Name: methods for the study of regeneration in stentor
Uploaded: 2018-06-13T15:00:00
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इस काम को NIH ग्रांट R01 GM113602 (WFM) और NSF ११४४२४७ (AL) ने सपोर्ट किया था । हम इन प्रोटोकॉल में से कुछ के प्रारंभिक संस्करणों के विकास के लिए और जानकारीपूर्ण विचार विमर्श के लिए मार्क Slabodnick और नेटली Kirkland स्वीकार करते हैं । हम पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए करीना Perlaza और Greyson लुईस धंयवाद ।

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	<li>Kirschner, M., Gerhart, J., Mitchison, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+"vitalism".">Molecular "vitalism".</a> Cell. 100 (1), 79-88 (2000).</li><li>Shulman, J. M., St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+in+single+cells.">Pattern formation in single cells.</a> Trends in Cell Biology. 9 (12), M60-M64 (1999).</li><li>Wloga, D., Frankel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+molecules+to+morphology:+cellular+organization+of+Tetrahymena+thermophila.">From molecules to morphology: cellular organization of Tetrahymena thermophila.</a> Methods in Cell Biology. 109, 83-140 (2012).</li><li>Frankel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pattern Formation: Ciliate Studies and Models. , (1989).</li><li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+experiments+concerning+primordium+formation+in+Stentor+coeruleus.">Grafting experiments concerning primordium formation in Stentor coeruleus.</a> Journal of Experimental Zoology Part A. 131 (1), 75-121 (1956).</li><li>Lillie, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+smallest+parts+of+Stentor+capable+of+regeneration;+a+contribution+on+the+limits+of+divisibility+of+living+matter.">On the smallest parts of Stentor capable of regeneration; a contribution on the limits of divisibility of living matter.</a> Journal of Morphology. 12 (1), 239-249 (1896).</li><li>Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+proportionate+structures+in+Stentor.">Regeneration of proportionate structures in Stentor.</a> The Biological Bulletin. 2 (6), 311-328 (1901).</li><li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macronuclear+genome+of+Stentor+coeruleus+reveals+tiny+introns+in+a+giant+cell.">The macronuclear genome of Stentor coeruleus reveals tiny introns in a giant cell.</a> Current Biology. 27 (4), 569-575 (2017).</li><li>Tang, S. K. Y., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-repairing+cells:+How+single+cells+heal+membrane+ruptures+and+restore+lost+structures.">Self-repairing cells: How single cells heal membrane ruptures and restore lost structures.</a> Science. 356 (6342), 1022-1025 (2017).</li><li>Slabodnick, M., Prevo, B., Gross, P., Sheung, J., Marshall, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+cytoplasmic+flow+during+single-cell+wound+healing+in+Stentor+coeruleus.">Visualizing cytoplasmic flow during single-cell wound healing in Stentor coeruleus.</a> Journal of Visualized Experiments. 82 (82), 50848 (2013).</li><li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Stentor. , (1961).</li><li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kinase+regulator+mob1+acts+as+a+patterning+protein+for+stentor+morphogenesis.">The kinase regulator mob1 acts as a patterning protein for stentor morphogenesis.</a> PLOS Biology. 12 (5), e1001861 (2014).</li><li>Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Chlamydomonas sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and its laboratory use. 1, (2009).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

