Name: bronchoalveolar lavage exosomes in lipopolysaccharide-induced septic lung injury
Uploaded: 2018-05-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury at JoVE.com

Författarna har förklarat någon intressekonflikt.

Övergripande protokollet kräver 2 dagar, inklusive den första dagen av sepsis induktion och isolering av BAL vätska från djuret, och den andra dagen för exosomes isolering från musen BALF. Alla förfaranden har granskats och godkänts av institutionella djur vård och användning kommittén vid Atlanta VA medical center.
1. akut septisk Lung skada musmodell
<ol><li>Använd 6-8 veckor - gamla vildtyp C57BL/6J hanmöss (vikt 20-22 g) för djuret modellera och utför alla procedurer med ...

<ol>
	<li>Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+acute+lung+injury.">Epidemiology and outcomes of acute lung injury.</a> Chest. 131, 554-562 (2007).</li><li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+manipulated+mouse+models+of+lung+disease:+potential+and+pitfalls.">Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).</li><li>Han, S., Mallampalli, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+respiratory+distress+syndrome:+from+mechanism+to+translation.">The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation.</a> Journal of immunology. , 855-860 (1950).</li><li>Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome:+A+Review+of+Analytical+Approaches,+Pathologic+Features,+and+Common+Measurements.">Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements.</a> Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).</li><li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+lung+injury.">Animal models of acute lung injury.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).</li><li>Terrasini, N., Lionetti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+in+Critical+Illness.">Exosomes in Critical Illness.</a> Critical care medicine. , (2017).</li><li>Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles:+New+Players+in+Lung+Immunity.">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).</li><li>Kubo, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles+in+Lung+Disease.">Extracellular Vesicles in Lung Disease.</a> Chest. 153, 210-216 (2018).</li><li>Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+widespread+regulation+of+microRNA+biogenesis,+function+and+decay.">The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay.</a> Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).</li><li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs:+target+recognition+and+regulatory+functions.">MicroRNAs: target recognition and regulatory functions.</a> Cell. 136, 215-233 (2009).</li><li>Fanini, F., Fabbri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CANCER-DERIVED+EXOSOMIC+microRNAs+SHAPE+THE+IMMUNE+SYSTEM+WITHIN+THE+TUMOR+MICROENVIRONMENT:+STATE+OF+THE+ART.">CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART.</a> Seminars in cell &amp; developmental biology. , (2016).</li><li>Agarwal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental,+Systems,+and+Computational+Approaches+to+Understanding+the+MicroRNA-Mediated+Reparative+Potential+of+Cardiac+Progenitor+Cell-Derived+Exosomes+From+Pediatric+Patients.">Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients.</a> Circulation research. 120, 701-712 (2017).</li><li>Prattichizzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+microRNAs+and+endothelial+hyperglycaemic+memory:+a+therapeutic+opportunity?.">Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity?.</a> Diabetes, obesity &amp; metabolism. 18, 855-867 (2016).</li><li>Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles:+Novel+Mediators+of+Cell+Communication+In+Metabolic+Disease.">Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease.</a> Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).</li><li>Khalyfa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+Plasma+Extracellular+Microvesicle+MicroRNA+Cargo+and+Endothelial+Dysfunction+in+Children+with+Obstructive+Sleep+Apnea.">Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).</li><li>Thomou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+circulating+miRNAs+regulate+gene+expression+in+other+tissues.">Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues.</a> Nature. 542, 450-455 (2017).</li><li>Gregson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Exosomal+RNA+Profiles+in+Bronchoalveolar+Lavage+from+Lung+Transplants+with+Acute+Rejection.">Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).</li><li>Valadi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-mediated+transfer+of+mRNAs+and+microRNAs+is+a+novel+mechanism+of+genetic+exchange+between+cells.">Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells.