Name: quantifying vibrio cholerae colonization and diarrhea in the adult zebrafish model
Uploaded: 2018-07-12T14:30:00
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मेलोडी Neely, जॉन एलन, बेसल Abuaita, और डोना Runft को zebrafish मॉडल विकसित करने में मदद करने में उनके प्रयासों के लिए धंयवाद । यहां बताया गया अनुसंधान पुरस्कार संख्या R21AI095520 और R01AI127390 (Jeffrey एच. Withey) के तहत स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के राष्ट्रीय एलर्जी और संक्रामक रोगों के संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के सरकारी विचारों का प्रतिनिधित्व करते हैं ।

यहां बताए गए सभी तरीकों को वेन स्टेट यूनिवर्सिटी के इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड फीमेल कमेटी (IACUC) ने मंजूरी दे दी है । यह तरीका पहले Runft एट अल में बताया गया था । 12
1. आंत्र औपनिवेशीकरण ?...

<ol>
	<li>Harris, J. B., LaRocque, R. C., Qadri, F., Ryan, E. T., Calderwood, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholera.">Cholera.</a> The Lancet. 379 (9835), 2466-2476 (2012).</li><li>Dutta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrio+cholerae+non-O1,+non-O139+serogroups+and+cholera-like+diarrhea,+Kolkata,+India.">Vibrio cholerae non-O1, non-O139 serogroups and cholera-like diarrhea, Kolkata, India.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (3), 464-467 (2013).</li><li>Huq, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+relationships+between+Vibrio+cholerae+and+planktonic+crustacean+copepods.">Ecological relationships between Vibrio cholerae and planktonic crustacean copepods.</a> Applied and Environmental Microbiology. 45 (1), 275-283 (1983).</li><li>Halpern, M., Landsberg, O., Raats, D., Rosenberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturable+and+VBNC+Vibrio+cholerae:+interactions+with+chironomid+egg+masses+and+their+bacterial+population.">Culturable and VBNC Vibrio cholerae: interactions with chironomid egg masses and their bacterial population.</a> Microbial Ecology. 53 (2), 285-293 (2007).</li><li>Broza, M., Halpern, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+reservoirs.+Chironomid+egg+masses+and+Vibrio+cholerae.">Pathogen reservoirs. Chironomid egg masses and Vibrio cholerae.</a> Nature. 412 (6842), 40 (2001).</li><li>Halpern, M., Izhaki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fish+as+hosts+of+Vibrio+cholerae.">Fish as hosts of Vibrio cholerae.</a> Frontiers in Microbiology. 8 (282), (2017).</li><li>Senderovich, Y., Izhaki, I., Halpern, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fish+as+reservoirs+and+vectors+of+Vibrio+cholerae.">Fish as reservoirs and vectors of Vibrio cholerae.</a> PLoS ONE. 5 (1), e8607 (2010).</li><li>Traore, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+Vibrio+cholerae+in+fish+and+water+from+a+reservoir+and+a+neighboring+channel+in+Ouagadougou,+Burkina+Faso.">Occurrence of Vibrio cholerae in fish and water from a reservoir and a neighboring channel in Ouagadougou, Burkina Faso.</a> The Journal of Infection in Developing Countries. 8 (10), 1334-1338 (2014).</li><li>Booth, L. V., Lang, D. A., Athersuch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Vibrio+cholerae+non-01+from+a+Somerset+farmworker+and+his+tropical+fish+tank.">Isolation of Vibrio cholerae non-01 from a Somerset farmworker and his tropical fish tank.</a> Journal of Infection. 20 (1), 55-57 (1990).</li><li>Torres-Vitela, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+Vibrio+cholerae+in+fresh+fish+and+ceviche+in+Guadalajara,+Mexico.">Incidence of Vibrio cholerae in fresh fish and ceviche in Guadalajara, Mexico.</a> Journal of Food Protection. 60 (3), 237-241 (1997).