संवर्धन Stentor चुनौतियों का एक नंबर प्रस्तुत करता है । सबसे पहले, प्रयोगों है कि कोशिकाओं की बड़ी संख्या की आवश्यकता होती है प्रदर्शन करने के लिए, एक Stentor संस्कृतियों की एक बड़ी संख्या को बनाए रखने की जरूरत है, के रूप में संस्कृतियों जब Stentor एकाग्रता 20 कोशिकाओं से अधिक है अस्वस्थ हो/ दूसरा, जीवों कि Stentor संस्कृतियों दूषित अक्सर Stentor से तेजी से विभाजित कर सकते है और संस्कृति (एक आम contaminant rotifers है डूब) । इस प्रकार, यह एक खुर्दबीन के नीचे संस्कृति का निरीक्षण करने के लिए आवश्यक है समय पर और दूषित पदार्थों को दूर । कभी-कभार, एक नई संस्कृति को कोशिकाओं की एक छोटी संख्या से शुरू करने की जरूरत है एक दूषित संस्कृति से मैंयुअल रूप से बचाया । यह स्वस्थ Stentor संस्कृतियों को बनाए रखने के लिए आवश्यक समय बढ़ाता है । तीसरा, एक ४०० मिलीलीटर संस्कृति में एक एकल कोशिका का विस्तार कम एक महीने की आवश्यकता है क्योंकि Stentor सेल चक्र 3-5 दिन है । चौथा, अंय मॉडल ciliates के विपरीत, Stentor शायद ही कभी पुटी के रूप में जाना है और वे जमे हुए नहीं किया जा सकता है ।
संवर्धन Stentor का एक महत्वपूर्ण पहलू एक उपयुक्त खाद्य जीव का चयन है । संवर्धन Stentor के लिए विभिंन तरीकों पहले से वर्णित थे । उनमें से एक संस्कृति बैक्टीरिया जो फिर Stentorफ़ीड के लिए स्किम दूध का उपयोग करने का सुझाव । ऐसी तकनीक संवर्धन Stentorमें कारगर है; हालांकि, जीनोमिक तकनीक के आवेदन के लिए शुद्ध नमूनों की आवश्यकता है जीनोमिक से उत्पंन भ्रम से बचने के लिए अपरिभाषित खाद्य जीवों से पढ़ता है । वर्तमान प्रोटोकॉल का प्रयोग, Stentor बड़े पैमाने पर किया जा सकता है और, क्योंकि उनके भोजन, Chlamydomonas, अनुक्रम किया गया है, खाद्य जीव से जीनोमिक संदूषण की उपस्थिति का पता लगाया जा सकता है और के लिए नियंत्रित । अज्ञात कारणों से टैटार को लौटते हुए अपने स्टॉक्स की भरपाई करनी थी, जहां से उसने पहले Stentor पाया । वर्तमान प्रोटोकॉल के साथ, हम साल के लिए Stentor रखने के लिए सक्षम किया गया है ।
Stentor के साथ पुनर्जनन प्रयोग आम तौर पर सीधा कर रहे हैं, लेकिन कुछ महत्वपूर्ण विवरण को ध्यान में रखना हैं । खंड 2 के संबंध में, छमाही में Stentor कोशिकाओं को काटने मिनट में महारत हासिल किया जा सकता है । Stentor के अधिक उंनत microsurgery प्रक्रियाओं माहिर अभ्यास के एक सप्ताह की आवश्यकता हो सकती है । जबकि एक सुक्रोज या यूरिया उपचार प्रदर्शन (धारा 3), इमेजिंग की शुरुआत में सबसे कोशिकाओं अभी भी अपने membranellar बैंड है, जब सुक्रोज उपचार अगले प्रदर्शन किया है के लिए 10-30 एस द्वारा गर्मी समय वृद्धि हुई है । 3 मिनट की मशीन से परे सुक्रोज उपचार के समय में वृद्धि नहीं है क्योंकि यह कोशिका मृत्यु में परिणाम होगा ।
Stentor पुनर्जनन के इमेजिंग समय की लंबी अवधि के लिए छवि बड़ी कोशिकाओं के लिए तरीकों की आवश्यकता है । इमेजिंग खंड 4 में विस्तृत विधि केवल एक ईमानदार खुर्दबीन के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है । यदि एक औंधा माइक्रोस्कोप के बजाय उपलब्ध है, तो कोशिकाओं को एक स्लाइड पर रखा जा सकता है या छोटे कक्षों में coverslip. एक विधि पेट्रोलियम जेली के बाहर एक चैंबर बनाने के लिए और वाष्पीकरण को रोकने के लिए एक और coverslip के साथ कवर करने के लिए है । वैकल्पिक रूप से, एक कक्ष के लिए एक कक्ष में वांछित आकार के एक छेद पंच के साथ एक छेद बनाने के द्वारा बनाया जा सकता है 1 एक्स 1 सेमी2 सिलिकॉन स्पेसर के वर्ग (सामग्री की तालिका), एक coverslip पर स्पेसिंग रखने, कक्ष में कोशिकाओं डाल , और एक और coverslip के साथ चैंबर को कवर । जब इमेजिंग, यदि Stentor सही अभिविंयास में नहीं है के लिए पुनर्जनन के प्रत्येक चरण के विशिष्ट सुविधाओं का निरीक्षण, थाली मजबूती से नल सेल अनुबंध करने के लिए । देखो सेल उत्थान के चरण की पहचान करने के लिए विस्तार (पूर्ण विस्तार के बारे में ४५ s लेता है) । सेल गलत अभिविन्यास में अभी भी है, तो दोहन दोहराएँ. चित्र 1 में दिखाया गया है और चित्रा 6 एक स्टीरियो ज़ूम माइक्रोस्कोप द्वारा लिया गया; हालांकि, सभी प्रयोगों विस्तृत एक 5x विदारक स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग कर प्रदर्शन किया जा सकता है ।
संवर्धन और इमेजिंग Stentor के अलावा एक और चुनौती पुनर्जनन की ट्रैकिंग है, विशेष रूप से चरणों की पहचान करने के लिए आवश्यक समय की मात्रा । यदि पुनर्सृजन कोशिका पूरी तरह से मौखिक primordium स्पष्ट रूप से दिखाई के क्षेत्र के साथ उंमुख है, मंच की पहचान कुछ सेकंड लेता है । कई बार, तथापि, Stentor सेल एक अभिविंयास में है पुनर्जनन चरण के स्पष्ट काम को रोकने, इस प्रकार अधिक समय लेने के लिए पहचान । समय की महत्वपूर्ण राशि के लिए व्यक्तिगत पुनर्सृजन कोशिकाओं के सभी reचूकने कोशिकाओं के ठहराव देरी हो सकती है, इस प्रकार मचान के लौकिक परिशुद्धता कम और पर्यवेक्षक की आवश्यकता के लिए प्रतीक्षा करें और फिर से छवि सेल के बाद यह स्थानांतरित कर दिया है एक नया अभिविंयास । फलस्वरूप, यह प्रयोग समय और श्रम दोनों ही गहन है. इन कारणों के लिए, यह Stentor कोशिकाओं का पता लगाने और वीडियो माइक्रोस्कोपी डेटा में पुनर्जनन के चरणों निर्दिष्ट करने के लिए स्वचालित तरीके विकसित करने के लिए अत्यधिक वांछनीय होगा । ये भी अधिक reproducible प्रयोगों के लिए अनुमति होगी, नमूना आकार में वृद्धि, और मानव पूर्वाग्रह को हटाने.
अत्यधिक संवेदनशील जीनोमिक और proteomic तरीकों के उद्भव के लिए एकल कोशिकाओं के अध्ययन तक पहुंचने में डाल शुरू कर दिया है । ऐसे एकल सेल विश्लेषण के लिए, एक Stentor सेल के विशाल आकार यह सबूत के अवधारणा प्रयोगों के लिए एक वांछनीय परीक्षण विषय बनाता है । ऐसे प्रयोगों के लिए संभव हो, संवर्धन Stentor मौलिक है, और इसलिए यहां वर्णित तरीकों और अधिक उंनत एकल सेल तकनीक के विकास में एक भूमिका निभानी चाहिए ।

