Name: utilization of ultrasound guided tissue-directed cellular implantation for the establishment of biologically relevant metastatic tumor xenografts
Uploaded: 2018-05-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts at JoVE.com

تلقي هذا العمل الدعم من روبرت الخشب جونسون مؤسسة/آموس كلية تطوير البرنامج، توبمان معهد الأبحاث الطبية، وقسم جراحة الأطفال، جامعة ميتشجان. الكتاب أود أن أشكر كيمبر كونفيرسو-باران والدكتور ماركوس جربو للمساعدة مع إجراءات الحقن بالموجات فوق الصوتية ومنصة التصوير. ونشكر ترومبليي بول لمساعدته مع رسومات الشكل. ونشكر أيضا قسم الأشعة في "جامعة ميتشجان" لاستخدام مركز للتصوير الجزيئي والورم التصوير الأساسية، التي تدعمها جزئيا "مركز السرطان الشامل المعاهد الوطنية للصحة"، منح P30 CA046592. جامعة "ميشيغان فسيولوجيا Phenotyping الأساسية" معتمدة جزئيا بتمويل من منحة من المعهد الوطني للصحة (OD016502) ومركز القلب والأوعية الدموية فرانكل. تم مصادقة خط الخلية في "مرافق البحوث راديل إيديكسكس"، كولومبيا، ميزوري ونحن نشكر ستول تامي والدكتور راجين مودي وبرنامج علم الأورام الأورام الصلبة موت. لدينا المرضى والأسر العرفان للإلهام، وشجاعتهم، والدعم المستمر لابحاثنا.

وقد تم ذلك وفقا "جامعة ميتشجان" مجلس المراجعة المؤسسية (هوم 00052430) جميع الأعمال ويتفق مع الإجراءات التي أقرتها "اللجنة الجامعة" في استخدام ورعاية الحيوانات (أوكوكا). الوحدة للمختبر في الحيوان الطب (اولام) أشرفت على رعاية الحيوان.
كل عمل تم بموافقة من "جامعة ميتشجان" مجلس المراج?...

