Name: identification of cyclin-dependent kinase 1 specific phosphorylation sites by an in vitro kinase assay
Uploaded: 2018-05-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay at JoVE.com

Wir danken Dr. David King, Howard Hughes Medical Institute, University of California in Berkeley für Massenspektrometrie Analyse und hilfreichen Kommentare. Wir danken Dr. Xuelian Zhu Shanghai Institutes for Biological Sciences, chinesische Akademie von Wissenschaften, Shanghai, China für die Bereitstellung eines Full-Length CENP-F-Konstrukt. Zu guter Letzt danken wir Dr. Susan Bane, Dr. Brian Callahan und Dr. Christof Grewer an der Binghamton University für den Zugriff auf Geräte. Diese Forschung wurde von der Forschungsgemeinschaft für die State University of New York und der Fakultät für Chemie, State University of New York at Binghamton finanziert.

(1) Vorhersage von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Webseiten, die auf die Proteinsequenz
<ol><li>Analysieren Sie vor Beginn der Kinase Assay die Proteinsequenz für vorhergesagten Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites und suchen Sie die Literatur für experimentell etablierten Phosphorylierung Websites mit unbekannten Kinase Spezifität zu. Verwenden Sie die folgenden Tools, Datenbanken und Referenzen, die zusammengefasst sind.<ol>
<li>Verwenden Sie die iGPS 3.0 Software36,<sup cl...