</a> Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).</li><li>Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+Regulation+of+miR-155+and+miR-146a+Genes+during+Induction+of+Endotoxin+Tolerance+in+Macrophages.">Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages.</a> Journal of immunology. , 5750-5761 (2015).</li><li>Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+activation+and+functional+specialization+of+miR-146+and+miR-155+in+innate+immune+sensing.">Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing.</a> Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).</li><li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin.">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nature communications. 6, 7321 (2015).</li><li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TREM-1+is+induced+in+tumor+associated+macrophages+by+cyclo-oxygenase+pathway+in+human+non-small+cell+lung+cancer.">TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer.</a> PloS one. 9, e94241 (2014).</li><li>Xu, R., Richards, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+In+Vitro+Co-Culture+Model+in+Anti-Cancer+Drug+Development+Cascade.">Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade.</a> Combinatorial chemistry &amp; high throughput screening. 20, 451-457 (2017).</li><li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TREM-1-accentuated+lung+injury+via+miR-155+is+inhibited+by+LP17+nanomedicine.">TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).</li><li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-dose+dexamethasone+accentuates+nuclear+factor-kappa+b+activation+in+endotoxin-treated+mice.">High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).</li><li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+mediated+epigenetic+modulation+inhibits+TREM-1+expression+in+response+to+lipopolysaccharide.">Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide.</a> The international journal of biochemistry &amp; cell biology. 44, 2032-2043 (2012).</li><li>Chauret, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlorine+dioxide+inactivation+of+Cryptosporidium+parvum+oocysts+and+bacterial+spore+indicators.">Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators.</a> Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).</li><li>Cizmar, P., Yuana, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+Characterization+of+Extracellular+Vesicles+by+Transmission+and+Cryo-Transmission+Electron+Microscopy.">Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy.</a> Methods in molecular biology. , 221-232 (2017).</li><li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-related+proteins+prolong+macrophage+survival+through+induction+of+Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-1.">HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1.</a> Scientific reports. 7, 42028 (2017).</li><li>Jackson, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Mitochondrial+Transfer+in+Direct+Co-cultures+of+Human+Monocyte-derived+Macrophages+(MDM)+and+Mesenchymal+Stem+Cells+(MSC).">Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC).</a> Bio-protocol. 7, (2017).</li><li>Fujita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles:+New+Players+in+Lung+Immunity.">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).</li><li>Gunasekaran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Exosomes+With+Lung+Self-Antigens+in+Human+Lung+Allograft+Rejection.">Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection.</a> American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).</li><li>Kalra, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+proteomics+evaluation+of+plasma+exosome+isolation+techniques+and+assessment+of+the+stability+of+exosomes+in+normal+human+blood+plasma.">Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma.</a> Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).</li><li>Baranyai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Exosomes+from+Blood+Plasma:+Qualitative+and+Quantitative+Comparison+of+Ultracentrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography+Methods.">Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods.</a> PloS one. 10, e0145686 (2015).</li><li>Nordin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafiltration+with+size-exclusion+liquid+chromatography+for+high+yield+isolation+of+extracellular+vesicles+preserving+intact+biophysical+and+functional+properties.">Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties.</a> Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).</li></ol>

