Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Detta arbete stöddes av administrationsbidrag från Savoy stiftelsen och stiftelsen bota epilepsi och utrustning ger från den kanadensiska fonden för Innovation att Ekman (confocal Mikroskop) och motiv (snurrande bricka confocal Mikroskop). E.R. mottar en karriär award från den Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQ-S; Clinician-Scientist Award) as well as från kanadensiska instituten för hälsoforskning (CIHR; Unga Investigator Award). G.H. är en ledande vetenskapsman av FRQ-S. Larsson är mottagare av utmärkelsen Steriade-Savoy postdoktorala utbildning från stiftelsen Savoy, utmärkelsen CHU Sainte-Justine Foundation postdoktorala utbildning och FRQ-S postdoktorala utbildning award, i samarbete med stiftelsen av stjärnorna. Projektet har möjliggjorts genom hjärnan Kanada genom Kanada hjärnan forskningsfonden, med finansiellt stöd av Health Canada, tilldelas L.E.

Alla experiment med djur godkändes av Comité Institutionnel des Bonnes Pratiques avec les Animaux de Recherche (CIBPAR) på CHU Sainte-Justine Research Center och genomfördes i enlighet med kanadensisk rådet på Animal Care's guide till Skötsel och användning av försöksdjur (Ed. 2).
Protokollet beskrivs här var optimerad för elektroporation embryon på embryonala dag (e) 13,5, vid en tidpunkt när MGE-derived INs är aktivt genereras, innan den topp av CGE-derived INs produktion<sup ...

I den här artikeln ger vi en pålitlig metod för att utföra ex utero elektroporation musen MGE på e13.5 och för generering av organotypic kulturer av embryonala hjärnan skivor. Även om in vitro- metoder, såsom Boyden kammare analysen, är relativt enkla att utföra och kan användas för att bedöma de särskilda rollerna av olika gener och proteiner utan inblandning av andra faktorer, utesluter de utredning av IN migration dynamik när det gäller riktverkan och migration väg...