<ol>
	<li>Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+optimal+murine+models+to+investigate+immune+checkpoint+blockers+and+their+combination+with+other+immunotherapies.">Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies.</a> Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).</li><li>Fidler, I. J., Hart, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+diversity+in+metastatic+neoplasms:+origins+and+implications.">Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications.</a> Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).</li><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation.</a> Eur J Cancer. 40 (6), 852-857 (2004).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+Models+are+Necessary+to+Predict+Therapy+of+Transplantable+Tumors+in+Mice.">Orthotopic Models are Necessary to Predict Therapy of Transplantable Tumors in Mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17 (3), 279-284 (1998).</li><li>Daniel, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primary+xenograft+model+of+small-cell+lung+cancer+reveals+irreversible+changes+in+gene+expression+imposed+by+culture+in+vitro.">A primary xenograft model of small-cell lung cancer reveals irreversible changes in gene expression imposed by culture in vitro.</a> Cancer Res. 69 (8), 3364-3373 (2009).</li><li>Khanna, C., Jaboin, J. J., Drakos, E., Tsokos, M., Thiele, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologically+relevant+orthotopic+neuroblastoma+xenograft+models:+Primary+adrenal+tumor+growth+and+spontaneous+distant+metastasis.">Biologically relevant orthotopic neuroblastoma xenograft models: Primary adrenal tumor growth and spontaneous distant metastasis.</a> In Vivo. 16 (2), 77-85 (2002).</li><li>Stewart, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+human+orthotopic+neuroblastoma+xenograft.">Development and characterization of a human orthotopic neuroblastoma xenograft.</a> Dev Biol. 407, 344-355 (2015).</li><li>J&#228;ger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+Invasive+Establishment+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Xenografts.">Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts.</a> J. Vis. Exp. (84), e51123 (2014).</li><li>Teitz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Models+for+Neuroblastoma:+Establishing+a+Baseline+for+Treatment.">Preclinical Models for Neuroblastoma: Establishing a Baseline for Treatment.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19133 (2011).</li><li>Braekeveldt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+patient-derived+orthotopic+xenografts+retain+metastatic+patterns+and+geno-+and+phenotypes+of+patient+tumours.">Neuroblastoma patient-derived orthotopic xenografts retain metastatic patterns and geno- and phenotypes of patient tumours.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), 252-261 (2015).</li><li>Van Noord, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-directed+Implantation+Using+Ultrasound+Visualization+for+Development+of+Biologically+Relevant+Metastatic+Tumor+Xenografts.">Tissue-directed Implantation Using Ultrasound Visualization for Development of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts.</a> In Vivo. 31 (5), 779-791 (2017).</li><li>Vormoor, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Preclinical+Orthotopic+Xenograft+Model+of+Ewing+Sarcoma+and+Other+Human+Malignant+Bone+Disease+Using+Advanced+In+Vivo+Imaging.">Development of a Preclinical Orthotopic Xenograft Model of Ewing Sarcoma and Other Human Malignant Bone Disease Using Advanced In Vivo Imaging.</a> PLoS ONE. 9 (1), e85128 (2014).</li><li>Hakky, T. S., Gonzalvo, A. A., Lockhart, J. L., Rodriguez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Ewing+sarcoma+of+the+kidney:+a+symptomatic+presentation+and+review+of+the+literature.">Primary Ewing sarcoma of the kidney: a symptomatic presentation and review of the literature.</a> Ther Adv Urol. 5 (3), 153-159 (2013).</li><li>Cheng, H., Clarkson, P. W., Gao, D., Pacheco, M., Wang, Y., Nielsen, T. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Antibodies+Targeting+CSF1+Impede+Macrophage+Recruitment+in+a+Xenograft+Model+of+Tenosynovial+Giant+Cell+Tumor.">Therapeutic Antibodies Targeting CSF1 Impede Macrophage Recruitment in a Xenograft Model of Tenosynovial Giant Cell Tumor.</a> Sarcoma. 2010, 174528 (2010).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Hemacytometer+to+Count+Cells.">Using a Hemacytometer to Count Cells.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2018).</li></ol>

زرع خلايا ملحوظة ووفاق الموجهة بالموجات فوق الصوتية وسيلة فعالة وآمنة لإثبات موثوقية تكثيفها مورين للدراسات الإكلينيكية في بيولوجيا السرطان. حاسمة بالنسبة لنجاح الموجهة بالموجات فوق الصوتية هو زرع الأنسجة المستهدفة بوجود وتوافر الموظفين المدربين ذوي الخبرة في تشريحيا إضفاء الطابع الم...