कोशिकाओं एंजाइमों के सरल बैग नहीं हैं, बल्कि अत्यधिक जटिल मशीनों जिसका घटकों को ध्यान से सही आकार के लिए स्केल और अच्छी तरह से परिभाषित पदों में व्यवस्था कर रहे हैं । व्यक्तिगत कोशिकाओं के morphogenesis कोशिका और विकास जीवविज्ञान में एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया का प्रतिनिधित्व करता है, लेकिन अपने आणविक तंत्र अज्ञात है1,2. जबकि कुछ प्रसंस्कृत कोशिकाओं blobs सदृश, कोशिकीय जीवों अत्यंत जटिल आर्किटेक्चर हो सकता है, जटिल cortical ciliates3,4में देखा पैटर्न द्वारा उदाहरण ।
शायद एक उच्च संरचित कोशिका का सबसे चरम उदाहरण Stentor coeruleus, एक विशाल heterotrichous ciliate दूर से Tetrahymena और Paramecium से संबंधित है । Stentor 1 मिमी लंबी है और नीले रंग की अनुदैर्ध्य धारियों से अधिक के साथ कवर किया जाता है cilia की पंक्तियों microtubule रिबन के समानांतर ढेर द्वारा आयोजित की है कि पूरे सेल की लंबाई चलाने के साथ बारी । सेल तुरही के आकार का है (1 चित्रा), एक membranellar बैंड और उसके पूर्वकाल अंत में एक मौखिक तंत्र (OA) के साथ, और एक holdfast है कि इसके पीछे अंत में सब्सट्रेट करने के लिए सेल देता है । स्पष्ट पूर्वकाल-पीछे ध्रुवता के अलावा, कोशिका भी एक विशिष्ट चिराल पैटर्न से पता चलता है, इस तरह की है कि सिलिअरी पंक्तियों के बीच रिक्ति के एक दक्षिणावर्त दिशा में धीरे-धीरे बढ़ जाती है । एक विच्छेदन में यह परिणाम जहां संकीर्ण पंक्ति व्यापक पंक्ति मिलता है, और सेल सतह के इस क्षेत्र, धारी इसके विपरीत के लोकस के रूप में जाना जाता है, पूर्वकाल अंत संरचनाओं के दूसरे सेट के गठन जब एक और5सेल पर भ्रष्टाचारी पैदा कर सकते हैं, इसे औपचारिक रूप से Spemann के आयोजक के समकक्ष बनाना । इस प्रकार, विकास जीव विज्ञान के सभी प्रमुख प्रक्रियाओं Stentorमें उनके अनुरूप है: axiation, पैटर्न गठन, और प्रेरण । एक भ्रूण में, इन प्रक्रियाओं विभिंन कोशिकाओं के बीच भाग्य मतभेदों से प्रेरित हैं, लेकिन Stentorमें, वे एक ही कक्ष के भीतर विभिंन क्षेत्रों के बीच भाग्य मतभेदों से प्रेरित होना चाहिए । क्या Stentor के भीतर क्षेत्रों के बीच मतभेदों को परिभाषित करता है एक रहस्य है ।
यदि Stentor का कोई भाग कट जाता है, तो कक्ष का गुम टुकड़ा घंटों के मामले में एक सामांय कोशिका को उत्पंन करने के लिए पुनर्जीवित कर सकता है । यदि एक सेल छमाही में कटौती, या भी बहुत छोटे टुकड़ों में है, प्रत्येक टुकड़ा एक सामांय दिखने लेकिन छोटे सेल में पुनर्गठित और सेल6,7भागों के बीच उचित समानता पुनर्स्थापित करता है । यहां तक कि छोटे टुकड़े, 1/64वें मूल कोशिका के आकार, एक छोटे लेकिन आम तौर पर आनुपातिक सेल में पुनर्जंम करने में सक्षम हैं, और फिर पूर्ण आकार6करने के लिए विकसित । Stentor इस प्रकार एक अनूठा organelle आकार स्केलिंग और कोशिका विकास विनियमन शल्य चिकित्सा पद्धतियों है कि आम तौर पर ऊतकों या पूरे जीवों के स्तर पर लागू कर रहे है का उपयोग कर के तंत्र का अध्ययन करने का अवसर प्रस्तुत करता है ।
Stentor के गुणों में से एक है कि यह शल्य आपरेशनों की एक विस्तृत श्रृंखला से पुनर्जीवित करने की अनुमति देता है कि यह एक एकल nodulated macronucleus (चित्रा 1) के बारे में पूरे जीनोम8के ५०,००० प्रतियां के साथ शामिल है । जब तक किसी कक्ष अंश में कम से एक macronuclear नोड होता है, तब तक पूरी तरह से पुन: जनरेट करने की क्षमता होती है । एक अंय गुण अंतर्निहित है Stentorपुनर्जनन क्षमता अपने विलक्षण घाव भरने की क्षमता है । हालांकि कई सेल प्रकार उनके घाव9चिकित्सा करने में सक्षम हैं, Stentor शारीरिक perturbations की एक असाधारण रेंज से उबरने में सक्षम है । एक कठोर गड़बड़ी से Stentor वसूली का एक उदाहरण है, साथ में Stentor10 में cytoplasmic प्रवाह visualizing के लिए तरीकों के साथ पहले ही सूचित किया गया । इन विधियों के अध्ययन की अनुमति कैसे घायल और बाद में पुनर्जनन कोशिका द्रव्य की शारीरिक स्थिति को प्रभावित करते हैं ।
है Stentorविशाल आकार, असाधारण पुनर्जनन क्षमता, और तथ्य यह है कि यह विकासात्मक कोशिकीय भ्रूण में देखा घटना के कई प्रकट (जैसे आयोजकों, axiation के रूप में, और पैटर्न) के दौरान कई विकास जीव आकर्षित थॉमस हंट मॉर्गन7सहित पिछली सदी की बारी है । के दौरान 50 है और 60, microsurgical दृष्टिकोण इस एकल कोशिका वाले जीव11में अपक्षयी और morphogenetic प्रक्रियाओं की एक चौंकाने वाली सरणी का प्रदर्शन किया । हालांकि, Stentor एक आणविक जीवविज्ञान मॉडल प्रणाली के रूप में ही हाल ही में विकसित किया गया है । पिछले कई वर्षों के दौरान, Stentor के जीनोम अनुक्रम और8इकट्ठा किया गया था, और perturb जीन अभिव्यक्ति को खिला द्वारा RNAi का उपयोग करने के लिए विधि12विकसित किया गया था ।