</li><li>Rowe, H. M., Withey, J. H., Neely, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+zoonotic+aquatic+pathogens.">Zebrafish as a model for zoonotic aquatic pathogens.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 46 (1), 96-107 (2014).</li><li>Runft, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+natural+host+model+for+Vibrio+cholerae+colonization+and+transmission.">Zebrafish as a natural host model for Vibrio cholerae colonization and transmission.</a> Applied and Environmental Microbiology. 80 (5), 1710-1717 (2014).</li><li>Mitchell, K. C., Breen, P., Britton, S., Neely, M. N., Withey, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Vibrio+cholerae+enterotoxicity+in+a+zebrafish+infection+model.">Quantifying Vibrio cholerae enterotoxicity in a zebrafish infection model.</a> Applied and Environmental Microbiology. , (2017).</li><li>Klose, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+suckling+mouse+model+of+cholera.">The suckling mouse model of cholera.</a> Trends in Microbiology. 8 (4), 189-191 (2000).</li><li>Formal, S. B., Kundel, D., Schneider, H., Kunevn, H., Sprinz, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+with+Vibrio+cholerae+in+the+ligated+loop+of+the+rabbit+intestine.">Studies with Vibrio cholerae in the ligated loop of the rabbit intestine.</a> British Journal of Experimental Pathology. 42, 504-510 (1961).</li><li>Williams, E. M., Dohadwalla, A. N., Dutta, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diarrhea+and+accumulation+of+intestinal+fluid+in+infant+rabbits+infected+with+Vibrio+cholerae+in+an+isolated+jejunal+segment.">Diarrhea and accumulation of intestinal fluid in infant rabbits infected with Vibrio cholerae in an isolated jejunal segment.</a> The Journal of Infectious Diseases. 120 (6), 645-651 (1969).</li><li>Spira, W. M., Sack, R. B., Froehlich, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+adult+rabbit+model+for+Vibrio+cholerae+and+enterotoxigenic+Escherichia+coli+diarrhea.">Simple adult rabbit model for Vibrio cholerae and enterotoxigenic Escherichia coli diarrhea.</a> Infection and Immunity. 32 (2), 739-747 (1981).</li><li>Ritchie, J. M., Rui, H., Bronson, R. T., Waldor, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+the+future:+studying+cholera+pathogenesis+using+infant+rabbits.">Back to the future: studying cholera pathogenesis using infant rabbits.</a> mBio. 1 (1), (2010).</li><li>Kilcoyne, M., Gerlach, J. Q., Farrell, M. P., Bhavanandan, V. P., Joshi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodic+acid-Schiff's+reagent+assay+for+carbohydrates+in+a+microtiter+plate+format.">Periodic acid-Schiff's reagent assay for carbohydrates in a microtiter plate format.</a> Analytical Biochemistry. 416 (1), 18-26 (2011).</li><li>Balaji, V., Sridharan, G., Jesudason, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+of+non+O1,+non+O139+Vibrios+isolated+from+fresh+water+bodies+in+Vellore,+south+India.">Cytotoxicity of non O1, non O139 Vibrios isolated from fresh water bodies in Vellore, south India.</a> Indian Journal of Medical Research. 110, 155-159 (1999).</li><li>Hasan, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontoxigenic+Vibrio+cholerae+non-O1/O139+isolate+from+a+case+of+human+gastroenteritis+in+the+U.S.+Gulf+Coast.">Nontoxigenic Vibrio cholerae non-O1/O139 isolate from a case of human gastroenteritis in the U.S. Gulf Coast.</a> Journal of Clinical Microbiology. 53 (1), 9-14 (2015).</li></ol>

zebrafish v. हैजे की पढ़ाई के लिए एक अपेक्षाकृत नए मॉडल है, लेकिन v. हैजा जीव विज्ञान और रोगजनन11,12,13 के पहले से अज्ञात पहलुओं की भविष्य की खोज के लिए बहुत वादा रखती है . वयस?...