Kortikala GABAergic interneuroner (INs) är olika när det gäller deras biokemiska egenskaper, fysiologiska egenskaper och anslutning, och de förmedlar olika funktioner i mogen nätverk1,2,3 ,4,5. Specifikationen av olika subtyper av kortikala INs är hårt reglerad genom genetiska kaskader som varit flitigt studerade1,2. Majoriteten (70%) av kortikala GABAergic INs härstammar från stamfäder i den mediala ganglieblockerande eminens (MGE), en ventralt ligger embryonal struktur, och måste migrera över relativt långa avstånd att nå den kortikala plattan1, 2 , 6. medan kortikala pyramidala celler migrerar radiellt från ventrikulära zonen (VZ) till kortikala plattan längs radiella glia schavotten, tangentiella migreringen av INs, som inte är kopplade till sådan en byggnadsställning, kräver en mängd inneboende och extrinsic ledtrådar att locka migrerar nervceller mot kortikala plattan, medan vägleda dem bort från icke-kortikala strukturer2,7,8. Efter spännande cellcykeln, INs stöts bort från MGE av chemo-motbjudande ledtrådar som uttrycks inom VZ av den MGE, som utlöser tangentiella migration mot de kortikala platta9,10. Migrera INs undvika striatum med hjälp av olika motbjudande cues11 och, efter att ha nått den kortikala plattan, de växla från en tangentiell till en radiell migreringsläge och nå sin slutliga laminar ståndpunkt, delvis som svar på signaler från pyramidal celler12 och andra cellulära populationer13. Migreringen av INs, när det gäller andra neuronala populationer, innebär olika dynamiska morfologiska förändringar för att tillåta den faktiska rörligheten av neuron. Denna s.k. neuronala locomotion kännetecknas av upprepade cykler av tre på varandra följande steg: förlängning av en ledande process, en aktiv anterograd rörelse av kärnan (nucleokinesis), och indragning av den efterföljande process14. I migration regleras av många inre och yttre ledtrådar som driver förgrening och aktiva omdaning av ledande processen att vägleda INs i rätt riktning, att fastställa både riktning och hastighet av migration14,15 ,16.
De bestämningsfaktorer som reglerar kortikala i migration har studerats i senaste åren1,2,7,17,18,19,20, och störningar i några av dessa molekylära aktörer har förutsatts för att leda till nervsystemets utveckling, såsom pediatric refraktär epilepsi eller autism spektrum störningar1,2,21, 22 , 23 , 24. därför, utveckling av olika in vitro- och in-vivo metoder har bedrivits för att betydligt förbättra vår förmåga att studera denna dynamiska process, som tidigare granskade25. In vitro- metoder, inklusive Boyden kammare analysen och Stripe val analysen, ger de snabbaste och mest reproducerbara medel utvärdera kravet och cell-autonom påverkan av specifika gener eller proteiner under neuronal migration, utan påverkan av andra faktorer25. Dessa analyser är särskilt användbara när de kombineras med live-imaging8,26,27. Med dessa tekniker, INs enkelt hämtas från e13.5 MGE och isoleras genom enzymatisk och mekaniska dissociation, varefter olika signalvägar och vägledning ledtrådar kan undersökas, vilket illustreras tidigare8,28 . Dock ske dessa analyser i en konstgjord extracellulära matrix i avsaknad av tredimensionella vävnad arkitektur, som kan förändra neuronala beteende och cell egenskaper, som potentiellt påverkar cell migration och/eller överlevnad25. För att kringgå dessa begränsningar, har ex vivo MGE bladsticklingar utvecklats som ett alternativt verktyg att kvantifiera de dynamiska morfologiska förändringar som sker under migreringen tillsammans med parametrar såsom hastighet och riktning14, 29. Generera MGE bladsticklingar är relativt enkel och har varit utförligt beskrivs på annan plats30. Det innebär plätering av ett litet utdrag av MGE på en enskiktslager av blandad kortikal celler eller i en blandning av matrigel och kollagen i närvaro av attraktiva eller repulsiva Biljardköer25, även om de senare är valfria31. MGE bladsticklingar möjliggör hög upplösning imaging av glest märkta celler, vilket förenklar studiet av intracellulära processer, såsom cytoskeletal remodeling under ledande processen förgrening, enligt den tidigare32,33 ,34 och i den aktuella studien. MGE bladsticklingar har använts framgångsrikt att bedöma dynamisk cytoskeletal förändringar under i migration i en 2D-miljö, till exempel efter specifika farmakologiska eller kemotaktisk manipulationer (se, till exempel Tielens et al. 201633) . Men med detta synsätt, INs migrera inom en konstgjord matris, och detta kan förändra beteende och reproducerbarhet och betydelsen av experimentella resultat.
Däremot i livmodern elektroporation möjliggör genetisk manipulering av INs i sin ursprungliga miljö och är en allmänt använd metod för att snabbt och effektivt bedöma effekterna av vinst och förlust av geners funktion medan kringgå begränsningarna med kostsamma och tidskrävande knockout och inpressning strategier25,35. In utero elektroporation kan vara vinklad mot i stamfäder genom att använda cell typ specifika initiativtagare och genom att placera elektroderna mot ventromediala strukturer, däribland den MGE36. Dessutom i livmodern elektroporation tillåter av tid uttryck för experimentell konstruktioner inom 1-2 dagar, jämfört med de 7-10 dagar som krävs för att konstruera uttryck använda virala vektorer25. Dock tenderar i livmodern elektroporation av i föräldraparets att vara låg avkastning. Faktiskt, även om pyramidal cell föräldraparets ligger i dorsala ventrikulära zonen kan vara effektivt transfekterade använder Utero elektroporation, inriktning mer ventralt ligger strukturer, såsom MGE, är mer tekniskt utmanande, särskilt i små e13.5 minskar embryon, och den höga andelen embryonal dödlighet ytterligare de experimentella avkastning25.
MGE explant experiment och i vivo i livmodern elektroporation för att kringgå några tekniska begränsningar associerade med in vitro , ex vivo organotypic skiva kulturer har varit utvecklade8,37, 38,39. Hjärnan organotypic skiva kulturer erbjuder fördelen att härma i vivo villkor, samtidigt som de mindre dyra och tidskrävande än genererar djur modeller25. Ja, dessa preparat ge en enkel åtkomst till MGE, tillsammans med de specifika visualiseringen av INs, och kan kombineras med fokal elektroporation att undersöka specifika molekylära vägar i INs migrerar i en mer fysiologisk miljö8 , 39 , 40 , 41. vi har därför optimerat en strategi för organotypic kulturer38som vi kombinerat med ex utero elektroporation och time-lapse confocal imaging, att ytterligare bedöma den morfologiska och dynamisk process som inträffar under tangentiella migreringen av MGE-INs. Detta protokoll var anpassad och optimerad från andra som har använt ex utero eller i livmodern hjärnan elektroporation och organotypic skiva kulturer för att studera migration av pyramidala celler42,43 och kortikala INs36,39,44. Specifikt, musembryon är halshuggas och MGE är electroporated ex vivo efter intraventrikulär injektion av de experimentella plasmidsna, vilket ger mer effektiv och exakt inriktning av MGE föräldraparets än vad som kan uppnås med i livmodern elektroporation. Hjärnor extraheras sedan och sektioneras i hela hjärnan koronalt skivor som kan vara odlade i några dagar, vilket möjliggör kontinuerlig spårning och avbildning av transfekterade INs. Detta tillvägagångssätt etiketter normalt 5-20 tangentiellt migrerar INs per hjärnan slice, minimera antalet experimentella iterationer som krävs för att nå statistisk signifikans, medan märkning en tillräckligt gles neuronala befolkning för att säkerställa enkel separation av enskilda nervceller för återuppbyggnad och fina morfologisk bedömning. Dessutom jämfört MGE bladsticklingar, organotypic kulturer säkerställa att migrera INs utsätts för en mer naturlig miljö, inklusive lokalt utsöndrade chemokiner och ingångar från thalamic afferenter. Detta tillvägagångssätt är alltså väl lämpade att kvantifiera riktverkan och flyttvägen antogs av transfekterade INs, samtidigt som den erbjuder tillräcklig anatomiska detaljer att tillåta karakterisering av finare dynamiska processer såsom ledande processen förgrening, nucleokinesis och efterföljande processen upprullning.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

