Name: utilization of ultrasound guided tissue-directed cellular implantation for the establishment of biologically relevant metastatic tumor xenografts
Uploaded: 2018-05-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts at JoVE.com

이 작품은 로버트 우드 존슨 재단/아 모스 의료 교수 개발 프로그램, Taubman 연구소, 그리고 섹션 소아 수술, 미시간 대학에서 지원을 받았다. 저자는 Kimber Converso Baran와 닥터 마커 스 Jarboe 초음파 주입 절차와 지원 및 이미징 플랫폼에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리를 통해 그의 그림 그래픽 폴 Trombley 감사합니다. 우리는 또한 분자 이미징 및 종양 이미징 코어 종합 암 센터 NIH에 의해 부분에서 지원 되는 센터의 사용에 대 한 미시간 대학에서 방사선과 부서 감사 P30 CA046592 부여 합니다. 미시간 생리학 형질 코어 NIH (OD016502)와 프 랭 클 순환기 센터에서 교부에 의해 부분에서 지원 되는 대학. 셀 라인 인증 IDEXX RADIL Bioresearch 시설, 컬럼비아, 미주리에서 수행 되었다 우리 태 미 스 톨 박사 Rajen Mody, 모트 고체 종양 종양학 프로그램 감사합니다. 우리의 환자와 가족은 기꺼이 그들의 영감, 용기, 그리고 우리의 연구의 지속적인 지원에 대 한 인정 했다.

모든 작업과 미시간 대학 기관 검토 위원회 (흠 00052430)에 따라 수행 되었다 사용과 관리의 동물 (UCUCA)에 대학 위원회에 의해 승인 하는 절차를 따릅니다. 단위에 대 한 실험실의 동물 의학 (ULAM) 동물 보호를 만들었다.
모든 작업과 미시간 대학 기관 검토 위원회 (흠 00052430)에서 승인 되었으며 모든 인간의 연구 윤리 위원회 규정에 따른다. 인간의 세포는 잠재적으로 유해 물질,...

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	<li>Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+optimal+murine+models+to+investigate+immune+checkpoint+blockers+and+their+combination+with+other+immunotherapies.">Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies.</a> Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).</li><li>Fidler, I. J., Hart, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+diversity+in+metastatic+neoplasms:+origins+and+implications.">Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications.</a> Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).</li><li>Bibby, M. 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NB 및 ES 세포의 주입 초음파 기반 암 생물학에서 전 임상 연구에 대 한 안정적인 murine xenografts를 설정 하는 효율적이 고 안전한 방법입니다. 초음파 유도의 성공에 중요 한 조직 대상으로 이식 존재와 해부학 관심의 기관 현지화 및 종양 세포의 정위 적 주사에 전문성을 갖춘 훈련 된 인원의 가용성 이다.
종양 조직의 분리 설명된 환자 파생이 종이 식 모델을 개발 하는 중요 한 ...