Unsere in-vitro- Kinase Assay ist eine sehr leistungsfähige Methode zur Identifizierung von molekularer Zielstrukturen für die Kinase Cdk1, die eine übergeordnete Steuerung des Zellzyklus und reguliert viele wichtige zelluläre Prozesse. Die Methode bestimmt, ob ein gereinigtes Protein ein Substrat für Cdk1 ist und ermöglicht die Identifizierung von spezifischen Phosphorylierung Websites. Dies erleichtert die mechanistische Studien zur Regulation zellulärer Prozesse durch Phosphorylierung durch Cdk1.
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Kinasen sind Enzyme, die Übertragung von Phosphatgruppen von ATP auf Substraten und regulieren viele zelluläre Prozesse. Diese Phosphorylierung ist reversibel, schnell, fügt zwei negative Ladungen und freie Energie speichert und gehört zu den häufigsten posttranslationale Modifikationen von Zellen verwendet. Cdk1, die auch bekannt als Zellteilung Zyklus Protein 2 Homolog (cdc2) ist ein master-Controller für den Zellzyklus in allen Eukaryoten1,2,3,4,5, und phosphorylates ein Geschätzte 8 bis 13 % des Proteoms6,7.
Während Proteomik-Studien haben viele Phosphorylierung Websites in den Proteinen, in den meisten Fällen identifiziert ist die Kinase verantwortlich für diese Änderungen unbekannt. Die Anzahl der bekannten Cdk1 Zielen, vor allem in menschlichen Zellen ist niedrig7. Die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites ist wichtig, da es mechanistische Studien, die festlegen ermöglicht, wie Cdk1 Zellzyklus steuert. Regulierung des Zellzyklus ist wichtig für Treue Chromosom Segregation und Zellteilung, und eine Vielzahl von zellulären Prozessen auftreten, um diese wichtige physiologische Funktion unterstützen müssen. Dazu gehören aufzuhalten, Transkription und Translation vor dem Beginn der Mitose sowie eine dramatische Reorganisation in zellulare Struktur und Organisation, z. B. Demontage der Kernhülle, Chromosom Kondensation und Montage der mitotischen Spindel. Deregulierung und Fehler in diesen Prozessen verursachen Krebs, Geburtsschäden oder mitotische Zelltod. Spezifische Inhibitoren des Cdk1 wie RO-3306 waren entwickelten8, die bieten leistungsstarke Tools für funktionelle Studien, und einige dieser Inhibitoren sind derzeit in klinischen Studien zur Behandlung von Krebs (siehe9 zur Überprüfung).
Hier beschreiben wir einen in-vitro- Kinase Assay, der die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites ermöglicht. In diesem Test wird kommerziell verfügbare menschliche Cdk1/cyclin B verwendet, um eine gereinigte Ziel Protein in Vitrophosphorylieren. Phosphorylierung eines Substrates erhöht seine Masse und fügt zwei negative Ladungen; daher bestätigt erfolgreiche Phosphorylierung eine aufwärts Verschiebung der Protein Gel Band auf SDS-PAGE. Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites werden anschließend durch Massenspektrometrie Analyse des Proteins in Vitro phosphoryliert identifiziert. Experimentelles Design unterstützen, überprüfen wir auch Berechnungswerkzeuge und Referenzen für die Vorhersage von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites die Proteinsequenz. Darüber hinaus erläutern wir im folgenden Reinigung-Protokolle, die sehr reine und homogene Protein Vorbereitungen für die Kinase Assay ergeben. Schließlich identifizierte Phosphorylierung Websites durch funktionelle Studien überprüft werden müssen, und eine einfache Bindung-Assay wird hier beschrieben, für diesen Zweck. Kombiniert, ist dies ein sehr leistungsfähiges Ansatz, der Renditen Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites und mechanistische Studien in wie Cdk1 den Zellzyklus7,10,11 steuert. Da diese Methode auf gereinigten Proteinen angewiesen ist, kann es zu jedem Modell Organismus und Erträge zuverlässige Ergebnisse angewendet werden. Funktionale Überprüfung des erhaltenen Phosphorylierung Websites in Vitro wird jedoch empfohlen, wie Zellen zusätzliche regulatorische Mechanismen, z. B. posttranslationale Modifikationen, Interaktionspartner oder zellulären Lokalisation verfügen, kann Phosphorylierung Websites oder unzugänglich für die Anerkennung von Cdk1 rendern.
Cdk1 erkennt eine Konsens-Phosphorylierung-Website, die besteht aus (Ser/Thr-Pro-X-Lys/Arg), wo X ist keine Rückstände und ein Serin oder Threonin der Ort der Phosphorylierung ist. Besonders wichtig für die Anerkennung ist das Vorhandensein von Prolin in der + 1-Position. Darüber hinaus werden grundlegende Rückstände in den + 2 oder + 3 Positionen bevorzugt, mit die meisten Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites mit einer Lys oder Arg auf die + 3 position6,12.
Aktivierung des Cdk1 ist streng geregelt und führt zu Beginn der Mitose1,2,3,4,5. Im Allgemeinen hängt die Aktivität von cyclin-abhängigen Kinasen ihre Assoziation mit deutlichen Cyclin (cyclin A, B, C, D und E in den Menschen), die bei oszillierenden Ebenen in der gesamten Zellzyklus13ausgedrückt werden. Cdk1 Ausdruck ist konstant über den Zellzyklus und die Regulierung ihrer Tätigkeit stützt sich auf seine Assoziation mit den regulatorischen Untereinheiten cyclin A und cyclin B5,13,14,15, als gut als Post-translationalen Modifikationen. Bildung des Cdk1/cyclin B-Komplex ist erforderlich für die Kinase Aktivierung5,14,15,16,17,18. In der G2-Phase cyclin B übersetzt in das Zytosol und importiert in den Zellkern, wo es an Cdk15,14,15,16,17,18 bindet; jedoch wird Cdk1/cyclin B inaktiviert durch Phosphorylierung an Thr14 und Tyr15 Rückstände von der menschlichen Cdk1-hemmenden Kinasen Myt1 (cdc2-hemmenden membranassoziierten Tyrosin und Threonin-spezifische Kinase) und Wee1, bzw.19gehalten, 20,21. In der Spätphase der G2 Dephosphorylation Thr14 und Tyr15 durch Zellteilung Zyklus 25 Phosphatase (cdc25) aktiviert die Kinase-Aktivität des Cdk1/cyclin B-Komplex und löst die Einleitung der Mitose12,14, 18 , 20 , 22 , 23. Phosphorylierung des Thr161 auch für Cdk1/cyclin B Aktivierung ist erforderlich und wird durch Cdk7, die Aktivierung von Cdk-Kinase (CAK)18vermittelt. Abbau von cyclin B in Anaphase inaktiviert Cdk1, so dass Ausstieg aus Mitose24,25. Aktivierung des Cdk1/cyclin B wird daher ein komplizierter Prozess. Die hier vorgestellten Protokoll erfolgt mit handelsüblichen Cdk1/cyclin B. Während rekombinante Expression dieses Komplexes in Insektenzellen es aktiviert in Vivo durch endogene Kinasen14,20 ist und bleibt aktiv im gereinigten Zustand. Die daraus resultierende aktive, rekombinante menschliche Cdk1/cyclin B eignet sich für in-vitro- Kinase-Assays.
Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites in den menschlichen Zentromer Protein F (CENP-F)10. CENP-F ist ein Kinetochor-Protein, das befindet sich im Zellkern während der meisten Zeit der Interphase (G1 und S-Phase) und der Ausfuhr nach dem Zytosol in der G2 Phase26,27,28 in einer Cdk1-abhängigen Weise10, 11. nuklearen Lokalisierung durch einen zweiseitigen cNLS26gewährt wird. cNLSs werden von den Nukleartransporten Faktor Karyopherin α, erkannt, die zusammen mit Karyopherin β und RanGDP, die Einfuhr von cNLS-Cargo in den Zellkern29erleichtert. Nuclear Export in der G2-Phase wird über eine unbekannte Export Weg10erleichtert. Sobald CENP-F in die Zellflüssigkeit befindet, es wird eingestellt, um die Kernhülle und wiederum stellt den motor Protein Komplex dynien30,31. Dieser Weg ist wichtig, den Kern der Centrosome entsprechend während der Anfangsphase der mitotischen Spindel Baugruppe in ein dynien-abhängigen Weise positionieren ist wichtig für das richtige Timing der mitotischen Eintrag und ein grundlegender Vorgang im Gehirn Entwicklung30,31,32. Beginnend in der G2-Phase, wird CENP-F auch in das Kinetochor eingebaut wo hat wichtige Aufgaben für Treue Chromosom Abtrennung27,28,33,34,35 . Ein wichtigster regulatorische Schritt dieser Wege ist der nuklearen Export von CENP-F in der G2-Phase, die Cdk110,11abhängig ist. Wir beschreiben hier ein Protokoll für die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites in die cNLS CENP-f Phosphomimetic Mutationen dieser Seiten verlangsamen nuclear Import von CENP-F, was darauf hindeutet, dass Cdk1/cyclin B direkt zellulären Lokalisation der CENP-F durch Phosphorylierung von seinem cNLS10regelt.