GABAergic interneuroner (INs) är kritiska komponenter i neuronala nätverk som driver kognition och beteende. Moduler avsedda för att fylla cortex migrera tangentiellt från sin ursprungsort i den ventrala telencephalon (inklusive från de mediala och stjärtfenan ganglieblockerande eminenser (MGE, CGE)) till dorsala kortikala plattan som svar på en mängd av inre och yttre ledtrådar. Olika metoder har utvecklats under åren för att genetiskt manipulera specifika vägar och undersöka hur de reglerar de dynamiska cytoskeletal förändringar som krävs för korrekt i migration. In utero elektroporation har i stor utsträckning används för att studera effekten av genen förtryck eller överuttryck i specifika IN subtyper medan bedömningen av inverkan på Morfologi och slutliga ståndpunkt. Men medan detta tillvägagångssätt används lätt att ändra radiellt migrerar pyramidala celler, det är mer tekniskt utmanande när inriktning INs. In utero elektroporation genererar en låg avkastning ges minskad överlevnaden av pups när elektroporation görs före e14.5, som brukligt när man studerar MGE-derived INs. I ett alternativt tillvägagångssätt, MGE bladsticklingar ger enkel åtkomst till MGE och underlätta bildtagning av genetiskt modifierade INs. Dock i dessa bladsticklingar, INs migrera in en konstgjord matrisen, saknar endogena vägledning cues och thalamic ingångar. Detta föranledde oss att optimera en metod där INs kan migrera i en mer naturalistisk miljö, och kringgå de tekniska utmaningarna i livmodern metoder. I detta papper beskriver vi kombinationen av ex utero elektroporation av embryonala mus hjärnor följt av organotypic skiva kulturer lätt spåra, bild och rekonstruera genetiskt modifierade INs migrerar längs deras naturliga vägar att bemöta endogena ledtrådar. Detta tillvägagångssätt möjliggör både kvantifieringen av de dynamiska aspekterna av migration med time-lapse confocal imaging, samt en detaljerad analys av olika morfologiska parametrar med neuronala rekonstruktioner på fasta immunolabeled vävnad.

I detta avsnitt tillhandahåller vi representativa resultat erhålls efter de ex utero elektroporation en kontrollplasmid eller en experimentell plasmid inriktning en gen av intresse, i MGE e13.5 mus embryon följt av organotypic skiva kulturer inkuberas vid 37 ° C för 48 h (för time-lapse imaging) eller 72 h (för fixering och immunhistokemisk märkning) (se figur 1B för Schematisk protokoll). Representativa exempel på INs migrera från en MGE ...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Elektroporation och Organotypic skiva kulturer av embryonala mus hjärnor för Live-Imaging av migrera GABAergic interneuroner

Här ger vi en billig och pålitlig metod för att generera electroporated hjärnan organotypic skiva kulturer från musembryon passar konfokalmikroskopi och live-imaging tekniker.

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Organotypic hippocampus Slice kulturer

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mus I livmodern Elektroporation: Kontrollerad Spatiotemporal Gene Transfektion

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice kulturer av embryonala på magen mitthjärnan: Ett system att studera Dopaminerga nervsystemets utveckling In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Analysen av Purkinje Cell Dendritic Morfologi i Organotypiska slice kulturer

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Utbyggnad av embryonala och vuxna neurala stamceller genom<em&gt; I Utero</em&gt; Elektroporering eller viral stereotaxisk injektion

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Live avbildning av Mitos i utvecklings Mouse embryonala Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Subtypselektiva Elektroporering av kortikal Interneuroner

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypic Slice kulturer för att studera Oligodendrocyte Dynamics och myelinisering

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse-konfokalbildning av migrerande neuroner i organotypisk skivkultur av embryonalt mushinne<em&gt; I Utero</em&gt; Elektroporation

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Förberedelse och immunfärgning av Myelinating Organotypic cerebellär Slice kulturer

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...