동물이 종이 식 모델은 새로운 항 암 제 치료의 전 임상 연구를 위한 필수적인 도구입니다. 표준 murine xenografts 종양 성장 모니터링에 대 한 효율적이 고 쉽게 접근할 수 있는 사이트를 제공 하는 셀의 측면은 피하 주입에 의존 합니다. 피하 모델의 단점은1전이를 그들의 잠재력을 제한 수 있습니다 종양 특정 생물 학적 특성의 그들의 부족. 이러한 한계는 종양에서 세포는 전이성 잠재적인2관련 microenvironment를 제공 하는 기본 조직 위치에 engrafted orthotopic xenografts 사용 하 여 극복 됩니다. Orthotopic이 종이 식 모델 원래 생물 학적 기능을 유지 하 고 전 임상 약 발견3,4에 대 한 신뢰할 수 있는 모델을 제공. 암 세포 이식 조직 감독에 대 한 활용은 설립된 셀 라인 또는 환자 종양에서 환자에서 파생 된 셀입니다. 암 세포 선에서 설립 xenografts 환자 파생된 xenografts5에 비해 기본 종양에서 높은 유전 분기를 전시 수 있습니다. 이 감안할 때, 환자 파생 orthotopic xenografts 설립 암 약물 발견에 새로운 치료제를 테스트 하기 위한 기본 표준 되고있다.
소아 암 신경 (NB)에서 orthotopic이 종이 식 모델 기본 종양 생물학을 정리 하 고 전이 확산 주의6,7의 일반적인 사이트를 개발. NB은 아드레날린 선 또는 paravertebral 공감 체인을 개발 하고있다. Orthotopic 이식의 가장 일반적인 방법은 오픈 트랜스-복 부 수술 절차를 필요로합니다. 이러한 메서드는 종종 지루한, 높은 동물 사망률, 그리고 복잡 한 복구 기간. 고해상도 초음파 암 연구8,9에 대 한 몇 가지 murine 모델의 개발에 종양 세포의 식을 조직 감독에 대 한 최근 이용 되어 있다. 기술은 재현, 효율적, 안정적이 고 관련 전이성 종양 xenografts10,11의 설립에 대 한 안전입니다.
소아 암 xenografts 세포 선 및 환자 파생 된 종양 세포의 초음파 기반 대상 기관 현지화 및 바늘 주입에 의해의 설립 시연된11입니다. NB murine 아드레날린 선에 대상에 대 한 기술은 이용 되었다. Ewing의 육 종 (ES)은 주로 대 퇴 골과 골반 뼈12등 긴 뼈에서 일반적으로 볼 수는 뼈가 있는 암 이다. 사건 보고서는 주로 뼈가 있는 암 성장 신장 조직에서 가능 여부 확인, 하 신장 하위 capsular 위치 선정 되었다 orthotopic 이식13나타났습니다. 종양 세포의 신장 하위 capsular 세포 이식 ES14에 대 한 자연 스러운 전이 공부 하는 유망 모델으로 활용 되었습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1053">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Mice</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NOD-SCID</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NSG</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>5557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Line&#160;</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">NB</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">IMR-32</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td>CCL-127</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">SH-SY5Y</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td style="width:232px;">CRL-2266</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">SK-N-Be2</td>
			<td style="width:231px;">ATCC</td>
			<td style="width:232px;">CRL-2271</td>
			<td>Established human neuroblastoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">ES</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TC32&#160;</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">A673</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CHLA-25</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">A4573</td>
			<td style="width:231px;">COGcell.ORG</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Established human Ewing&#39;s Sarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Line media</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">RPMI</td>
			<td style="width:231px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:232px;">11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Matrigel</td>
			<td style="width:231px;">BD BioSciences</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Dissociation</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Dissection Tools</td>
			<td style="width:231px;">KentScientific</td>
			<td style="width:232px;">INSMOUSEKIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Human Tumor Dissociation Kit&#160;</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:232px;">130-095-929</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gentleMACS dissociator</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">gentleMACS C tubes</td>
			<td style="width:231px;">MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Cell Strainer</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td>431751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Luciferase Tagging</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Lenti-GFP1 virus</td>
			<td style="width:231px;">University of Michigan, Vector Core</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Luciferase Virus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Steady Glo-Luciferase Assay Kit</td>
			<td style="width:231px;">Promega</td>
			<td>E2510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Bioluminescence Imaging</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Ivis Spectrum Imaging System</td>
			<td style="width:231px;">PerkinElmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">D-Luciferin</td>
			<td style="width:231px;">Promega</td>
			<td>E160X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Anesthetic</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Inhaled Isoflurane&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Piramal Critical Care Inc</td>
			<td style="width:232px;">66794-0017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Ultrasound Guided Injection</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Vevo 2100 High Resolution Imaging</td>
			<td style="width:231px;">Vevo</td>
			<td style="width:232px;">2100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Hamilton Syringes (27 gauge needle)</td>
			<td style="width:231px;">Hamilton</td>
			<td style="width:232px;">80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">22 Gauge Angiocatheter</td>
			<td style="width:231px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:232px;">381423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Optical ointment</td>
			<td style="width:231px;">Major Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:232px;">301909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Nair</td>
			<td style="width:231px;">Church &#38; Dwight Co</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td style="width:295px;">Hair Removal agent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:296px;">Aquasonic 100 Ultrasound Transmission gel</td>
			<td style="width:231px;">Parker</td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td>Ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Histology</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">CD99</td>
			<td style="width:231px;">DAKO</td>
			<td>M3601</td>
			<td>Primary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Tyrosine Hydroxylase</td>
			<td style="width:231px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2928</td>
			<td>Primary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Secondary HRP-Polymer antibody</td>
			<td style="width:231px;">Biocare</td>
			<td>BRR4056KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Miscelleneous</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:232px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">10 mL Pipettes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">13-676-10J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">5 mL Pipettes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">13-676-10H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">1.5 mL Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P1000 pipette</td>
			<td style="width:231px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:232px;">3120000062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P200 pipette</td>
			<td style="width:231px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:232px;">3120000054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P1000 pipette tips</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">21-375E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">P200 pipette tips</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">21-375D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Portable pipette aid</td>
			<td style="width:231px;">Drummond</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">digital animal Weighing Scale&#160;</td>
			<td style="width:231px;">KentScientific</td>
			<td style="width:232px;">SCL-1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Calipers</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">06-664-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">6well low attachment plates</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td style="width:232px;">07-200-601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">10 cm Tissue Culture Treated Dishes</td>
			<td style="width:231px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:232px;">FB012924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:296px;">Polybrene</td>
			<td style="width:231px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:232px;">TR-1003-G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilization of ultrasound guided tissue-directed cellular implantation for the establishment of biologically relevant metastatic tumor xenografts