Mus-modeller av sjukdomar är vanligt förekommande att utvärdera den fysiologiska funktionen av specifika gener och minska kostnaden för experiment2. Den akut septisk lungskada som beskrivs här härmar inflammatorisk reaktion som ses hos människa med ARDS. Denna modell är relevant att undersöka molekylär patogenes, utvecklingen av biomarkörer och testa potentiella nya terapier5.
Samtidig kultur system är relevanta för in-vivo ...

ALI och ARDS är en livshotande form av andningssvikt med svår hypoxemi orsakad av icke-kardiogent lungödem som drabbar cirka 1 miljoner människor i världen årligen1. Etiologin av ARDS omfattar direkt skada på lungorna från infektioner eller aspiration och en mängd indirekta förolämpningar. Under det senaste decenniet har det skett en ökad förståelse för molekylär patogenes av ARDS, särskilda riktade behandlingar för ARDS är dock ännu vara utvecklat2,3.
Flera djurmodeller av Akut lungskada har utvecklats som ger en bro för att översätta experimentella behandlingar till humanstudier4,5. Ofta används modeller inkluderar lokal installation av oljesyra, bakterier, LPS och bleomycin. Andra metoder inkluderar ischemi-reperfusion, cecal ligering punktering, mekanisk ventilation-inducerad stretch skada, hyperoxia eller systemisk administrering av bakterier och LPS5. Dessa modeller ger ett användbart biologiska system för att testa kliniska hypoteser och för utvecklingen av potentiella behandlingar. För att simulera människors ARDS, bör djurmodeller återge inflammation och akut skada på epiteliala och endothelial celler med defekter i barriärfunktion i lungorna.
Exosomes är membranet blåsor med 20-200 nm i diameter, vars molekylära innehåll innehåller proteiner, DNA, RNA och lipider, och underlätta mellan mobilkommunikation i vävnad mikromiljö via molekylära sammansättning överföring. Exosomes utsöndras av flera typer av celler, endotelceller, epitelceller, glatta muskelceller och tumörceller, och finnas i mänskliga kroppsvätska. Studier visar att exosomes reglera överhörning mellan immunceller och stromaceller under smittsamma och sterila inflammatoriska sjukdomar, och deras onormala release verkar regleras genom olika naturliga och experimentell stimuli under fysiologiska och patologiska processer6. Sådan kommunikationsnätverk kan spela en viktig roll i patogenesen av lungsjukdomar och kan påverka patofysiologiska progression7,8. Som 18-22 nukleotid icke-kodande RNAs, MicroRNA finns i både vävnad och kroppsvätskor, plasma, serum och modulera mRNA uttryck posttranslationella nivå9,10.
Paketerade MicroRNA i exosomes påverkar differentiering och funktion av flera typer av celler, och alltför höga halter är associerade med en mängd olika sjukdomar, däribland cancer, lungsjukdomar, fetma, diabetes och hjärt-kärlsjukdom11, 12,13,14,15,16. Trätt i de mottagande cellerna och skytteltrafik av exosomal MicroRNA underlättar intercellulära kommunikationen modifiera hemostas mikromiljö17,18. Akut lungskada är en komplexa processer, som inbegriper flera celltyper med omfattande intercellulär kommunikation via exosomes8. miR-155 och miR-146a dela den gemensamma transkriptionell reglerande mekanismen och bidrar till den inflammatoriska reaktionen och immuntolerans19,20. Nyligen genomförda studier visar att både modulera inflammatoriska svar via exosomal MicroRNA skytteltrafik mellan immunceller21. Men de molekylära mekanismerna bakom immunmodulerande effekter av exosomal MicroRNA på alveolära svar på endotoxin förblir oklart, utan tvekan den potentiella kliniska relevansen och translationell implikation merit ytterligare undersökning.
Samtidig kultur modeller är att vara anställd att definiera samverkan mellan de specifika celltyper i komplexa miljön, såsom inflammation och cancer22,23. Dessa plattformar ger en alternativ strategi för att förhöra replikväxlning mellan celltyper särskilt för immun- och strukturella celler.
Intra-luftrör, aerosolized, intraperitoneal eller systemisk administrering av LPS används ofta för att framkalla experimentella lung skada24,25,26, och har visat för att inducera epitelial och endotel permeabilitet defekter. Här använder vi intraperitoneal LPS för att inducera en septisk modell av Akut lungskada hos möss. Inom 24 timmar efter intraperitoneal administrering av LPS induceras permeabilitet defekter i lungorna med rekrytering av inflammatoriska celler. Dessutom visar vi att exosomes från BAL innehåller miRNA-155 och miR-146a och exosomes från BAL vätska inducera pro-inflammatoriska cytokiner uttryck i mottagarens epitelceller, inklusive IL-6 och TNF-α. Dessa uppgifter är först att visa att exosomal MicroRNA utsöndras i BAL i denna modell av akut septisk lungskada.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1276px;" width="1276">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:691px;">lipopolysaccharide</td>
			<td style="width:181px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:224px;">Escherichia coli 055:B5</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS pH7.2(1X)</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>20012-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">mirVana miRNA isolation kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">449774</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4369016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">mmu-miR-155 (002571) primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4427975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">has-miR-146a (000468) primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4427975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">U6snRNA primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4427975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TNF-&#945;(Mm00443258_m1 ) primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IL-6 (Mm00446190_m1&#160;&#160; )primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ZO-1 (Mm00493699_m1&#160; )primer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4331182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">minimal essential medium (MEM)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11095-072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trysin-EDTA solution(0.05%)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Exosomes were labeled with PKH67 through PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MINI67-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Exosome Spin Columns (MW3000)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td align="right">4484449</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Beckman Coulter Optima L-100XP ultracentrifuge&#160;</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>L-100XP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra-clear centrifuge tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td align="right">344058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">transmission electron microscopes (TEM)</td>
			<td>JEOL Ltd</td>
			<td>120 kV TEM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Olympus BX41 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX41</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage exosomes in lipopolysaccharide-induced septic lung injury

