Name: ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons
Uploaded: 2018-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Bu eser Savoy Vakfı ve tedavi epilepsi Vakfı'nın hibe işletim tarafından desteklendi ve ekipmanı tarafından yenilik için Kanada Vakfı E.R (confocal mikroskop) ve G.H (iplik disk confocal mikroskop) verir. Acil serviste bir kariyer ödülü alır Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQ-S; Clinician-Scientist Ödülü) yanı sıra--dan Kanada Enstitüleri gibi Sağlık Araştırma (CIHR; Genç Araştırmacı Ödülü). G.H. FRQ-S. üst düzey bir bilim adamı olduğunu L.E Savoy temelden, CHU Sainte-Justine Vakfı doktora sonrası Eğitim Ödülü ve FRQ-S doktora sonrası Eğitim Ödülü, yıldız Vakfı ile ortaklaşa Steriade-Savoy doktora sonrası Eğitim Ödülü alıcı olduğunu. Beyin Kanada Kanada beyin araştırma fonu, sağlık Kanada, Le için verilen mali desteği ile yoluyla, mümkün yapılmış bu proje

Tüm Deney hayvanları içeren Comité Institutionnel des Bonnes Pratiques avec les CHU Sainte-Justine araştırma Merkezi'nde Animaux de Recherche (CIBPAR) tarafından kabul edildi ve Kanada Konseyi hayvan bakım'ın rehberinde uygun olarak yapılmıştır Care and Use deneysel hayvan (Ed. 2).
Burada açıklanan protokol için embriyo elektroporasyon embriyonik gün (e) bir anda 13,5, ne zaman INs MGE kaynaklı aktif olarak oluşturulur, tepe CGE kaynaklı INs üretim45</sup...

Bu makalede, biz rahim elektroporasyon e13.5, fare MGE gerçekleştirmek için ve embriyonik beyin dilimleri kültürleri organotypic nesil için güvenilir bir yöntem sağlar. Boyden odası tahlil gibi vitro yöntemleri gerçekleştirmek nispeten kolay ve farklı genler ve proteinler diğer faktörlere müdahale olmadan belirli rolleri değerlendirmek için kullanılabilir olsa da, onlar inç soruşturma engel geçiş dinamiği açısından doğrultu ve geçiş yolu25. MGE expl...