نماذج xenograft الحيوانية أدوات أساسية للدراسات الإكلينيكية لرواية علاجات السرطان. تكثيفها موريني القياسية تعتمد على غرس الجناح تحت الجلد من الخلايا، وتزويد موقع كفاءة ويمكن الوصول إليها بسهولة لرصد نمو الورم. العيب نماذج تحت الجلد هو افتقارها إلى الخصائص البيولوجية الخاصة بالأورام، التي قد تحد من إمكاناتها السرطاني1. يتم التغلب على هذه القيود باستخدام أورثوتوبيك تكثيفها في أي ورم الخلايا هي انجرافتيد في مواقع النسيج الأصلي، وتزويد المكروية ذات صلة المحتملة النقيلي2. نماذج إكسينوجرافت أورثوتوبيك الحفاظ على السمات البيولوجية الأصلية، وتوفير نماذج موثوقة لاكتشاف العقاقير السريري3،4. الخلايا السرطانية تستخدم لزرع الأنسجة الموجهة هي خطوط الخلايا المحددة أو خلايا المريض-مشتقة من أورام المرضى. قد يحمل تكثيفها المنشأة من خطوط خلايا السرطان عالية التباين الوراثية من الورم الرئيسي مقارنة بتكثيفها المشتقة المريض5. ونظرا لهذا، أصبح إنشاء تكثيفها أورثوتوبيك المستمدة من المريض المعيار المفضل لاختبار علاجات جديدة في اكتشاف الأدوية السرطان.
في نيوروبلاستوما السرطان طب الأطفال (ملحوظة)، نماذج إكسينوجرافت أورثوتوبيك الخص البيولوجيا الورم الرئيسي، وتطوير ورم خبيث لمواقع نموذجية لملاحظة: نشر6،7. ملحوظة: يطور في الغدة الكظرية أو على طول سلسلة متعاطفة مع مجاورة. الأساليب الأكثر شيوعاً لزرع أورثوتوبيك تتطلب فتح البطن عبر العمليات الجراحية. هذه الأساليب غالباً ما تكون شاقة، والأمراض الحيوانية عالية، وفترات الانتعاش المعقدة. وقد استخدمت الاستبانة بالموجات فوق الصوتية مؤخرا لزرع الأنسجة الموجهة للخلايا السرطانية في تطوير عدة نماذج مورين لبحوث السرطان8،9. هذا الأسلوب موثوق بها، واستنساخه، فعالة وآمنة لإقامة الصلة الورم المنتشر تكثيفها10،11.
إنشاء تكثيفها طب السرطان بهدف الاسترشاد بالموجات فوق الصوتية الجهاز التعريب وابرة زرع خطوط الخلايا والخلايا السرطانية المستمدة من المريض هو أظهر11. واستخدمت التقنية لملاحظة موجهة إلى الغدة الكظرية مورين. ساركومه يوينغ في (ES) في الغالب سرطان العظمى، ينظر عادة في العظام الطويلة مثل عظمة الفخذ وعظام الحوض12. وقد أظهرت تقارير حالة أن تحديد ما إذا كان نمو السرطان العظمى الغالب عمليا في الأنسجة الكلوية، اختير موقع الحافظة شبه الكلي ل غرس أورثوتوبيك13. وقد استخدمت sub الكلوي الخلية الحافظة زرع الخلايا السرطانية كنموذج واعدة لدراسة الانبثاث العفوية لوفاق14.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1053">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Mice</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NOD-SCID</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NSG</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>5557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Line&#160;</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">NB</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">IMR-32</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td>CCL-127</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">SH-SY5Y</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td style="width:232px;">CRL-2266</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">SK-N-Be2</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td style="width:232px;">CRL-2271</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">ES</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TC32&#160;</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">A673</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CHLA-25</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">A4573</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Line media</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">RPMI</td>
			<td style="width:231px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:232px;">11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Matrigel</td>
			<td style="width:231px;">BD BioSciences</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Dissociation</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Dissection Tools</td>
			<td style="width:231px;">KentScientific</td>
			<td style="width:232px;">INSMOUSEKIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Human Tumor Dissociation Kit&#160;</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:232px;">130-095-929</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gentleMACS dissociator</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">gentleMACS C tubes</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Strainer</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td>431751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Luciferase Tagging</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Lenti-GFP1 virus</td>
			<td style="width:231px;">University of Michigan, Vector Core</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Luciferase Virus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Steady Glo-Luciferase Assay Kit</td>
			<td style="width:231px;">Promega</td>
			<td>E2510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Bioluminescence Imaging</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Ivis Spectrum Imaging System</td>
			<td style="width:231px;">PerkinElmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">D-Luciferin</td>
			<td style="width:231px;">Promega</td>
			<td>E160X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Anesthetic</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Inhaled Isoflurane&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Piramal Critical Care Inc</td>
			<td style="width:232px;">66794-0017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Ultrasound Guided Injection</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Vevo 2100 High Resolution Imaging</td>
			<td style="width:231px;">Vevo</td>
			<td style="width:232px;">2100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Hamilton Syringes (27 gauge needle)</td>
			<td style="width:231px;">Hamilton</td>
			<td style="width:232px;">80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">22 Gauge Angiocatheter</td>
			<td style="width:231px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:232px;">381423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Optical ointment</td>
			<td style="width:231px;">Major Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:232px;">301909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Nair</td>
			<td style="width:231px;">Church &#38; Dwight Co</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td style="width:295px;">Hair Removal agent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Aquasonic 100 Ultrasound Transmission gel</td>
			<td style="width:231px;">Parker</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Histology</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">CD99</td>
			<td style="width:231px;">DAKO</td>
			<td>M3601</td>
			<td>Primary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Tyrosine Hydroxylase</td>
			<td style="width:231px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2928</td>
			<td>Primary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Secondary HRP-Polymer antibody</td>
			<td style="width:231px;">Biocare</td>
			<td>BRR4056KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Miscelleneous</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">10 mL Pipettes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">13-676-10J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">5 mL Pipettes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">13-676-10H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">1.5 mL Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P1000 pipette</td>
			<td style="width:231px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:232px;">3120000062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P200 pipette</td>
			<td style="width:231px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:232px;">3120000054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P1000 pipette tips</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">21-375E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P200 pipette tips</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">21-375D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Portable pipette aid</td>
			<td style="width:231px;">Drummond</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">digital animal Weighing Scale&#160;</td>
			<td style="width:231px;">KentScientific</td>
			<td style="width:232px;">SCL-1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Calipers</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">06-664-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">6well low attachment plates</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td style="width:232px;">07-200-601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">10 cm Tissue Culture Treated Dishes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">FB012924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Polybrene</td>
			<td style="width:231px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:232px;">TR-1003-G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilization of ultrasound guided tissue-directed cellular implantation for the establishment of biologically relevant metastatic tumor xenografts

