Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af driftstilskud fra Savoy Foundation og kur epilepsi Foundation og af udstyr tilskud fra den canadiske Foundation for Innovation til E.R (Konfokal mikroskop) og G.H (spinning disk Konfokal mikroskop). E.R. modtager en karriere award fra den Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQ-S; Clinician-Scientist Award) samt fra den canadiske institutter for sundhedsforskning (CIHR; Unge Investigator Award). Niels er en ledende lærd af FRQ-S. L.E er modtageren af Steriade-Savoy postdoc training award fra Savoy Foundation, CHU Sainte-Justine Foundation postdoc training award og FRQ-S postdoc training award, i partnerskab med instituttet stjerner. Dette projekt er blevet gjort muligt af hjernen Canada gennem Canada Brain Research Fund, med økonomisk støtte fra Health Canada, tildeles Le

Alle eksperimenter, der involverer dyr blev godkendt af Comité Institutionnel des macarons Pratiques avec les Animaux de Recherche (CIBPAR) på CHU Sainte-Justine Research Center og blev gennemført i overensstemmelse med den canadiske Rådet på Animal Care guide til Pleje og brugen af forsøgsdyr (udg. 2).
Protokollen beskrevet her var optimeret til elektroporation embryoner på embryonale dag (e) 13,5, på et tidspunkt når MGE-afledte INs er aktivt genereres, før peak af CGE-afledte INs ...

I denne artikel leverer vi en pålidelig metode til at udføre ex utero elektroporation mus MGE på e13.5 og for generation af organotypic kulturer af embryonale hjernen skiver. Selv om in vitro- metoder, såsom Boyden kammer Assay, er relativt nemme at udføre og kan bruges til at vurdere forskellige gener og proteiner uden indblanding af andre faktorer, specifikke roller, udelukker de undersøgelse af IN migration dynamics med hensyn til retningslinier og migration vej25. MGE e...

