Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

यह काम Savoy फाउंडेशन और इलाज मिर्गी फाउंडेशन से और उपकरण अनुदान द्वारा नवाचार के लिए कनाडा की नींव से ई. आर (फोकल माइक्रोस्कोप) और जी. एच (कताई डिस्क फोकल माइक्रोस्कोप) से ऑपरेटिंग अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था । ेा शौकीनों de सभ्य du Québec-Santé (FRQ-S से कैरियर पुरस्कार प्राप्त करता है; चिकित्सक-वैज्ञानिक पुरस्कार) के रूप में अच्छी तरह से के रूप में स्वास्थ्य अनुसंधान के लिए कनाडा के संस्थानों से (CIHR; यंग जांचकर्ता पुरस्कार) । G.H. FRQ-एस के वरिष्ठ विद्वान हैं । एल ई Savoy फाउंडेशन, चू सैंटर-जस्टिन फाउंडेशन postdoctoral प्रशिक्षण पुरस्कार और FRQ-एस postdoctoral प्रशिक्षण पुरस्कार से Steriade-Savoy postdoctoral प्रशिक्षण पुरस्कार के प्राप्तकर्ता है, सितारों की नींव के साथ साझेदारी में । यह परियोजना कनाडा ब्रेन रिसर्च फंड के माध्यम से मस्तिष्क कनाडा द्वारा संभव बनाया गया है, स्वास्थ्य कनाडा के वित्तीय सहायता के साथ, L.E. को संमानित किया गया

सभी जानवरों को शामिल प्रयोगों Comité Institutionnel डेस बॉन Pratiques avec लेस Animaux de सभ्य (CIBPAR) चू सैंटर-जस्टिन अनुसंधान केंद्र में और पशु देखभाल गाइड पर कनाडा परिषद के अनुसार आयोजित किए गए द्वारा अनुमोदित किया गया प्रयोगात्म?...

इस अनुच्छेद में, हम ई 13.5 पर और भ्रूण मस्तिष्क स्लाइस की organotypic संस्कृतियों की पीढ़ी के लिए माउस MGE के ex utero electroporation प्रदर्शन के लिए एक विश्वसनीय तरीका प्रदान करते हैं । हालांकि इन विट्रो तरीकों में , जैसे Bo...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

GABAergic न्यूरॉन्स (INs) न्यूरॉन नेटवर्क के महत्वपूर्ण घटक है कि ड्राइव अनुभूति और व्यवहार कर रहे हैं । आईएनएस प्रांतस्था को आबाद करने के लिए किस्मत में ventral telencephalon में मूल के अपने स्थान से tangentially प्रवास (औसत दर्जे का और caudal ganglionic eminences (MGE, CGE)) आंतरिक और cortical की एक किस्म के जवाब में पृष्ठीय बाह्य प्लेट को शामिल Cues. विभिंन तरीकों से वर्षों में विकसित किया गया है आनुवंशिक रूप से विशिष्ट रास्ते में हेरफेर और जांच कैसे वे गतिशील cytoskeletal प्रवास में उचित के लिए आवश्यक परिवर्तन को विनियमित । utero में electroporation बड़े पैमाने पर किया गया है जीन दमन या उपप्रकार में विशिष्ट में व्यक्त के प्रभाव का अध्ययन करते हुए आकृति विज्ञान और अंतिम स्थिति पर प्रभाव का आकलन । हालांकि, इस दृष्टिकोण आसानी से करने के लिए उपयोग किया जाता है, जबकि, यह और अधिक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, जब यह लक्ष्य INs को लक्षित करने के लिए संशोधित करने के लिए । utero electroporation एक कम पिल्ले की कमी जीवित रहने की दर दी उपज उत्पंन करता है जब electroporation ई 14.5 से पहले आयोजित किया जाता है, के रूप में जब MGE का अध्ययन-INs व्युत्पंन कस्टम है । एक वैकल्पिक दृष्टिकोण में, MGE explants MGE करने के लिए आसान पहुँच प्रदान करते हैं और आनुवंशिक रूप से संशोधित आईएनएस के इमेजिंग की सुविधा. हालांकि, इन explants में, INs एक कृत्रिम मैट्रिक्स, अंतर्जात मार्गदर्शन cues और thalamic आदानों से रहित में स्थानांतरित । यह हमें प्रेरित करने के लिए एक तरीका है जहां भारतीय नौसेना पोत एक अधिक प्राकृतिक वातावरण में माइग्रेट कर सकते है अनुकूलन, जबकि utero दृष्टिकोण में की तकनीकी चुनौतियों को दरकिनार । इस पत्र में, हम भ्रूण माउस के पूर्व utero electroporation के संयोजन का वर्णन organotypic टुकड़ा संस्कृतियों के बाद आसानी से ट्रैक करने के लिए, छवि और आनुवंशिक रूप से संशोधित INs के जवाब में उनके प्राकृतिक रास्तों के साथ पलायन पुनर्निर्माण अंतर्जात cues । यह दृष्टिकोण दोनों समय के साथ प्रवास में गतिशील पहलुओं के ठहराव के लिए अनुमति देता है चूक फोकल इमेजिंग, के रूप में अच्छी तरह के रूप में विभिंन रूपात्मक तय immunolabeled ऊतक पर ंयूरॉन पुनर्निर्माण का उपयोग मापदंडों का विस्तृत विश्लेषण ।

इस खंड में, हम प्रतिनिधि एक नियंत्रण प्लाज्मिड, या एक प्रयोगात्मक प्लाज्मिड ब्याज की एक जीन लक्ष्यीकरण, ई 13.5 माउस MGE स्लाइस संस्कृतियों के बाद भ्रूण के organotypic में के पूर्व utero electroporation निंनलिखि?...

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Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

माजी Utero Electroporation और Organotypic स्लाइस भ्रूण माउस दिमाग के लाइव के लिए संस्कृतियों-GABAergic न्यूरॉन्स पलायन की इमेजिंग

यहां, हम एक कम लागत और विश्वसनीय विधि प्रदान करने के लिए electroporated मस्तिष्क organotypic के लिए उपयुक्त फोकल माइक्रोस्कोपी और लाइव इमेजिंग तकनीक के लिए उचित भ्रूण से स्लाइस संस्कृतियों ।

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

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Organotypic hippocampal टुकड़ा संस्कृतियों

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

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Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

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भ्रूण और वयस्क तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के द्वारा विस्तार<em&gt; Utero में</em&gt; Electroporation या वायरल Stereotaxic इंजेक्शन

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Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

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Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypic स्लाइस संस्कृति Oligodendrocyte गतिशीलता और myelination अध्ययन

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

समयबद्धता संगठनात्मक स्लाइस में प्रवासित न्यूरॉन्स के कन्फोकल इमेजिंग भ्रूण माउस मस्तिष्क का प्रयोग करना<em&gt; यूटरो में</em&gt; विद्युतचरण

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

तैयारी और Myelinating ऑर्गेनोप्ररूपी अनुमस्तिष्क स्लाइस संस्कृतियों का Immunostaining

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...