التجارب الإكلينيكية لعلاجات السرطان يعتمد على نماذج xenograft ذات الصلة التي تحاكي ميول فطرية للسرطان. وتشمل مزايا النماذج القياسية الجناح تحت الجلد سهولة إجرائية، والقدرة على رصد تطور الورم والاستجابة دون تصوير الغازية. هذه النماذج غالباً ما تكون غير متناسقة في التجارب السريرية متعدية الجنسيات ومحدودة من الخصائص ذات الصلة بيولوجيا مع نزوع منخفضة لإنتاج ورم خبيث، كما أن هناك نقص المكروية الأصلي. وبالمقارنة، أظهرت نماذج إكسينوجرافت أورثوتوبيك في مواقع الورم الأصلي إلى تقليد وورم المكروية وتكرار خصائص الأمراض الهامة مثل انتشار المنتشر بعيد المنال. غالباً ما تتطلب هذه النماذج مملة العمليات الجراحية مع فترات طويلة من الزمن والإنعاش مخدر. ولمعالجة ذلك، استخدمت الباحثين السرطان مؤخرا تقنيات الحقن الموجهة بالموجات فوق الصوتية سرطان إكسينوجرافت وضع نماذج للتجارب الإكلينيكية، والتي تسمح بإنشاء نماذج مورين الموجه من الأنسجة سريعة وموثوق بها. التصوير بالموجات فوق الصوتية كما يوفر أسلوب موسع لتقييم طولية للورم انجرافتمينت والنمو. هنا، نحن تصف طريقة الحقن الموجهة بالموجات فوق الصوتية للخلايا السرطانية، استخدام الغدة الكظرية ملحوظة وكبسولة شبه الكلي لوفاق. هذا النهج كسبها يتغلب على الجراحة المفتوحة مملة زرع الخلايا السرطانية في المواقع الخاصة بالانسجة للنمو وورم خبيث، ويوقف فترات الانتعاش المهووسين. يصف لنا الاستفادة من خطوط الخلايا المحددة وخطوط الخلايا المشتقة المرضى لحقن أورثوتوبيك. تتوفر مجموعات تجارية مسبقة الصنع للانفصال من ورم ووضع علامات لوسيفراس من الخلايا. حقن تعليق خلية باستخدام الصورة-التوجيه يوفر منبرا الحد الأدنى الغازية واستنساخه لإنشاء نماذج الإكلينيكية. ويستخدم هذا الأسلوب لإنشاء نماذج موثوقة السريرية لسرطانات أخرى مثل المثانة والكبد والبنكرياس تجسد إمكانات لم تستغل بعد للعديد من النماذج السرطان.