Insgesamt, dieser in-vitro- Kinase Assay ermöglicht die Identifikation von spezifischen Substraten für die Kinase Cdk1. Purified Zielproteine phosphorylierten in Vitro durch die im Handel erhältlichen Cdk1/cyclin B-Komplex und die Phosphorylierung Websites sind werden anschließend durch Massenspektrometrie identifiziert. Die Identifikation des Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites unterstützt mechanistische Studien, die zeigen, wie Cdk1 Zellzyklus steuert.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2800 ml baffled Fernbach flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>44232XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>A-301-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>Fisher Scientfiic</td>
			<td>BP413-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzamidine hydrochloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>B6506-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bottletop filter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cdk1/cyclin B recombinant, human 20,000 U/mL</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>P6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cdk1/cyclin B (alternate source)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>14-450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cdk1/cyclin B (alternate source)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PV3292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cdk1/cyclin B + 10x PK buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>P6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CENP-F (residues 2987 &#8211; 3065) pGEX6P1 plasmid</td>
			<td>Available upon request.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge: Heraeus Multifuge X3R, cooled, with TX-1000 swing-out rotor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>10033-778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifugal filter units: Amicon Ultra-15 centrifugal filter units, 3 kDa cutoff, Ultracel-PL membranes</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>UFC900324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chlorampenicol</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>C-105-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D/L methionine</td>
			<td>Agros Organics / Fisher</td>
			<td>125650010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>desalting pipet tips: Zip tips</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>ZTC18S008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable chromatography columns, Econo-Pac 1.5 x 12 cm</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>7321010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>DTT50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli Rosetta 2(DE3)pLysS strain</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>71403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrospray ionization Fourier transform ion</td>
			<td>Bruker Amazon</td>
			<td>Apex III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cyclotron resonance mass spectrometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrospray ionization ion trap mass spectrometer</td>
			<td>Bruker Amazon</td>
			<td>custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fixed angle rotor: Fiberlite F15-8x-50cy</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>97040-276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPLC system: &#196;kta Pure FPLC</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>29032697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel filtration column: Superdex 200 Increase 10/300 GL</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>28990944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutathione agarose</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>16101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutathione, reduced</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>G4251-50g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>incubation shaker: multitron shaker</td>
			<td>Infors</td>
			<td>I10102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I2481C50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>kanamycin</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>K-120-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>karyopherin &#945; pet-28a pres plasmid</td>
			<td>Available upon request.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Bertani medium</td>
			<td>Fisher Scientfiic</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcentrifuge 5418R, refrigerated</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5401000013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes (0.5 ml)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30121023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes (1.5 ml)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel affinity gel: His-Select Nickel affinity gel</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P6611-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGEX-6P-1 plasmid</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>GE28-9546-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonyl fluoride</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>P470-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS protease: PreScission protease</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>27084301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phos-tag acrylamide</td>
			<td>Wako Pure Chem. Ind.</td>
			<td>304-93521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>reduced gluthathione</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>G4251-50g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>roundbottom centrifuge tubes (Oakridge tubes)</td>
			<td>Fisher Scientfiic</td>
			<td>055291D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>site-directed mutagenesis kit: QuikChange Lightning</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>210518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Site-Directed Mutagenesis Kit</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sonifier: Branson S-250D sonifier</td>
			<td>Branson</td>
			<td>15 338 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectra/Por 1RC dialysis membrane (6-8 kDa cutoff)</td>
			<td>Spectrum Labs</td>
			<td>08 670B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>swing out rotor TX-1000</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>10033-778</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of cyclin-dependent kinase 1 specific phosphorylation sites by an in vitro kinase assay