Kortikal GABAergic interneurons (Ins) biyokimyasal özellikleri açısından, fizyolojik özellikleri ve bağlantı, çeşitli ve farklı işlevler olgun ağlar1,2,3 aracılık ,4,5. Kortikal ins farklı alt türlerinden tayini sıkıca kapsamlı eğitimi1,2olmuştur genetik cascades ile düzenlenir. Kortikal GABAergic INs çoğunluğu (% 70) ataları medial ganglionic hazretleri (MGE), ventrally bulunduğu bir embriyonik yapısı içinde kaynaklanan ve kortikal plaka1, ulaşmak için oldukça uzun mesafeler arasında geçirmeniz gerekir 2 , 6. kortikal piramit hücreleri Radyal Radyal glia iskele boyunca kortikal plaka (VZ) ventrikül bölgesinden göç ederken, böyle bir iskele bağlı değil, ins, teğet geçiş içsel çeşitli gerektirir ve uzak olmayan-kortikal yapılar2,7,8rehberlik ederken geçirme nöronlar kortikal plaka doğru çekmek için dış yardımlar. Hücre döngüsü çıktıktan sonra INs püskürtüldü MGE kemoterapi itici cues kortikal plaka9,10doğru teğet geçiş tetikleyen MGE VZ içinde ifade tarafından. INs geçirme striatum farklı itici ipuçları11 yardımı ile önlemek ve, kortikal plaka ulaşan sonra onlar bir teğet bir Radyal geçiş moduna geçin ve onların son Laminer pozisyonda, kısmen yanıt ipuçlarını piramit ulaşmak hücreler12 ve diğer hücresel nüfus13. Bileşenler, geçiş diğer nöron popülasyonları gelince nöron fiili hareketi izin vermek için çeşitli dinamik morfolojik değişiklikleri içerir. Bu sözde nöronal hareket üç ardışık adımlar tekrarlayan döngüleri tarafından karakterize: uzama önde gelen bir süreç, bir etkin anterograd hareket çekirdeği (nucleokinesis) ve retraksiyon izleyen süreç14. Geçiş sırasında sürücü dallanma ve etkin INs Yönlendirme ve geçiş14,15 hızını belirleme uygun yönde rehberlik için önde gelen süreç remodeling çok sayıda iç ve dış yardımlar tarafından düzenlenmiştir ,16.
Geçişinde kortikal düzenleyen belirleyici son yıllarda1,2,7,17,18,19,20içinde kapsamlı bir şekilde inceledik, ve bazı bu moleküler aktörler bozulma Pediatrik dirençli epilepsi veya otizm spektrum bozuklukları1,2,21, gibi nörogelişimsel bozukluklar için öne 22 , 23 , 24. bu nedenle, çeşitli vitro ve in vivo yaklaşımlar geliştirilmesi önemli ölçüde bu dinamik bir süreç, daha önce geçirilmiş25olarak çalışmaya yeteneğimizi ilerlemek için takip. Vitro yöntemleri Boyden odası tahlil ve şerit seçim tahlil de dahil olmak üzere, gereksinim ve belirli genler veya proteinler hücre özerk etkisini nöronal geçiş sırasında değerlendirilmesi en hızlı ve en tekrarlanabilir anlamına gelir sağlamak, diğer faktörler25etkisi. Canlı görüntüleme8,26,27ile birleştirildiğinde bu deneyleri özellikle yararlıdır. Bu teknikleri ile bileşenler kolayca e13.5 MGE alındı ve sonra farklı sinyal yolları ve rehberlik cues soruşturma olması, enzimatik ve mekanik ayrışma tarafından daha önce8,28 gösterildiği gibi izole . Ancak, bu deneyleri yokluğunda potansiyel olarak etkileyen hücre göç ve/veya hayatta kalma25nöronal davranış ve hücre özelliklerini değiştirebilir üç boyutlu doku mimarisi, yapay bir hücre dışı matriks yer almaktadır. Bu sınırlamaları aşmak için ex vivo MGE explants hızı ve yönü14gibi parametreleri ile birlikte taşıma sırasında meydana gelen dinamik morfolojik değişiklikleri ölçmek için alternatif bir araç olarak geliştirilmiştir, 29. MGE explants üreten nispeten basit ve kapsamlı olmuştur başka bir bölümünde30. İkinci isteğe bağlı31olmasına rağmen MGE monolayer karışık kortikal hücrelerinin veya matrigel ve kollajen çekici veya itici cues25, huzurunda karışımı üzerinde küçük bir özü kaplama üzerine kuruludur. MGE explants seyrek etiketli hücreleri görüntüleme, çalışma hücre iskeleti dallanma, önde gelen işlemi sırasında yeniden daha önce32,33 gösterildiği gibi hücre içi süreçlerin basitleştirilmesi yüksek çözünürlük için izin ver ,34 ve çalışmanın içinde. MGE explants başarıyla dinamik hücre iskeleti değişimler sırasında geçiş 2D bir ortamda, örneğin belirli farmakolojik veya kemotaktik manipülasyonlar sonra (bkz, örneğin, Tielens vd. 201633) değerlendirmek için kullanılan . Ancak, bu yaklaşım ile INs göç içinde yapay bir matris ve bu davranış ve tekrarlanabilirlik ve deneysel sonuçlar önemini değiştirebilir.
Buna karşılık, rahim içinde elektroporasyon INs genetik manipülasyon kendi doğal ortamlarında sağlar ve hızla ve verimli bir şekilde değerlendirmek kazanç etkisini ve gen fonksiyon kaybı sınırlamaları engellemeyi süre için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir pahalı ve zaman alıcı nakavt ve çakma stratejileri25,35. Rahim içinde elektroporasyon doğru ataları içinde hücre türü belirli Organizatör kullanarak ve elektrotlar MGE36dahil olmak üzere ventromedial yapılar doğru konumlandırma önyargılı. Ayrıca, rahim içinde adım 1-2 gün içinde deneysel yapıları, zamanında ifade sağlar yapı ifade viral kullanmak için gereken 7-10 gün ile karşılaştırıldığında25Vektörler. Ancak, rahim içinde çoğalmasıyla, ataları olarak düşük verimli olma eğilimindedir. Piramit hücre ataları dorsal ventrikül bölgede bulunan verimli bir şekilde transfected rağmen Nitekim, rahim içinde kullanarak elektroporasyon MGE gibi daha ventrally bulunduğu yapıların hedefleme, daha teknik meydan okuyor, özellikle küçük e13.5 embriyo ve embriyonik ölümcül daha da yüksek oranda deneysel verim25azaltır.
Bazı vitro ile ilişkili teknik sınırlamaları aşmak için MGE explant deneyleri ve vivo rahimde çoğalmasıyla, ex vivo organotypic dilim kültürler gelişmiş8,37edilmiştir, 38,39. Beyin organotypic dilim kültürler teklif vivo içinde taklit avantajı koşulları, daha az pahalı ve zaman alıcı üreten hayvan25modelleri daha olurken. Gerçekten de, bu ürünleri ile birlikte ins, belirli görselleştirme MGE kolay bir erişime ve bileşenler altında bir daha fizyolojik çevre8 ' geçiş belirli moleküler yolları araştırmak için odak elektroporasyon ile birlikte , 39 , 40 , 41. biz bu nedenle bir yaklaşım eski utero elektroporasyon ve hızlandırılmış confocal görüntüleme ile kombine organotypic kültürler için38, optimize, morfolojik ve dinamik bir süreç meydana gelen değerlendirmek için daha fazla MGE-ins teğet geçiş sırasında. Mevcut Protokolü uyarlanmış ve piramidal hücreleri42,43 geçiş çalışmaya eski rahim veya rahim içinde beyin elektroporasyon ve organotypic dilim kültürler kullanan diğerlerinden en iyi duruma getirilmiş ve kortikal INs36,39,44. Özellikle, fare embriyo kesti ve MGE electroporated ex vivo deneysel plazmid, İntraventriküler enjeksiyon sonra ne ile elde edilebilir daha MGE ataları daha verimli ve hassas hedefleme izin vermek olur rahim içinde adım. Beyin sonra ayıklanır ve bir kaç günlüğüne kültürlü bütün beyin koronal dilimler halinde kesitli, böylece sürekli izleme ve sağlar transfected INs görüntüleme. Bu yaklaşım, genellikle 5-20 yüzeysel geçirme INs kolay ayrılması emin olmak için yeterince seyrek nöronal Vaha'da etiketleme istatistiksel anlamlılık, ulaşmak için gerekli deneysel yineleme sayısını en aza indirme başına beyin dilim, etiketleri bireysel nöronlar imar ve iyi morfolojik değerlendirme. Ayrıca, organotypic kültürlerin bu geçirme sağlamak MGE explants için karşılaştırıldığında INs maruz kalmış yerel olarak salgılanan kemokinler ve talamik afferents girdileri de dahil olmak üzere daha doğal bir ortam. Bu yaklaşım böylece yön ve göç yolu önde gelen işlem dallanma gibi daha hassas dinamik süreçler karakterizasyonu izin vermek için yeterli anatomik bilgi sunarken transfected bileşenleri tarafından kabul ölçmek için de uygundur, nucleokinesis ve sondaki işlem geri çekilmesi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Commercially available neuron-specific culture medium. Complete formulation available on this website: https://www.thermofisher.com/ca/en/home/technical-resources/media-formulation.251.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 serum-free supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X Serum-free neuron specific supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s (1X) L-15 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td>Commercially available neural-based culture medium supplemented with amino acids, vitamins and inorganic salts. Complete formulation available on the distributor&#39;s website&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum, heat inactivated</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>H1138-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurocell supplement N-2 100X</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>305-016</td>
			<td>Botteinstein&#39;s N-2 Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Square PETG Media Bottles 125 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89132-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Type A Biosafety Cabinet</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D+ glucose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SPM400.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>BiosShop</td>
			<td>MAG522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>AGA002.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.547.004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4 mm I.D. x 75 mm Capillary Tube</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>1-000-800/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil (heavy)</td>
			<td>Rougier Pharma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #5</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504511</td>
			<td>11 cm, straight, 0.06x0.07mm tips, antimagnetic. You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WPI Swiss Tweezers #7</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504504</td>
			<td>11.5 cm, 0.18x0.2mm, curved tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HTC Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504617</td>
			<td>11 cm, Straight, flat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501225</td>
			<td>16 cm, Sharp/sharp, straight. You will need 3 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501217</td>
			<td>12.5 cm, straight, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504478</td>
			<td>10.2 cm, full curve, serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey Tissue Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501996</td>
			<td>15 cm, 45&#176; angle, Delicate Jaw, 1.5mm wide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbran Microspatula with rounded ends</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>21-401-5</td>
			<td>You will need 2 of these.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td>60-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1800</td>
			<td>35-mm dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>S17432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes&#160;</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>170-CTB700-212</td>
			<td>3 mL, small bulb</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td>In replacement to our stereomicroscope which has been discontinued by the manufacturer (StereoMaster from FisherScientific)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro Square Porator</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>ECM 830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezertrodes, Plattinum Plated, 3mm</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 1 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica VT1000S Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEM, Single edge razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71952-10</td>
			<td>Remove the blunt end before inserting in the blade designated space of the vibratome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Slide 8 well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td>Pack of 15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell cell culture insert</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m pore, pack of 50.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi6000 microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk confocal head Ultraview Vox</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity 6.0 acquisition software</td>
			<td>Improvision/Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiveCell Stage top incubation system</td>
			<td>Pathology devices</td>
			<td>LC30030</td>
			<td>Provides Temperature, CO2 and humidity control.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mCherry-Lifeact-7</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>54491</td>
			<td>Gift from Michael Davidson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>25G bottle, certified by the Biological Stain Commission</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero electroporation and organotypic slice cultures of embryonic mouse brains for live-imaging of migrating gabaergic interneurons