कारणों में से एक है कि Stentor आधुनिक आणविक जीव विज्ञान के लिए एक मॉडल जीव में विकसित किया गया था ही हाल ही में अपनी लंबी कोशिका चक्र (3 से 5 दिन) के कारण बड़ी संस्कृतियों के बढ़ने की कठिनाई थी । हालांकि, आधुनिक जीनोमिक और proteomic तरीकों के लिए इस्तेमाल की तुलना में कम सामग्री की आवश्यकता होती है, और एक एकल Stentor कोशिका की मात्रा इन विधियों के लिए पर्याप्त है, यहां तक कि एकल के विश्लेषण के लिए विकसित किए गए ultrasensitive विधियों का सहारा लिए बिना वे कक्ष जो Stentorसे बहुत छोटे हैं । किसी एकल Stentor कक्ष से कोई बड़ी संस्कृति स्थापित करने के लिए प्रोटोकॉल विवरण की खंड 1 प्रक्रिया । एक ही दृष्टिकोण एक कोशिका काटने से प्राप्त एक कोशिका टुकड़ा से एक बड़ी संस्कृति स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । अनुभाग 1 भी समय की लंबी अवधि में स्वस्थ Stentor संस्कृतियों को बनाए रखने के लिए दिशानिर्देश प्रदान करता है । प्रोटोकॉल की धारा 2 एक गिलास सुई के साथ मैंयुअल रूप से कोशिकाओं को काटने के द्वारा सेल पुनर्जनन उत्प्रेरण के लिए पद्धति प्रदान करता है । प्रोटोकॉल की धारा 3 विशिष्ट कोशिका संरचनाओं के उत्थान उत्प्रेरण के दो तरीकों को समर्पित है (membranellar बैंड और मौखिक तंत्र): या तो सुक्रोज या यूरिया के साथ कोशिकाओं के इलाज इन संरचनाओं के छप्पर की ओर जाता है, उनके द्वारा पीछा पुनर्जनन. प्रोटोकॉल के खंड 4 समय की लंबी अवधि के लिए व्यक्तिगत पुनः जनरेट कर रहा है कोशिकाओं के इमेजिंग के लिए एक विधि विवरण । अनुभाग 4 पुनर्जनन और पुनर्जनन गतिशीलता के विश्लेषण पर सुझावों के चरणों के विवरण के साथ समाप्त होता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stentor coeruleus live culture</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>131598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlamydomonas reinhardtii on agar</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>152040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteurized springwater, 1-quart bottle</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>132458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl cellulose, 1500 cP</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M0387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex glass spot plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13748B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-mouth glass jar with screw cap, 60 mL</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>715740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-cup glass container with glass lid</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>1095600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CultureWell silicone sheet material</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>664475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Click 1.7 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Denville</td>
			<td>C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass</td>
			<td>Fisher finest</td>
			<td>12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAP Growth Media, optimized for Chlamydomonas culture</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A1379801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone spacer, CultureWell Silicone Sheet, 0.25mm Thick/13 cm x 18 cm</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>664475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum, Petroleum Jelly, White</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>P1037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillary tubes. 
			OD: 1.2 mm, ID: 0.9 mm, length: 10 cm.</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B120-90-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle puller P-87</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stemi 2000 stereo microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiozoom V16, stereo zoom microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for the study of regeneration in stentor