Cyclin-abhängige Kinase 1 (Cdk1) ist ein master-Controller für den Zellzyklus in allen Eukaryoten und schätzungsweise 8-13 % des Proteoms phosphorylates; die Anzahl der identifizierten Ziele für Cdk1, besonders in den menschlichen Zellen ist jedoch nach wie vor niedrig. Die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites ist wichtig, da sie mechanistische Einblicke in wie Cdk1 Zellzyklus steuert. Regulierung des Zellzyklus ist entscheidend für die treuen Chromosom Abtrennung und Mängel in diesen komplizierten Prozess zu Chromosomenaberrationen und Krebs führen.
Hier beschreiben wir einen in-vitro- Kinase Assay, der verwendet wird, um Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites zu identifizieren. In diesem Test ist ein gereinigtes Protein phosphorylierten in Vitro kommerziell verfügbare menschliche Cdk1/cyclin B. erfolgreich Phosphorylierung wird bestätigt durch SDS-PAGE und Phosphorylierung Websites werden anschließend durch Massenspektrometrie identifiziert. Wir beschreiben auch Reinigung-Protokolle, die Ausbeute sehr reine und homogene Protein Vorbereitungen für die Kinase Assay und eine verbindliche Assay für die funktionale Verifikation der identifizierten Phosphorylierung-Standorte, die die Interaktion zwischen den Sonden ein klassischer nuklearen Lokalisierung-Signal (cNLS) und seine Nukleartransporten Rezeptor Karyopherin α. Experimentelles Design unterstützen, überprüfen wir Ansätze für die Vorhersage von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites von Proteinsequenzen. Zusammen stellen diese Protokolle einen sehr leistungsfähigen Ansatz, der Renditen Cdk1-spezifische Phosphorylierung Sites und mechanistische Studien in wie Cdk1 Zellzyklus steuert. Da diese Methode stützt sich auf gereinigten Proteinen, kann es zu jedem Modell Organismus und Erträge zuverlässige Ergebnisse, vor allem in Kombination mit Zelle funktionelle Studien angewendet werden.