GABAergic interneurons (Ins) sürücü biliş ve davranış nöronal ağların önemli bileşenleridir. Korteks doldurmak için mukadder INs yüzeysel (medial ve Kaudal ganglionic efendiler (MGE, CGE) dorsal kortikal plaka yanıt olarak bir değişiklik de dahil olmak üzere) ventral telencephalon içsel ve dışsal kökenli yerden göç İpuçları. Genetik olarak belirli yolları değiştirmek ve nasıl onlar için uygun gerekli dinamik hücre iskeleti değişiklikleri düzenleyen araştırmak için yıl içinde farklı yöntemleri geliştirilmiştir geçiş içinde. Rahim içinde elektroporasyon yoğun gen baskı etkisini incelemek için kullanılan veya overexpression belirli inç içinde morfoloji ve son konumu üzerinde etki değerlendirme sırasında alt türlerinden. Bu yaklaşım kolayca Radyal geçirme piramit hücreleri değiştirmek için kullanılırken, İzo rahim içinde elektroporasyon hedefleme bir düşük verim azalmıştır sağkalım oranları ve yavrularını verilen oluşturduğunda ancak, bu teknik açıdan daha zorlu bir zaman elektroporasyon MGE kaynaklı INs okurken geleneksel olarak e14.5 önce yapılır. Alternatif bir yaklaşım, MGE explants MGE için kolay erişim sağlar ve görüntüleme genetiği değiştirilmiş ins kolaylaştırmak. Ancak, bu explants içinde endojen rehberlik ipuçları ve talamik girişleri yoksun yapay bir matris içine INs geçirin. Bu bize bir yöntem teknik zorluklar içinde utero yaklaşımların engellemeyi INs daha doğal bir ortamda nerede geçirebilirsiniz optimize etmek için istenir. Bu yazıda, biz eski utero elektroporasyon kolayca izlemek, görüntü ve genetiği değiştirilmiş INs yanıt olarak kendi doğal yolları boyunca göç yeniden oluşturmak için organotypic dilim kültürler tarafından takip embriyonik fare beyin kombinasyonu tanımlamak endojen ipuçları. Her iki miktar geçiş hızlandırılmış confocal görüntüleme ile dinamik açıdan, yanı sıra çeşitli morfolojik parametreleri nöronal rekonstrüksiyonlar sabit immunolabeled doku üzerinde kullanma ayrıntılı bir analiz için bu yaklaşım sağlar.

