Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av opererer tilskudd fra Savoy Foundation og kur epilepsi grunnlaget og av tilskudd fra det kanadiske stiftelsen for innovasjon E.R (AC confocal mikroskop) og G.H (spinning disk AC confocal mikroskop). Er mottar en career-pris fra de Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQ-S; Clinician-Scientist Award) samt fra den kanadiske institutter for Health Research (CIHR; Ung forsker pris). G.H. er seniorforsker i FRQ-S. L.E er Steriade-Savoy postdoktor trening pris fra Savoy Foundation, CHU Sainte-Justine Foundation postdoktor trening award og FRQ-S postdoktor training award, i samarbeid med stiftelsen av stjerner. Dette prosjektet har blitt gjort mulig av hjernen Canada gjennom Canada hjernen Research Fund, med økonomisk støtte av Health Canada, tildeles Le

Alle eksperimenter som involverer dyr ble godkjent av Comité Institutionnel des Bonnes Pratiques avec les Animaux de Recherche (CIBPAR) på CHU Sainte-Justine Research Center og ble utført i samsvar med den kanadiske Council på Animal Care guide til den omsorg og bruk av forsøksdyr (Red.. 2).
Protokollen beskrevet her var optimalisert for electroporation av embryo på embryonale dag (e) 13,5, samtidig når MGE-avledet moduler er aktivt generert, før på toppen av CGE-avledet INs produksjo...

I denne artikkelen gir vi en pålitelig metode for å utføre ex utero electroporation musen MGE på e13.5 og for generering av organotypic kulturer av embryonale hjernen skiver. Selv om i vitro metoder, for eksempel Boyden kammeret analysen, er relativt enkle å utføre, og kan brukes til å vurdere bestemte rollene som ulike gener og proteiner uten forstyrrelser av andre faktorer, utelukker de etterforskningen av IN migrasjon dynamics med hensyn til retningen og overføring bane25</s...