Wir haben vor kurzem einen in-vitro- Kinase Assay (Abbildung 1) verwendet, um Cdk1-spezifische Phosphorylierung Seiten in einem Fragment CENP-F zu ermitteln, die ein cNLS10enthalten. Dieses Signal verleiht nuklearen Lokalisierung von CENP-F während des größten Teils der Interphase. In der G2-Phase ist CENP-F aus dem Zellkern in das Zytosol in gewissem Sinne Cdk1-abhängige exportiert. Mechanistische Einblicke, wie Cdk1 rege...

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Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Cyclin-abhängige Kinase 1 (Cdk1) wird in der G2-Phase des Zellzyklus aktiviert und reguliert viele zelluläre Signalwege. Hier präsentieren wir ein Protokoll für eine in-vitro- Kinase Assay mit Cdk1, wodurch die Identifizierung von Cdk1-spezifische Phosphorylierung Websites für zellulare Ziele von diesem wichtigen Kinase.

Identifizierung von Cyclin-abhängige Kinase 1 spezifische Phosphorylierung Websites durch eine In-vitro- Kinase Assay

Cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) is a master controller for the cell cycle in all eukaryotes and phosphorylates an estimated 8 - 13% of the proteome; ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Quantification of Bacterial Histidine Kinase Autophosphorylation Using a Nitrocellulose Binding Assay

Quantifizierung der Bakterien Histidinkinase Autophosphorylierung eine Nitrocellulose-Bindungsassay unter Verwendung

We demonstrate a useful method for quantifying autophosphorylation of purified bacterial histidine kinases. Histidine kinases are known for their ...

Forschung

Biochemie

Assaying Protein Kinase Activity with Radiolabeled ATP

Test der Proteinkinase-Aktivität mit radioaktiv markiertem ATP

Protein kinases are able to govern large-scale cellular changes in response to complex arrays of stimuli, and much effort has been directed at uncovering ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

Oligopeptid-Konkurrenz-Assay zur Phosphorylierungsbestimmung

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

Ein In vitro- Test zur Erkennung der tRNA-Isopentenyl-Transferase-Aktivität

N6-isopentenyladenosine RNA modifications are functionally diverse and highly conserved among prokaryotes and eukaryotes. One of the most highly conserved ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Human periphere Blut Neutrophil Isolation für die Verhör der Parkinson-assoziierten LRRK2 Kinase Weg durch Bewertung Rab10 Phosphorylierung

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifizierung von neuartigen CK2 Kinase Substrate mit einem vielseitigen biochemischen Ansatz

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

Studium der RNA Interaktoren des RNA während der Säugetier-Zelle Zyklus aktiviert Proteinkinase

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...

Enhancing the Engraftment of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Cardiomyocytes via a Transient Inhibition of Rho Kinase Activity

Verbesserung der Transplantation von humaninduzierten pluripotenten Stammzellen abgeleiteten Kardiomyozyten über eine transiente Hemmung der Rho Kinase Aktivität

A crucial factor in improving cellular therapy effectiveness for myocardial regeneration is to safely and efficiently increase the cell engraftment rate. ...

Characterization at the Molecular Level using Robust Biochemical Approaches of a New Kinase Protein

Charakterisierung auf molekularer Ebene mit robusten biochemischen Ansätzen eines neuen Kinase-Proteins

Extensive whole genome sequencing has identified many Open Reading Frames (ORFs) providing many potential proteins. These proteins may have important ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinase-Inhibitor-Screening in selbstmontierten humanen Protein-Mikroarrays

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...