Akut lungskada (ALI) och akut andnödssyndrom (ARDS) utgör en heterogen grupp av lungsjukdomar som fortsätter att ha en hög sjuklighet och dödlighet. Molekylär patogenes av ALI är att bättre definierade; på grund av sjukdomen komplexa har molekylära behandlingar dock ännu utvecklas. Här använder vi en lipopolysackarid (LPS) inducerade musmodell av akut septisk lungskada för att avgränsa rollen av exosomes i den inflammatoriska reaktionen. Använda denna modell, har vi kunnat visa att möss som utsätts för intraperitoneal LPS utsöndrar exosomes i Bronko-alveolar lavage (BAL) vätska i lungorna som paketeras med miRNA och cytokiner som reglerar inflammatoriska svar. Ytterligare med samtidig kultur modellsystem, visar vi att exosomes släppt från makrofager störa uttrycket av åtsittande föreningspunkt proteiner i bronkial epitelceller. Dessa resultat tyder på att 1) replikväxlning mellan medfödd immun- och strukturella celler genom den exosomal skytteltrafik bidrar till den inflammatoriska reaktionen och störningar av den strukturella hindren och 2) inriktning dessa MicroRNA föreskriva en roman plattform att behandla ALI och ARDS.

För att inducera septisk lungskada, behandlades möss med intraperitoneal LPS (15 mg/kg). Inom 24 h av LPS administration sågs neutrofil tillströmning i lungorna, som visas i figur 1A. Mus BAL vätska drogs, följt av isolering och rening av exosomes. Morfologi av BALF exosomes bekräftades av överföring elektronmikroskopi (figur 1B).
Uttryck för selektiv pro-infl...

Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury at JoVE.com

Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury

Bronkoalveolär Lavage Exosomes i lipopolysackarid-inducerad septisk lungskada

Möss som utsätts för intraperitoneal LPS utsöndrar exosomes i Bronko-alveolar lavage (BAL) vätska som paketeras med microRNA. Samtidig kultur system med visar vi att exosomes släppt i BAL vätska störa uttrycket av åtsittande föreningspunkt proteiner i bronkial epitelceller och öka uttrycket av pro-inflammatoriska cytokiner som framhäver lungskada.

Acute lung injury (ALI) and acute respiratory distress syndrome (ARDS) represent a heterogeneous group of lung diseases which continues to have a high ...

Research

JoVE Journal

Genetics

siRNA Transfection and EMSA Analyses on Freshly Isolated Human Villous Cytotrophoblasts

siRNA Transfektion och EMSA Analyser av nyligen isolerade mänskliga villös cytotrofoblaster

Human primary villous cytotrophoblasts are a very useful source of primary cells to study placental functions and regulatory mechanisms, and to comprehend ...

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

In Situ Märkning av mitokondrie-DNA-replikering i Drosophila vuxen Äggstockar från edu färgning

The mitochondrial genome is inherited exclusively through the maternal line. Understanding of how the mitochondrion and its genome are proliferated and ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Slumpmässig mutagenes med användning Histon-miniSOG i<em&gt; C. elegans</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Uppfödning och dubbelsträngade RNA-medierad Gene Knockdown i Hide Beetle,<em&gt; Rävänger</em

Advances in genomics have raised the possibility of probing biodiversity at an unprecedented scale. However, sequence alone will not be informative ...

Pooled shRNA Screen for Reactivation of MeCP2 on the Inactive X Chromosome

Poolade shRNA skärm för reaktivering av MeCP2 på inaktiva X-kromosomen

Forward genetic screens using reporter genes inserted into the heterochromatin have been extensively used to investigate mechanisms of epigenetic control ...

Formaldehyde-assisted Isolation of Regulatory Elements to Measure Chromatin Accessibility in Mammalian Cells

Formaldehyd-assisted isolering av reglerande element till åtgärd kromatin tillgänglighet i däggdjursceller

Appropriate gene expression in response to extracellular cues, that is, tissue- and lineage-specific gene transcription, critically depends on highly ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

CRISPR-medierad omorganiseringen av kromatin Loop struktur

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

Identification of Homologous Recombination Events in Mouse Embryonic Stem Cells Using Southern Blotting and Polymerase Chain Reaction

Identifiering av homolog rekombination händelser i mus embryonala stamceller med södra Blotting och Polymerase Chain Reaction

Relative to the issues of off-target effects and the difficulty of inserting a long DNA fragment in the application of designer nucleases for genome ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Karaktärisera Histon posttranslationella modifieringen förändringar i jäst neurodegenerativa Proteinopathy modeller

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Att fastställa ägg befruktning Bemisia tabaci med en Cytogenetisk teknik

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...