Kortikale GABAergic interneurons (INs) er forskjellige med hensyn til deres biokjemiske egenskaper, fysiologiske egenskaper og tilkobling, og de megle ulike funksjoner i eldre nettverk1,2,3 ,4,5. Spesifikasjon av forskjellige undergrupper av kortikale INs reguleres tett gjennom genetisk cascades som har vært grundig studert1,2. Fleste (70%) av kortikale GABAergic INs kommer fra progenitors i den mediale ganglionic anseelse (MGE), en ventrally plassert embryonale struktur, og må overføre over relativt lang avstander til kortikale plate1, 2 , 6. mens kortikale pyramidale celler overføre radielt fra sonen ventrikkel (VZ) til kortikale plate langs radiale glia stillaset, tangentiell migrering av moduler, som ikke er knyttet til slike et stillas, krever en rekke iboende og ytre signaler å tiltrekke migrere neurons mot kortikale platen, mens guiding dem fra ikke-kortikale strukturer2,7,8. Etter spennende cellen syklus, moduler er repelled fra MGE av kjemoterapi-frastøtende stikkordene uttrykt i VZ av MGE, som utløser tangentiell migrering mot kortikale plate9,10. Migrere INs unngå striatum ved hjelp av forskjellige frastøtende stikkord11 og, etter å ha nådd kortikale platen, de bytter fra en tangentiell til en radial overføring modus og nå sitt endelige laminær posisjon, delvis som svar på signaler fra pyramideformet celler12 og andre cellulære bestander13. Migrering av moduler, som for andre neuronal befolkninger, innebærer forskjellige dynamisk morfologiske endringer slik at den faktiske bevegelsen av Nevron. Denne såkalte neuronal bevegelse er preget av repeterende sykluser av tre påfølgende trinn: forlengelse av en ledende prosess, en aktiv anterograd bevegelse av kjernen (nucleokinesis), og tilbakekallingen av den etterfølgende prosess14. I migrasjon er regulert av mange indre og ytre stikkordene som drive på forgrening og aktive ombygging av ledende prosessen å veilede moduler i riktig retning, bestemme både retningen og hastigheten på overføring14,15 ,16.
Determinanter regulere kortikale i overføringen har blitt grundig studert i årene1,2,7,17,18,19,20, og avbrudd i noen av molekylære skuespillere har blitt postulert føre til neurodevelopmental lidelser, som pediatric ildfaste epilepsi eller autisme spektrum lidelser1,2,21, 22 , 23 , 24. derfor utviklingen av ulike i vitro og vivo tilnærminger har vært forfulgt for å fremme betydelig vår evne til å studere denne dynamiske prosessen, som tidligere vurdert25. In vitro metoder, inkludert Boyden kammeret analysen og Stripe valg analysen, gir den raskeste og mest reproduserbar betyr vurdere de krav og celle autonome virkningen av bestemte gener eller proteiner under neuronal migrering uten påvirkning av andre faktorer25. Disse analyser er spesielt nyttige når kombinert med live-imaging8,26,27. Med disse teknikkene, INs lett Hentet fra e13.5 MGE og isolert av enzymatisk og mekanisk dissosiasjon, hvoretter forskjellige signalveier og veiledning signaler kan undersøkes, som illustrert tidligere8,28 . Men finner disse analyser sted i en kunstig ekstracellulær matrix i fravær av tredimensjonale vev arkitektur, som kan endre neuronal atferd og celle egenskaper, potensielt påvirke celle migrasjon og/eller overlevelse25. For å omgå disse begrensningene, er ex vivo MGE explants utviklet som et alternativ for å kvantifisere dynamisk morfologiske endringene skjer under migrering sammen med parametere som hastighet og retning14, 29. Generere MGE explants er relativt enkelt og har blitt grundig beskrevet andre steder30. Det innebærer at belegget av en liten pakke av MGE på en monolayer av blandet kortikale celler eller i en blanding av matrigel og kollagen i nærvær av attraktive eller frastøtende stikkordene25, selv om sistnevnte er valgfritt31. MGE explants tillater for høy oppløsning tenkelig tynt merket celleområde, forenkle studiet av intracellulær prosesser, for eksempel cellen cytoskjelett remodeling under ledende prosessen forgrening, som vist tidligere32,33 ,34 og studien. MGE explants har vært brukt med hell å vurdere dynamisk cellen cytoskjelett endringer under i migrasjon i et 2D-miljø, for eksempel etter bestemte farmakologiske eller chemotactic manipulasjoner (se, for eksempel Tielens et al. 201633) . Men med denne tilnærmingen, INs overføre innenfor en kunstig matrise, og dette kan endre i atferd og reproduserbarhet og betydningen av de eksperimentelle resultatene.
Derimot i utero electroporation gjør genetisk manipulering av moduler i sitt eget miljø og er mye brukt metode for å raskt og effektivt vurdere virkningen av gevinst og tap av gen funksjon mens omgå begrensningene for kostbare og tidkrevende knockout og banke i strategier25,35. In utero electroporation kan være partisk mot i progenitors ved hjelp av celle type bestemt arrangører og posisjonering elektrodene mot ventromedial strukturer, inkludert MGE36. Videre i utero electroporation gir betimelig uttrykk for eksperimentell konstruksjoner innen 1-2 dager, i forhold til 7-10 dager kreves for å konstruere uttrykket bruke viral vektorer25. Men i utero electroporation av i progenitors tendens til å være lav-yield. Faktisk, selv om pyramideformet celle progenitors lokalisert i sonen dorsal ventrikkel kan være effektivt transfected bruker i utero electroporation, målretting mer ventrally ligger strukturer, for eksempel MGE, er mer teknisk utfordrende, spesielt i små e13.5 reduserer embryoer og høyt antall embryonale dødelighet ytterligere eksperimentelle kapasitet25.
For å omgå noen av de tekniske begrensningene forbundet med in vitro MGE explant eksperimenter og i vivo i livmoren electroporation, ex vivo organotypic skive kulturer har vært utviklet8,37, 38,39. Hjernen organotypic skive kulturer tilbyr fordelen av mimicking i vivo forhold, samtidig som mindre dyre og tidkrevende enn generere dyr modeller25. Faktisk disse forberedelsene gir en enkel tilgang til MGE, sammen med spesifikke visualisering av moduler, og kan kombineres med fokal electroporation å undersøke bestemte molekylær stier i moduler migrering i en mer fysiologiske miljø8 , 39 , 40 , 41. vi har derfor optimalisert tilnærming for organotypic kulturer38, som kombineres med ex utero electroporation og tidsinnstilt AC confocal bildebehandling, å vurdere den morfologiske og dynamisk oppstår under tangentiell overføringen av MGE-INs. Nåværende protokollen ble tilpasset og optimert fra andre som har brukt ex utero eller i utero hjernen electroporation og organotypic stykke kulturer for å studere migrering av pyramideformet celler42,43 og kortikale INs36,39,44. Spesielt mouse embryoer er decapitated og MGE er electroporated ex vivo etter intraventricular injeksjon av eksperimentelle plasmider, slik at mer effektiv og nøyaktig målretting av MGE progenitors enn hva som kan oppnås med i utero electroporation. Hjernen er deretter trukket ut og delt i hele hjernen koronale skiver det kan kultivert for et par dager, dermed tillater kontinuerlig sporing og imaging transfekterte ins. Denne tilnærmingen etiketter vanligvis 5-20 tangentially migrere INs per hjernen skive, minimere antall eksperimentelle gjentakelser må nå statistisk betydning, mens merking en tilstrekkelig sparsom neuronal befolkning for å sikre enkel separasjon av individuell neurons for gjenoppbygging og fine morfologiske vurdering. Videre sammenlignet MGE explants, organotypic kulturer sikre det overfører INs utsatt for mer naturlige miljø, inkludert lokalt utskilles chemokines og innspill fra thalamic afferente. Denne tilnærmingen er dermed godt egnet til å kvantifisere den retningen og vandrende bane vedtatt av transfekterte INs, samtidig tilby tilstrekkelig anatomiske detaljer å tillate karakterisering av finere dynamisk prosesser som ledende prosessen forgrening, nucleokinesis og etterfølgende prosessen dementi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