कक्षों को बाह्य perturbations से पुनर्प्राप्त करने के लिए उनके भागों को पुनर्जीवित करने में सक्षम होना चाहिए । कोशिकीय ciliate Stentor coeruleus एक उत्कृष्ट मॉडल जीव को घाव भरने और बाद में सेल पुनर्जनन अध्ययन है । Stentor जीनोम हाल ही में उपलब्ध हो गया, साथ आधुनिक आणविक जीवविज्ञान विधियों, जैसे RNAi के रूप में । ये उपकरण आणविक स्तर पर एकल कोशिका उत्थान के अध्ययन को संभव बनाते हैं. प्रोटोकॉल का पहला भाग एकल कोशिकाओं या कोशिका अंशों से Stentor कोशिका संस्कृतियों की स्थापना को कवर करता है, साथ ही Stentor संस्कृतियों को बनाए रखने के लिए सामांय दिशानिर्देशों के साथ । संवर्धन Stentor बड़ी मात्रा में जैव रसायन, अनुक्रमण, और बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री जैसे मूल्यवान उपकरणों के उपयोग के लिए अनुमति देता है । प्रोटोकॉल के बाद के वर्गों Stentorमें उत्प्रेरण उत्थान के लिए अलग दृष्टिकोण को कवर किया । मैंयुअल रूप से एक गिलास सुई के साथ कोशिकाओं को काटने की अनुमति देता है बड़े सेल भागों के उत्थान का अध्ययन, जबकि या तो सुक्रोज या यूरिया के साथ कोशिकाओं के इलाज के विशिष्ट कोशिका के पूर्वकाल अंत में स्थित संरचनाओं के उत्थान का अध्ययन करने की अनुमति देता है । इमेजिंग के लिए एक विधि व्यक्तिगत reचूकने कोशिकाओं प्रदान की जाती है, मचान और पुनर्जनन की गतिशीलता का विश्लेषण करने के लिए एक शीर्ष के साथ । उत्थान की पूरी प्रक्रिया को तीन चरणों में बांटा गया है । चरणों के माध्यम से कोशिकाओं की जनसंख्या की प्रगति की गतिशीलता visualizing द्वारा, पुनर्जनन समय में विविधता का प्रदर्शन किया है ।