Vibrio हैजा एक जलीय, ग्राम-नकारात्मक जीवाणु है जो मानव रोग हैजा के साथ ही छिटपुट दस्त1,2का कारण बनता है । वि. हैजे के कारण प्रायः अन्य जलीय जीवों से सम्बद्ध विश्व के अनेक क्षेत्रों में वातावरण में पाया जाता है. इन जीवों को जोड़ प्लवक, कीट अंडा जनता, शंख, और हड्डीवाला मछली प्रजातियों3,4,5,6,7शामिल हैं । कई अध्ययनों से अलग भौगोलिक क्षेत्रों7,8,9,10में मछली के आंत्र पथ से V. हैजा अलग है । मछली में V. हैजे की उपस्थिति इंगित करता है कि मछली एक पर्यावरण जलाशय के रूप में कार्य कर सकते हैं । मछली भी मनुष्यों को रोग संचारित करने में और V. हैजा उपभेदों6के भौगोलिक प्रसार में फंसाया जा सकता है ।
बेहतर समझने के लिए कैसे v. हैजा मछली के साथ बातचीत, ढाणियो rerio, बेहतर zebrafish के रूप में जाना जाता है, v. हैजाई11की पढ़ाई के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में विकसित किया गया था । Zebrafish बंगाल क्षेत्र की खाड़ी सहित दक्षिणी एशिया के मूल निवासी हैं, जो वि. हैजाका शीघ्रातिशीघ्र जलाशय बनने लगा है. पहले हैजा महामारी १८१७ में शुरुआत करने से पहले, हैजा क्या अब भारत और बांग्लादेश है के बाहर नहीं बताया गया था । इसलिए, zebrafish और V. हैजा लगभग निश्चित रूप से विकासवादी समय तराजू पर एक दूसरे के साथ जुड़े, सुझाव है कि zebrafish प्राकृतिक वातावरण12में एक V. हैजे की मेजबानी कर रहे हैं ।
v. हैजे के लिए zebrafish मॉडल पर अमल सरल है और पूरे रोगजनक वि. हैजा जीवन चक्र का अध्ययन किया जा सकता है. मत्स्य वि. हैजे के संपर्क में आने से पानी में स्नान करके जो वि. हैजेकी ज्ञात संख्या के साथ inoculated गया है. कुछ ही घंटों के भीतर, आंत्र औपनिवेशीकरण जगह लेता है, दस्त के उत्पादन के बाद । दस्त mucin, प्रोटीन, उत्सर्जित बैक्टीरिया, और अन्य आंत्र सामग्री के होते हैं । दस्त की डिग्री कुछ सरल माप13का उपयोग कर quantified जा सकता है । V. हैजे कि संक्रमित मछलियों द्वारा उत्सर्जित किया गया है तो, के लिए पर जा सकते हैं भोली मछली संक्रमित, संक्रामक चक्र को पूरा करने. इसलिए zebrafish मॉडल recapitulates में वि. हैजे की मानव रोग प्रक्रिया१२,१४.
सबसे अक्सर इस्तेमाल किया V. हैजा पशु मॉडल ऐतिहासिक चूहों और खरगोश14,15,16,17,18है । इन मॉडलों में वि. हैजे रोगजनन के हमारे ज्ञान को जोड़ने में महत्वपूर्ण भूमिका रही है. तथापि, क्योंकि चूहों और खरगोशों के प्राकृतिक v. हैजे की मेजबानी नहीं कर रहे हैं, वहां v. हैजा जीवन चक्र के किन पहलुओं की सीमाओं का अध्ययन किया जा सकता है । V. चूहों और खरगोशों के हैजे औपनिवेशीकरण आमतौर पर आंत्र microbiota के अभाव या एंटीबायोटिक दवाओं के साथ एक उपचार आंत्र microbiota को नुकसान की आवश्यकता है । दोनों मॉडलों को या तो gavage पाचन तंत्र या शल्य हेरफेर करने के लिए बैक्टीरिया शुरू करने के लिए सीधे आंतों में बैक्टीरिया इंजेक्षन की आवश्यकता होती है । Zebrafish एक बरकरार आंत्र microbiota के साथ कि वयस्क मछली में एक फायदा है आसानी से और बृहदांत्र संक्रामक प्रक्रिया स्वाभाविक रूप से होता है, किसी भी हेरफेर के बिना आवश्यक है ।
वर्तमान काम V. हैजा संक्रमण में एक मॉडल के रूप में zebrafish के उपयोग को दर्शाता है । संक्रमण, विच्छेदन, बस्तियां v. हैजेकी गणना, तथा वि. हैजे की वजह से दस्त की ठहराव१२,१३बताई जाएगी. यह मॉडल दोनों v. हैजा रोग प्रक्रिया में और v. हैजा पर्यावरण जीवन शैली में रुचि वैज्ञानिकों के लिए उपयोगी होने की संभावना है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Instrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker incubator</td>
			<td>New Brunswick Scientific, Edison, NJ</td>
			<td>Excella E25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>NUAIRE, Plymouth, MN</td>
			<td>Auto Flow</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo, Waltham, MA</td>
			<td>Geaesys 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex homogenizer</td>
			<td>Minibeadbeater24</td>
			<td>112011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing Machine</td>
			<td>Ohaus, Columbia, MD</td>
			<td>Adventurer Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Stirer</td>
			<td>Corning, Corning, NY</td>
			<td>PC-420D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>automated colony counter</td>
			<td>REVSCI</td>
