنفوكل]، فضلا عن تحليل مفصل لمختلف المعايير المورفولوجية استخدام الخلايا العصبية عمليات إعادة البناء في الأنسجة إيمونولابيليد الثابتة.

في هذا القسم، نحن نقدم الممثل النتائج التي تم الحصول عليها عقب انهانسر الرحم السابقين بلازميد تحكم، أو بلازميد تجريبية استهداف جين اهتمام، في MGE أجنة الفأر e13.5 تليها أورجانوتيبيك شريحة الثقافات المحتضنة في 37 درجة مئوية ح 48 (للتصوير بمرور الزمن) أو ح 72 (للتثبيت والوسم ...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

الرحم السابقين انهانسر والثقافات أورجانوتيبيك شريحة من أدمغة الفأر الجنينية للعيش-التصوير لترحيل إينتيرنيورونس جابايرجيك

هنا، نحن نقدم طريقة منخفضة التكلفة وموثوق بها لتوليد اليكتروبوراتيد الدماغ أورجانوتيبيك شريحة الثقافات من أجنة الفأر مناسبة للفحص المجهري [كنفوكل] وتقنيات التصوير العيش.

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

عضوي النمط الثقافات شريحة الحصين

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

فأر في الرحم Electroporation : الشواهد ترنسفكأيشن جين Spatiotemporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

الثقافات شريحة عضوي النمط من المخ الأوسط بطني الجنينية : نظام لدراسة التنمية متعلق بالخلايا العصبية الدوبامينية في المختبر</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

على تحليل من الخليوي بركينيي علم الصرف شجيرى في الثقافات شريحة عضوي النمط

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

توسيع الجنينية والكبار الخلايا الجذعية العصبية من قبل<em&gt; في الرحم</em&gt; الصعق الكهربائي أو حقن التجسيمي الفيروسية

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

-النوع الفرعي انتقائية Electroporation للمن القشرية Interneurons

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

الثقافات شريحة عضوي النمط لدراسة ديناميات دبقية قليلة التغصن وتكون الميالين

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

الوقت الفاصل بين التصوير متحد البؤر من الخلايا العصبية المهاجرة في شريحة عضوي نمط ثقافة الفأر الجنينية باستخدام الدماغ<em&gt; في أوتيرو</em&gt; إليكتروبوراتيون

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

إعداد و Immunostaining أورجانوتيبيك ميليناتينج شريحة الدماغ الثقافات

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...