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Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Stentor में उत्थान के अध्ययन के लिए तरीके

विशाल ciliate, Stentor coeruleus, पुनर्जनन और घाव भरने का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट प्रणाली है । हम एकल कोशिकाओं या सेल टुकड़े से Stentor सेल संस्कृतियों की स्थापना के लिए प्रक्रियाओं वर्तमान, कोशिकाओं को काटने के द्वारा पुनर्जनन उत्प्रेरण, रासायनिक membranellar बैंड और मौखिक तंत्र, इमेजिंग, और सेल के विश्लेषण के पुनर्जनन उत्प्रेरण पुनर्जनन.

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

Teton सिस्टम का प्रयोग आणविक तंत्र Zebrafish उत्थान के अध्ययन के लिए

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

पित्त चालित जिगर पुनर्जनन अध्ययन करने के लिए zebrafish में Hepatocyte-विशिष्ट एबलेशन

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

Methods to Study Mrp4-containing Macromolecular Complexes in the Regulation of Fibroblast Migration

तरीके तंतुकोशिका प्रवासन के नियमन में Mrp4 युक्त macromolecular परिसर अध्ययन करने के लिए

Multidrug resistance protein 4 (MRP4) is a member of the ATP-binding cassette family of membrane transporters and is an endogenous efflux transporter of ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Zebrafish में एक इथेनॉल प्रेरित fibrotic लिवर मॉडल के विकास का अध्ययन करने के पूर्वज सेल की मध्यस्थता Hepatocyte पुनर्जनन

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

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तरीके लसीका ग्रंथि और hemocytes में जांच<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा

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