			<td>120417B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>400 ml glass beakers</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perforated lids</td>
			<td>Microtip holder with holes from tip box</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable plastic spoons</td>
			<td>Office Depot, Boca Raton, FL</td>
			<td>D15-25-7008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish Tank System</td>
			<td>Aquaneering, San Diego, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RO Water Purifier</td>
			<td>Aqua FX</td>
			<td>TK001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish net</td>
			<td>Marina</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fish food</td>
			<td>Tetra fin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brine Shrimp</td>
			<td>Red jungle brand</td>
			<td>O.S.I. pro 80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam board</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pins</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpels</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>10000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>15000-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml screw cap tubes</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>02-681-375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mm glass beads</td>
			<td>Bio Spec</td>
			<td>11079110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads for spreading</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>18406-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate</td>
			<td>Fisher Brand, Hampton, NH</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml centrifuge tube</td>
			<td>Midsci, Valley Park, MO</td>
			<td>AVSS1700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tube</td>
			<td>Corning Falcon, Corning, NY</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tubes</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>9820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pipette</td>
			<td>Fisher Brand, Hampton, NH</td>
			<td>13675K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pipettes</td>
			<td>Sartorius Biohit, G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>m1000/m200/m20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips</td>
			<td>Genesee Scientific, San Diego, CA</td>
			<td>24-150RS/24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Ocean salts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>VWR Life Science, Radnor, PA</td>
			<td>K813-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-&#946;-D-galactopyranoside</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>10651745001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schiff&#8217;s reagent</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>84655-250 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periodic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>10450-60-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucin from porcine stomach</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>M2378-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>9046-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce 660nm Protein Assay Reagent</td>
			<td>Thermo, Waltham, MA</td>
			<td>22660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypton</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teast Extract</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NACL</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCBS Agar</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>265020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DCLS Agar</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>70135-500gm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft office</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying vibrio cholerae colonization and diarrhea in the adult zebrafish model