استخدام الإجراءات المقدمة، تم غرس الموجهة بالموجات فوق الصوتية للخلايا ملحوظة في الغدة الكظرية في إجراء مخصص غرفة مجهزة بطاولة العمليات جراحية ساخنة. تم وضع منصات الذراع والقدم لمراقبة نشاط القلب مورين (الشكل 1A). وظل الحيوان أنيسثيتيزيد تحت إيسوفلوراني ...

Watch this Scientific Journal Video about Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts at JoVE.com

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

نقدم هنا، على بروتوكول استخدام حقن نيوروبلاستوما (ملحوظة) والخلايا ساركومه (ES) يوينغ الموجهة بالموجات فوق الصوتية (إنشاء خطوط الخلايا والخلايا السرطانية المستمدة من المريض) في المواقع ذات الصلة بيولوجيا لإنشاء نماذج موثوقة السريرية للسرطان البحث.

استخدام الموجات فوق الصوتية تسترشد الأنسجة الموجهة غرس الخلوية لإنشاء تكثيفها الورم المنتشر بيولوجيا ذات الصلة

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

The goal of this method is to establish biologically relevant cancer orthotopic xenografts for preclinical studies. Patient-derived neuroblastoma cells are injected into the murine adrenal gland by ultrasound guidance without open surgery or prolonged recovery. This method can help answer critical questions in cancer biology and in translational research, such as studies of tumor evolution, therapeutic responses in the native microenvironment and metastases.Such a knowledge would greatly improve the reliability of preclinical studies and facilitate drug discovery. The main advantage of this technique is that it is patient-derived, tissue-directed, efficient, and reliable in producing an orthotopic xenographed model for cancer therapy research. Demonstrating the critical steps in the procedure will be Sahiti Chukkapalli, a senior technician and our lab manager, along with Tina Thomas, a research fellow in our laboratory.Generate a single, patient-derived cancer cell suspension from tumor tissue using a tumor dissociation kit. Begin by transferring approximately half a gram of tumor tissue to a 100 millimeter cell culture dish containing five milliliters of enzyme supplemented RPMI buffer. Then, use scissors and tissue forceps to mince the tumor into small pieces of two to four millimeters.Pipette the tumor mixture into a dissociater tube and close the tube. Invert the tube, attach onto the sleeve of a tissue dissociater, and dissociate the tissue using the appropriate program. After dissociating, incubate the tumor cell suspension on a rotating rack at 37 degrees Celsius for one hour.Triturate the cell suspension every 15 minutes during the incubation. Following the incubation, transfer the cell suspension to a new 50 milliliter conical tube and add 10 milliliters of RPMI. Then, centrifuge the cell suspension at 314g for five minutes.After the centrifugation, remove the supernatant and suspend the pellet in five milliliters of RPMI. Pass the cell suspension through a 40 micron cell strainer and collect the strained solution into a fresh, 50 milliliter tube. After washing the strainer with five milliliters of RPMI media, centrifuge the cell suspension at 314g for five minutes to collect a pellet.Count the cells using a hemocytometer. Then, suspend the pellet in RPMI to obtain a final concentration of four times 10 to the five cells per 10 microliter volume. Transfer five microliters of this cell suspension per injection to a fresh tube, and the same volume of basement membrane matrix to make 10 microliters of cell solution for each injection and place it on ice.Transfer the mouse to the imaging platform with the abdominal side down. Fit and secure the nose cone to maintain isoflurane anesthesia. Begin the implantation procedure using hair removal lotion and a shaver to depilate the back and flank of a properly anesthetized six to eight week old immune-deficient NSG mouse.Apply optical ointment over the animal's eyes to prevent drying. Then, tape the mouse in place to prevent any inadvertent movement. Next, use ultrasound visualization to identify the murine liver, vena cava, spleen, left kidney, and adjacent left adrenal gland.Load a chilled Hamilton syringe, fitted with a small bore needle, with 10 microliters of cell solution. Then, under ultrasound guidance, gently inserted a chilled 22-gauge catheter through the skin and back muscle, directly into the left adrenal gland to provide a channel for cellular injection. Remove the needle and leave the catheter in place.Visualization of the adrenal gland throughout the insertion of the catheter, along with the needle and its trajectory, is imperative to ensure minimal injury to surrounding structures and organs and lower murine morbidity. Then, guide the syringe through the catheter positioned into the center of the adrenal gland. As the syringe is guided through the catheter, it is important to maintain catheter stability and watch the needle advance.Note that the needle itself extends approximately two millimeters beyond termination of the catheter, its position easily seen on ultrasound. Inject the cells into the targeted adrenal tissue. Leave the needle in place for one to two minutes to allow the basement membrane matrix to set.After the basement membrane matrix has set, slowly remove the needle, followed by the removal of the catheter. Finally, place the mouse into a recovery cage until it regains sufficient consciousness to maintain sternal recumbency before returning to the home cage. Ultrasound imaging monitors in vivo tumor progression.This image shows an ultrasound image of the adrenal gland, one week following injection. Here, luminescence imaging of a neuroblastoma injected mouse one week post-injection, shows readings not indicative of tumor engraftment. After two weeks, ultrasound imaging shows tumor engraftment and progression to an area of approximately 40 square millimeters.Bioluminescence at two weeks post-injection showed radiance measuring 10 to the seventh, which is suggestive of cell uptake and tumor growth correlating with ultrasound findings. Ultrasound imaging eight weeks post-injection showed continued tumor growth with an area measurement of greater than 100 square millimeters. Again, bioluminescence confirmed the ultrasound findings with increased radiance levels of 10 to the nine.3-D ultrasound imaging of the tumor showed a volume greater than 100 cubic millimeters, the baseline that our laboratory utilizes for initiation of preclinical therapeutic trials. Excised tumor grossly measured greater than one centimeter in size, correlating with ultrasound measurements and luminescence signals. This media provides demonstration of how to successfully establish adrenal orthotopic xenographs with patient-derived neuroblastoma cells, utilizing ultrasound guidance.Once mastered, this technique can be done in less than 12 minutes per injection if it is performed properly.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ال<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تخيلي ورم القرص نموذج: التصور والكمي للالتعبير الجيني وغزو الورم عن طريق الفسيفساء الوراثية