항 암 치료의 임상 시험 관련이 종이 식 모델을 암의 타고 난 경향을 모방에 의존 합니다. 표준 피하 측면 모델의 장점 절차 간편 하 고 모니터 종양 진행과 침략 적 영상 없이 응답 하는 기능을 포함합니다. 이러한 모델 자주 변환 임상 시험에서 일치 하지 않는 고 네이티브 microenvironment의 부족으로 전이 생산 하기 위해 낮은 경향으로 생물학으로 관련 된 특성을 제한 했다. 비교에서는, 기본 종양 사이트에서 orthotopic이 종이 식 모델 종양 microenvironment를 모방 하 여 먼 전이성 확산 등 중요 한 질병 특성을 복제 표시 되었습니다. 이러한 모델은 종종 지루한 수술 연장된 마 취 시간 및 회복 기간을 필요합니다. 이 해결 하기 위해 암 연구자는 최근 조직 감독 murine 모델의 신속 하 고 신뢰할 수 있는 설립에 대 한 수 있는 전 임상 실험에 대 한 암이 종이 식 모델 확립을 초음파 유도 주입 기술을 활용 하 고. 초음파 시각화는 또한 종양 engraftment 성장과의 경도 평가 대 한 비 침범 성 방법을 제공 한다. 여기, 우리는 ES에 대 한 주 및 신장이 캡슐에 아드레날린 선의 활용 암 세포의 주입 초음파 유도 하는 방법을 설명 합니다. 이 최소한 침략 적 접근 암 세포 성장 및 전이, 조직 특정 위치에서의 지루한 오픈 수술 주입을 극복 하 고 병 적인 복구 기간 상거래. 우리가 설립된 셀 라인과 orthotopic 주입에 대 한 환자 파생된 셀 라인의 사용률을 설명합니다. 미리 만든된 상업 키트 종양 분리 및 luciferase 셀의 태그에 대 한 사용할 수 있습니다. 이미지 지도 사용 하 여 세포 현 탁 액의 주입 전 임상 모델의 생성에 대 한 최소한 침략 적 하 고 재현 가능한 플랫폼을 제공 합니다. 이 메서드는 방광, 간, 췌 장 수많은 암 모델에 대 한 미 개발된 잠재력을 예증 등 다른 암에 대 한 신뢰할 수 있는 전 임상 모델을 만드는 데 이용 된다.

제시 하는 절차를 사용 하 여, 초음파 유도 주입 주의 세포의 아드레날린 선으로 온수 수술 테이블을 갖춘 전용된 프로시저 룸에서 이루어졌다. 팔과 발 패드 murine 심장 활동 (그림 1A)를 모니터링 하기 위한 배치 했다. 동물 마 취 isoflurane 원뿔 흡입을 사용 하 여 아래에 남아 있었다. 고해상도 초음파 프로브를 사용 하 여 왼쪽된 신장 신장 (<strong class=...

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Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

여기, 우리는 암에 대 한 신뢰할 수 있는 전 임상 모델을 만드는 생물학 관련 사이트에서 초음파 유도 신경 (NB) 및 Ewing의 육 (ES) 세포의 주입을 활용 (설립 세포 및 종양 환자에서 파생 된 셀) 프로토콜 제시 연구입니다.