Bu bölümde, biz temsilcisi sonuçları elde edilen denetim plazmid veya bir gen ilgi e13.5 fare embriyo organotypic dilim kültürler tarafından takip MGE hedefleme bir deneysel plazmid eski utero elektroporasyon takip sağlamak 37 ° C'de 48 h (için hızlandırılmış görüntüleme) veya (fiksasyon ve immunohistokimyasal etiketleme için) 72 saat inkübe (için şematik Protokolü Bkz: şekil 1B ). Temsilcisi bir MGE explant geçiş INs de res...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons at JoVE.com

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Eski Utero Elektroporasyon ve embriyonik fare beyni canlı görüntüleme, GABAergic Interneurons geçiş için Organotypic dilim kültürleri

Burada, electroporated beyin organotypic dilim kültürler fare embriyo confocal mikroskobu ve canlı görüntüleme teknikleri için uygun oluşturmak için düşük maliyetli ve güvenilir bir yöntem sağlamak.

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Organotipik Hipokampal Dilim Kültürler

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Fare Utero Elektroporasyon: Kontrollü Spatiotemporal Gen Transfeksiyon

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Embriyonik ventral orta beyin Organotipik Dilim Kültürler: dopaminerjik Nöronal Gelişim Eğitim Bir Sistem In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Organotipik Dilim Kültürleri Purkinje Hücre Dendritik Morfoloji Analizi

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Tarafından Embriyonik ve Erişkin Nöral Kök Hücre Genişletme<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporasyon veya Viral Stereotaksik Enjeksiyon

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Gelişmekte Fare Embriyonik Cortex mitoz Canlı Görüntüleme

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Kortikal internöronlar alt tip-selektif Elektroporasyon

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotipik Dilim Kültürler Oligodendrosit Dinamikler ve miyelinasyonun incelemek için

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Embriyonik Fare Beyni Organotipik Dilim Kültüründe Nöronların Geçiş Sürekli Konfokal Görüntüleme Kullanımı<em&gt; Utero&#39;da</em&gt; Elektroporasyon

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Hazırlık ve Immunostaining Myelinating Organotypic serebellar dilim kültürlerin

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...