Kortikale GABAergic interneurons (INs) er forskellige med hensyn til deres biokemiske egenskaber, fysiologiske egenskaber og tilslutningsmuligheder, og de mægle forskellige funktioner i modne netværk1,2,3 ,4,5. Specifikationen af forskellige undertyper af kortikale INs er tæt reguleret gennem genetisk cascades, der er blevet grundigt undersøgt1,2. Størstedelen (70%) af kortikale GABAergic INs stammer fra stamfaderen i den mediale ganglionære eminence (MGE), en ventrally placeret embryonale struktur, og skal overflytte over relativt lange afstande for at nå den kortikale plade1, 2 , 6. mens kortikale pyramideformet celler vandrer radialt fra den ventrikulære zone (VZ) til kortikale pladen langs den radiale glia stillads, tangerer migration af INs, som ikke er knyttet til sådan et stillads, kræver en række iboende og extrinsiske stikord at tiltrække overflytter neuroner mod den kortikale plade, mens vejlede dem fra ikke-kortikale strukturer2,7,8. Efter spændende cellecyklus, INs er frastødt fra MGE af kemo-frastødende stikord udtrykt i VZ af MGE, der udløser tangential migration mod kortikale plade9,10. Migrere INs undgå striatum ved hjælp af forskellige frastødende stikord11 og, efter at nå det kortikale plade, de skifter fra en tangent til en radial migration og nå deres endelige laminar holdning, dels som reaktion på signaler fra pyramide celler12 og andre cellulære populationer13. Migration af INs, som for andre neuronal befolkningsgrupper, indebærer forskellige dynamiske morfologiske ændringer for at tillade den faktiske bevægelse af neuron. Denne såkaldte neuronal bevægelse er kendetegnet ved gentagne cyklusser af tre successive trin: strækning af en førende proces, en aktiv anterograd bevægelse af kernen (nucleokinesis), og sammentrækning af den efterfølgende proces14. I migration er reguleret af talrige indre og ydre stikord, der drev den forgrening og aktive remodellering af den førende proces til at guide INs i den rigtige retning, bestemme retningen og hastigheden af migration14,15 ,16.
Determinanterne regulering af kortikale i migration er blevet grundigt undersøgt i de seneste år1,2,7,17,18,19,20, og forstyrrelser i nogle af disse molekylære aktører har været postuleret for at føre til forstyrrelser i nervesystemets, såsom pediatric refraktær epilepsi eller autisme spektrum forstyrrelser1,2,21, 22 , 23 , 24. derfor udvikling for forskellige in vitro- og i vivo tilgange har været forfulgt at betydeligt fremme vores evne til at studere denne dynamiske proces, som tidligere gennemgået25. In vitro metoder, herunder Boyden kammer assay og stribe valg Assay, giver den hurtigste og mest reproducerbare middel til vurdering af krav og celle-selvstændig effekt af specifikke gener eller proteiner under neuronal migration, uden indflydelse andre faktorer25. Disse assays er især nyttig, når kombineret med live imaging8,26,27. Med disse teknikker, INs er nemt hentet fra e13.5 MGE og isoleret af enzymatiske og mekaniske dissociation, hvorefter forskellige signaling veje og vejledning stikord kan undersøges, som illustreret tidligere8,28 . Men disse assays finder sted i en kunstig ekstracellulære matrix i mangel af tre-dimensionelle væv arkitektur, som kan ændre neuronal adfærd og celle egenskaber, der potentielt påvirker celle migration og/eller overlevelse25. For at omgå disse begrænsninger, er ex vivo MGE explants blevet udviklet som et alternativ redskab til at kvantificere de dynamiske morfologiske forandringer under migrering sammen med parametre såsom hastighed og retning14, 29. Generere MGE explants er relativt ligetil, og har været udførligt beskrevet andetsteds30. Det indebærer plating af et lille uddrag af MGE på en éncellelag af blandet kortikal celler eller i en blanding af matrigel og kollagen i overværelse af tiltrækkende eller frastødende stikord25, selvom sidstnævnte er valgfri31. MGE explants giver mulighed for høj opløsning imaging af tyndt mærket celler, forenkle undersøgelse af intracellulære processer, såsom cytoskeletal remodeling under førende proces forgrening, som vist tidligere32,33 ,34 , og i den foreliggende undersøgelse. MGE explants har været anvendt med succes til at vurdere dynamiske cytoskeletal ændringer under i migration i et 2D-miljø, for eksempel efter specifik farmakologisk eller kemotaktisk manipulationer (Se for eksempel Tielens et al. 201633) . Men med denne tilgang, INs migrere inden for en kunstig matrix, og dette kan ændre i adfærd og reproducerbarhed og betydningen af de eksperimentelle resultater.
Derimod i utero elektroporation muliggør genmanipulation af INs i deres oprindelige miljø og er en meget anvendt metode til hurtigt og effektivt vurdere virkningen af gevinst og tab af genfunktioner mens omgå begrænsningerne i dyre og tidskrævende knockout og knock-i strategier25,35. In utero elektroporation kan være forudindtaget mod i stamfaderen ved hjælp af celle type specifikke initiativtagere og ved at placere elektroder over ventromedial strukturer, herunder MGE36. Derudover i utero elektroporation giver mulighed for rettidig udtryk for eksperimenterende konstruktioner inden for 1-2 dage, i forhold til de 7-10 dage kræves for at konstruere udtryk ved hjælp af virale vektorer25. Men i utero elektroporation af i ophavene har tendens til at være lav-udbytte. Faktisk, selv om pyramide celle stamfaderen beliggende i den dorsale ventrikulære zone kan være effektivt transfekteret bruger i utero elektroporation, rettet mod mere ventrally placeret strukturer, såsom MGE, mere teknisk udfordrende, især i små e13.5 reducerer embryoner, og den høje sats af embryonale dødelighed yderligere experimental udbytte25.
For at omgå nogle af de tekniske begrænsninger i forbindelse med in vitro- MGE explant eksperimenter og i vivo i livmoderen elektroporation, ex vivo organotypic skive kulturer har været udviklede8,37, 38,39. Hjernen organotypic skive kulturer tilbud fordelen, at efterligne i vivo betingelser, mens mindre dyre og tidskrævende end generere dyret modeller25. Ja, disse præparater tillader en nem adgang til MGE, sammen med den specifikke visualisering af INs, og kan kombineres med fokale elektroporation at undersøge specifikke molekylære veje i INs overflytning i en mere fysiologisk miljø8 , 39 , 40 , 41. vi har derfor optimeret en tilgang til organotypic kulturer38, som vi kombinerede med ex utero elektroporation og time-lapse Konfokal imaging, at yderligere vurdere de morfologiske og dynamisk proces forekommer under tangential migration af MGE-INs. Denne protokol blev tilpasset og optimeret fra andre, der har brugt ex utero eller i utero hjernen elektroporation og organotypic skive kulturer for at studere migration af pyramideformet celler42,43 og kortikale INs36,39,44. Specifikt, mus embryoner er halshugget og MGE er electroporated ex vivo efter intraventrikulært injektion af de eksperimentelle plasmider, giver mulighed for mere effektiv og præcis målretning af MGE stamfaderen end hvad der kan opnås med i utero elektroporation. Hjerner er derefter uddraget og sectioned i hele hjernen koronale skiver, der kan dyrkes i et par dage, således at kontinuerlig sporing og imaging transfekteret ins. Denne tilgang labels typisk 5-20 tangentielt overflytter INs pr. hjerne skive, minimere antallet af eksperimentelle gentagelser kræves for at opnå Statistisk signifikans, mens mærkning en tilstrækkelig sparsomme neuronal befolkning for at sikre nem adskillelse af individuelle neuroner for genopbygning og fine morfologiske vurdering. Desuden, i forhold til MGE explants, organotypic kulturer sikre at overflytte INs er udsat for et mere naturligt miljø, herunder lokalt udskilles kemokiner og indgange fra thalamic afferenter. Denne tilgang er derfor velegnet til at kvantificere direktionalitet og vandrende sti vedtog transfekteret INs, mens der tilbyder tilstrækkelig anatomiske detaljer at tillade karakterisering af finere dynamiske processer som førende proces forgrening, nucleokinesis og afsluttende proces sammentrækning.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