Vibrio हैजा को संक्रामक एजेंट के रूप में जाना जाता है जो मानव रोग हैजा का कारण बनता है । मानव की मेजबानी के बाहर, V. हैजा मुख्य रूप से जलीय वातावरण में मौजूद है, जहां यह उच्च जलीय प्रजातियों की एक किस्म के साथ बातचीत । हड्डीवाला मछली एक पर्यावरणीय मेजबान होने के लिए जाना जाता है और प्रकृति में एक संभावित V. हैजा जलाशय हैं । दोनों V. हैजा और teleost मछली प्रजातियों ढाणियो rerio, सामांयतः zebrafish के रूप में जाना जाता है, भारतीय उपमहाद्वीप से उत्पंन, जलीय वातावरण में एक लंबे समय से बातचीत का सुझाव । Zebrafish जीव विज्ञान के कई पहलुओं, संक्रामक रोगों सहित अध्ययन के लिए एक आदर्श मॉडल जीव हैं । Zebrafish आसानी से हो सकता है और तेजी से पानी में निवेश के बाद V. हैजा द्वारा बृहदांत्र । v. हैजा द्वारा आंत्र औपनिवेशीकरण दस्त के उत्पादन और दोहराया V. हैजाके उत्सर्जन की ओर जाता है । इन उत्सर्जित बैक्टीरिया तो नई मछली मेजबान उपनिवेश पर जा सकते हैं । यहां, हम प्रदर्शन कैसे v. हैजाका आकलन करने के लिए-zebrafish में आंत्र औपनिवेशीकरण और कैसे मात्रा v. हैजा-प्रेरित zebrafish दस्त । औपनिवेशीकरण मॉडल शोधकर्ताओं जो अध्ययन कर रहे है कि ब्याज की जीन मेजबान औपनिवेशीकरण के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है और के लिए उपयोगी होना चाहिए/ zebrafish दस्त के ठहराव किसी भी आंत्र रोगज़नक़ जो एक मॉडल प्रणाली के रूप में zebrafish की खोज में रुचि रखते है अध्ययन शोधकर्ताओं के लिए उपयोगी होना चाहिए ।