GABAergic interneurons (INs) er kritiske komponenter i nevrale nettverk som driver kognisjon og atferd. INs skjebnebestemt til å fylle cortex overføre tangentially fra sitt opprinnelsesland i det ventrale telencephalon (inkludert fra de mediale og caudal ganglionic eminences (MGE, CGE)) til dorsal kortikale platen i respons til en rekke indre og ytre signaler. Ulike metoder har blitt utviklet i årene som genetisk manipulere bestemte stier og undersøke hvordan de regulerer dynamisk cellen cytoskjelett endringene som kreves for skikkelig i migrasjon. In utero electroporation har vært mye brukt til å studere effekten av genet undertrykkelse eller overuttrykte i bestemte IN subtyper samtidig vurdere virkningen på morfologi og endelige posisjon. Men mens denne tilnærmingen er lett brukes til å endre radielt overfører pyramidale celler, er det mer teknisk utfordrende når målretting INs. In utero electroporation genererer en lav avkastning gitt redusert overlevelse av pups når electroporation gjennomføres før e14.5, som er vanlig når studere MGE-avledet INs. I en alternativ tilnærming, MGE explants gir lett tilgang til MGE og lette avbilding av genmodifiserte INs. Men i disse explants, INs overføre til en kunstig matrise, uten endogene veiledning signaler og thalamic innganger. Dette bedt oss å optimalisere en metode der moduler kan overføre i et mer naturalistisk miljø, mens omgå tekniske utfordringer i utero tilnærminger. I dette papir beskriver vi kombinasjonen av ex utero electroporation embryonale musen hjerner etterfulgt av organotypic skive kulturer lett spore, bilde og rekonstruere genmodifiserte INs migrere langs deres naturstiene svar endogene signaler. Denne tilnærmingen gir både kvantifiseringen dynamisk aspekter av i migrering med tidsinnstilt AC confocal bildebehandling, i tillegg til detaljert analyse av ulike morfologiske parametere med neuronal rekonstruksjoner på fast immunolabeled vev.

I denne delen gir vi representant resultatene etter ex utero electroporation en kontroll plasmider eller en eksperimentell plasmider målretting en genet av interesse i MGE av e13.5 musen embryo etterfulgt av organotypic skive kulturer ruges på 37 ° C for 48 h (for tidsinnstilt bildebehandling) eller 72 h (for fiksering og immunohistochemical merking) (se figur 1B for skjematisk protokollen). Eksemplene INs migrerer fra en MGE explant er også illu...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation og Organotypic stykke kulturer embryonale musen hjerner for Live-Imaging av overføring av GABAergic Interneurons

Her gir vi en rimelig og pålitelig metode for å generere electroporated hjernen organotypic skive kulturer fra mouse embryoer egnet for AC confocal mikroskopi og live-imaging teknikker.

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice kulturer av embryonale Ventral midthjernen: Et system for å Study dopaminerge neuronal Development In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Utvidelse av embryonale og voksne nevrale stamceller ved<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation eller Viral stereotaksiske Injection

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Levende Imaging av Mitosis i utviklings Mouse Embryonic Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Subtype-selektiv Electroporation av Cortical interneuroner

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypic skive kulturer til å studere oligodendrocyte Dynamics og myelinisering

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging av Migrating Neurons i Organotypic Slice Kultur av Embryonic Mouse Brain Using<em&gt; I Utero</em&gt; Elektroporasjon

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Forberedelse og immunostai-Myelinating Organotypic lillehjernen skive kulturer

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...