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

The goal of this method is to establish biologically relevant cancer orthotopic xenografts for preclinical studies. Patient-derived neuroblastoma cells are injected into the murine adrenal gland by ultrasound guidance without open surgery or prolonged recovery. This method can help answer critical questions in cancer biology and in translational research, such as studies of tumor evolution, therapeutic responses in the native microenvironment and metastases.Such a knowledge would greatly improve the reliability of preclinical studies and facilitate drug discovery. The main advantage of this technique is that it is patient-derived, tissue-directed, efficient, and reliable in producing an orthotopic xenographed model for cancer therapy research. Demonstrating the critical steps in the procedure will be Sahiti Chukkapalli, a senior technician and our lab manager, along with Tina Thomas, a research fellow in our laboratory.Generate a single, patient-derived cancer cell suspension from tumor tissue using a tumor dissociation kit. Begin by transferring approximately half a gram of tumor tissue to a 100 millimeter cell culture dish containing five milliliters of enzyme supplemented RPMI buffer. Then, use scissors and tissue forceps to mince the tumor into small pieces of two to four millimeters.Pipette the tumor mixture into a dissociater tube and close the tube. Invert the tube, attach onto the sleeve of a tissue dissociater, and dissociate the tissue using the appropriate program. After dissociating, incubate the tumor cell suspension on a rotating rack at 37 degrees Celsius for one hour.Triturate the cell suspension every 15 minutes during the incubation. Following the incubation, transfer the cell suspension to a new 50 milliliter conical tube and add 10 milliliters of RPMI. Then, centrifuge the cell suspension at 314g for five minutes.After the centrifugation, remove the supernatant and suspend the pellet in five milliliters of RPMI. Pass the cell suspension through a 40 micron cell strainer and collect the strained solution into a fresh, 50 milliliter tube. After washing the strainer with five milliliters of RPMI media, centrifuge the cell suspension at 314g for five minutes to collect a pellet.Count the cells using a hemocytometer. Then, suspend the pellet in RPMI to obtain a final concentration of four times 10 to the five cells per 10 microliter volume. Transfer five microliters of this cell suspension per injection to a fresh tube, and the same volume of basement membrane matrix to make 10 microliters of cell solution for each injection and place it on ice.Transfer the mouse to the imaging platform with the abdominal side down. Fit and secure the nose cone to maintain isoflurane anesthesia. Begin the implantation procedure using hair removal lotion and a shaver to depilate the back and flank of a properly anesthetized six to eight week old immune-deficient NSG mouse.Apply optical ointment over the animal's eyes to prevent drying. Then, tape the mouse in place to prevent any inadvertent movement. Next, use ultrasound visualization to identify the murine liver, vena cava, spleen, left kidney, and adjacent left adrenal gland.Load a chilled Hamilton syringe, fitted with a small bore needle, with 10 microliters of cell solution. Then, under ultrasound guidance, gently inserted a chilled 22-gauge catheter through the skin and back muscle, directly into the left adrenal gland to provide a channel for cellular injection. Remove the needle and leave the catheter in place.Visualization of the adrenal gland throughout the insertion of the catheter, along with the needle and its trajectory, is imperative to ensure minimal injury to surrounding structures and organs and lower murine morbidity. Then, guide the syringe through the catheter positioned into the center of the adrenal gland. As the syringe is guided through the catheter, it is important to maintain catheter stability and watch the needle advance.Note that the needle itself extends approximately two millimeters beyond termination of the catheter, its position easily seen on ultrasound. Inject the cells into the targeted adrenal tissue. Leave the needle in place for one to two minutes to allow the basement membrane matrix to set.After the basement membrane matrix has set, slowly remove the needle, followed by the removal of the catheter. Finally, place the mouse into a recovery cage until it regains sufficient consciousness to maintain sternal recumbency before returning to the home cage. Ultrasound imaging monitors in vivo tumor progression.This image shows an ultrasound image of the adrenal gland, one week following injection. Here, luminescence imaging of a neuroblastoma injected mouse one week post-injection, shows readings not indicative of tumor engraftment. After two weeks, ultrasound imaging shows tumor engraftment and progression to an area of approximately 40 square millimeters.Bioluminescence at two weeks post-injection showed radiance measuring 10 to the seventh, which is suggestive of cell uptake and tumor growth correlating with ultrasound findings. Ultrasound imaging eight weeks post-injection showed continued tumor growth with an area measurement of greater than 100 square millimeters. Again, bioluminescence confirmed the ultrasound findings with increased radiance levels of 10 to the nine.3-D ultrasound imaging of the tumor showed a volume greater than 100 cubic millimeters, the baseline that our laboratory utilizes for initiation of preclinical therapeutic trials. Excised tumor grossly measured greater than one centimeter in size, correlating with ultrasound measurements and luminescence signals. This media provides demonstration of how to successfully establish adrenal orthotopic xenographs with patient-derived neuroblastoma cells, utilizing ultrasound guidance.Once mastered, this technique can be done in less than 12 minutes per injection if it is performed properly.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

연구

암 연구학

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

고급 동물의 간에서 대장 전이의 모델 : 이미징 기술 및 전이성 클론의 특성

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Endobronchial Ultrasound-guided Intratumoral Injection of Cisplatin for the Treatment of Isolated Mediastinal Recurrence of Lung Cancer

기관지 폐암의 고립 된 종격동 재발의 치료에 시스플라틴의 종양 내 주입을 초음파 유도

Isolated hilar and mediastinal recurrence (IMHR) following external beam radiation therapy (EBRT) in patients with lung cancer is common. These patients ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

종양의 성장과 전이 연구 추적 가능한 기자와 유방암 환자 유래의 이종 이식의 라벨링

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

순환 종양 세포 시각화 폐 조직에 대 한 폐 식민 분석 결과의 설립

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

In Vivo Imaging and Quantitation of the Host Angiogenic Response in Zebrafish Tumor Xenografts

제브라피시 종양 이종이식에서 숙주 혈관조형성 반응의 생체 내 이미징 및 정량화

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

제브라피시의 1차 환자 유래 종양 이종이식의 약물 스크리닝

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...