GABAergic interneurons (INs) er kritiske komponenter i neuronal netværk, at drive kognition og adfærd. INs bestemt til at udfylde cortex migrere tangentielt fra deres oprindelsessted i den ventrale telencephalon (herunder fra de mediale og caudale ganglionære eminences (MGE, CGE)) til den dorsale kortikale plade som svar på en række af indre og ydre stikord. Forskellige metoder er blevet udviklet over årene genetisk manipulere bestemte veje og undersøge hvordan de regulerer de dynamiske cytoskeletal forandringer er nødvendige for korrekt i migration. In utero elektroporation har været flittigt brugt til at studere effekten af gen undertrykkelse eller overekspression i specifikke IN undertyper mens vurderingen af indvirkningen på morfologi og endelige holdning. Men mens denne tilgang er let bruges til at ændre radialt overflytter pyramideformet celler, det mere teknisk udfordrende når målretning INs. In utero elektroporation genererer et lavt udbytte givet nedsat overlevelsesrater for hvalpe når elektroporation udføres før e14.5, som det er sædvane, når man studerer MGE-afledte INs. I en alternativ tilgang, MGE explants giver nem adgang til MGE og lette billeddannelse af genetisk modificerede INs. Men i disse explants, INs overflyttes til en kunstig matrix, blottet for endogene vejledning stikord og thalamic indgange. Dette foranledigede os til at optimere en metode hvor INs kan migrere i en mere naturalistisk miljø, samtidig med at omgå de tekniske udfordringer i utero tilgange. I dette papir beskriver vi kombinationen af ex utero elektroporation af embryonale mus hjerner efterfulgt af organotypic skive kulturer let spore, billede og rekonstruere genetisk modificerede INs migrere langs deres naturlige stier som reaktion på endogene stikord. Denne tilgang giver mulighed for kvantificering af de dynamiske aspekter af migration med time-lapse Konfokal imaging, samt en detaljeret analyse af forskellige morfologiske parametre ved hjælp af neuronal rekonstruktioner på fast immunolabeled væv.

I dette afsnit skal give vi repræsentative resultater, der opnås efter ex utero elektroporation af en kontrol plasmid, eller en eksperimentel plasmid rettet mod et gen interesse MGE e13.5 mus embryoner efterfulgt af organotypic skive kulturer inkuberes ved 37 ° C for 48 h (for time-lapse imaging) eller 72 h (for fiksering og immunhistokemiske mærkning) (Se figur 1B for skematisk protokol). Repræsentative eksempler på INs overflytning fra en MGE...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Elektroporation og Organotypic skive kulturer af embryonale mus hjerner for Live-Imaging af migrerer GABAergic Interneurons

Her, giver vi en billig og pålidelig metode til at generere electroporated hjerne organotypic skive kulturer fra mus embryoner egnet til Konfokal mikroskopi og live imaging teknikker.

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypiske Slice Kulturer af Embryonale ventrale midthjernen: et system til undersøgelse Dopaminerge Neuronal Udvikling In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Ekspansion af embryoniske og voksne neurale stamceller ved<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporering eller viral stereotaktisk injektion

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Live-Imaging mitosens i udviklingslandene mus embryonale Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Subtype-selektive Elektroporation af Kortikal interneuroner

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypiske skivekulturer at studere oligodendrocyt Dynamics og myelinering

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse konfokal billeddannelse af migrerende neuroner i organotypisk skive kultur af embryonale mus hjernen ved hjælp af<em&gt; I Utero</em&gt; Elektroporation

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Forberedelse og immunfarvning af Myelinating Organotypic cerebellare skive kulturer

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...