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

المتقدم نموذج حيواني من القولون والمستقيم ورم خبيث في الكبد: تقنيات التصوير وخصائص النقيلي النسخ

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Endobronchial Ultrasound-guided Intratumoral Injection of Cisplatin for the Treatment of Isolated Mediastinal Recurrence of Lung Cancer

ضمن القصبة الموجات فوق الصوتية الموجهة حقن Intratumoral من سيسبلاتين لمعاملة عزل المنصف تكرار من سرطان الرئة

Isolated hilar and mediastinal recurrence (IMHR) following external beam radiation therapy (EBRT) in patients with lung cancer is common. These patients ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

وضع العلامات لسرطان الثدي Xenografts المستمدة من المريض مع يمكن عزوها مراسلون لنمو الأورام والدراسات الانبثاث

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

إنشاء مقايسة الاستعمار الرئة لتعميم التصور خلية الورم في أنسجة الرئة

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

التحليل الجزئي للخلايا السرطانية المتداولة للتحليل الجزيئي المصب والتقييم المحتمل المنتشر

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

In Vivo Imaging and Quantitation of the Host Angiogenic Response in Zebrafish Tumor Xenografts

في التصوير في الجسم الحي وتكميم الاستجابة الوعائية المضيف في ورم حمار وحشي Xenografts

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

الموجات فوق الصوتية غرس العظام البنكرياس الاقنيه اللحمية

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...