V. zebrafish आंत्र नलिका के हैजे की औपनिवेशीकरण
ठेठ औपनिवेशीकरण स्तर का हम निरीक्षण का एक उदाहरण प्रदान करने के लिए, हम inoculated 5 एक्स 106 CFU महामारी एल टो V. हैजा तनाव N16961 मे?...

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Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Zebrafish एक प्राकृतिक Vibrio हैजा मेजबान है और दोहराऊंगा और औपनिवेशीकरण से संचरण के लिए पूरे संक्रामक चक्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । यहां, हम प्रदर्शन कैसे V. हैजा औपनिवेशीकरण स्तर और zebrafish में दस्तों का आकलन करने के लिए ।

बढ़ाता Vibrio हैजा औपनिवेशीकरण और दस्त वयस्क Zebrafish मॉडल में

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...

This method can help answer key questions in the vibrio cholerae field, such as how the vibrio cholerae colonizes in the Quiet Coast and competes with the intestinal microbiota to establish a niche. The main advantage of this technique is that fish are a natural vibrio cholerae host so we can study the complete vibrio cholerae life cycle. Demonstrating the procedure will be Dhrubajyoti Nag, a postdoc from my laboratory and Paul Breen, a Ph.D.student from my laboratory.After preparing the V.cholerae cultures, inoculate the zebrafish by immersion. First, place four or five zebrafish into a 400 milliliter beaker containing 200 milliliters of sterile infection water. Then add one milliliter of V.cholerae culture for the desired infection concentration.Then, cover the beaker with a perforated lid. After preparing all the beakers, transfer them to a glass front incubator set at 28 degrees Celsius For a transitory exposure, after about six hours, pour out the beaker water through a fish net to collect the fish. The infected water must be disposed of in bleach to kill the bacteria.Then, place the fish into 200 milliliters of sterile infection water for five minutes. After five minutes, run this water through a fishnet, disposing of the water in bleach. Now, the fish can go into a new clean beaker with 200 milliliters of sterile infection water.When the experiment has reached its desired endpoint, take a 15 milliliter sample of the infection water for diagnostic purposes. Then collect the fish and dispose of the infected water appropriately. Orient the ventral side up and secure the body with a pin through the lower jaw and another pin just posterior to the anus.Angle both pins away from the body. Next, wipe off the ventral surface of the fish with 70%ethanol. Then, sterilize a scalpel and Vannas scissors by using 70%ethanol and a flame.Now, using the scalpel, make a small lengthwise incision in the belly that penetrates the scales, but only cut as deep as the skin. Next, with the scissors, extend the incision carefully along the length of the body, cutting no deeper than skin level. Avoid cutting the anus.Then make two lateral cuts towards the head to expand the opening. Then, pin the skin on each side of the lateral incisions to the dissecting surface, angling the pins out, away from the body. The intestinal tract should now be visible as a very thin, pale tube.Now, use two pair of flame sterilized forceps to carefully remove the entire intestinal tract which can be quite fragile. Transfer the tissue into a hominization tube containing glass beads and one milliliter of cold buffer. Next, homogenize the tissues as described in the text protocol and quantify the intestinal colonization levels.Next, make serial dilutions of the intestinal homogenate and buffer. For each fish, prepare five or six ten fold dilutions in one milliliter volumes. Vortex the tubes for mixing.Then, plate 100 to 200 microliters of each dilution on LB agar plates containing streptomycin and X-gal. Incubate the plates at 30 degrees Celsius for 16 to 18 hours. After the overnight incubation, count the V.cholerae colonies on the plates.These bacteria typically produce pale blue colonies on LB medium with X-gal. If several colony morphologies are observed, patch a few colonies of each different morphology onto a different TCBS plate. On TCBS, V.cholerae produces large, slightly flattened yellow colonies with opaque centers and translucent peripheries.To determine the mucin levels in fish diarrhea, perform an assay on a 96 well plate. In triplicate, load 100 microliters of infection water for each test condition, including a blank, into the wells. Then, mix in 50 microliters of fresh, 0.1%periodic acid solution into each test well.Use pipetting to mix. Next, wrap the plate tightly in plastic and incubate the plate at 37 degrees Celsius for one to one and a half hours. After the incubation, cool the plate down to room temperature.Into each well, add 100 microliters of Fuchsin solution and mix with pipetting. Now, rewrap the plate and put it on a rocker at room temperature. In about 20 minutes, read the plate at 560 nanometers using a plate reader.To quantify the reaction caused by mucin in solution. To measure protein levels in fish diarrhea use the Bradford assay. Mix 66 microliters of one of the BSA standards or 66 microliters of infection water with 1, 000 microliters of Bradford assay reagent in a disposable cuvette.Now, incubate the samples at room temperature for two minutes. And then read the absorbance at 660 nanometers on a spectrophotometer. A simple metric for the amount of diarrhea is the turbidity in the water measured at 600 nanometers.Mix the water well, add one milliliter to a disposable cuvette and take a measurement. For a baseline, blank measurement, use a clean infection water. The excreted V.cholerae bacteria can also be measured.This can be done with fish that have been moved to clean water after being inoculated. Make serial dilutions of an aliquat of tank water as previously described. Then plate the dilutions on selective media and incubate the plates at 30 degrees Celsius for 24 hours.Later, count the colonies as previously described and then determine the CFU. Groups of zebrafish housed in 200 milliliters of water were inoculated with five million CFU of a pandemic cholerae. After six hours in the bacteria infested water, the fish move to clean water for 18 hours.The air intestines were then harvested. Each fish harbored an estimated 100, 000 to 1, 000, 000 V.cholerae cells. The infection water was used for other assays.Mucin levels were higher when the infectious doses were higher. The OD600 of the water was significantly higher when fish were infected with V.cholerae. Finally, the total protein level in the infected fish water was nearly twice that observed in the water of the uninfected fish.After watching this video, you should have a good understanding of how to infect adult zebrafish with vibrio cholerae and quantify diarrhea induced by the infection. Following this procedure, other methods, like transmission assays, can be performed to assess infection of naive fish by previously infected fish.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

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रोगाणु मुक्त माउस के प्रगतिशील द्वारा औपनिवेशीकरण के दौरान यकृत मेटाबोलिक परिवर्तन का आकलन 1 एच एनएमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

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की उपनिवेशण Euprymna scolopes द्वारा व्यंग्य विब्रियो fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

TransFLP &#x2014; A Method to Genetically Modify Vibrio cholerae Based on Natural Transformation and FLP-recombination

एक आनुवंशिक रूप से संशोधित विधि - TransFLP<em&gt; विब्रियो कोलरा</em&gt; प्राकृतिक परिवर्तन और FLP पुनर्संयोजन पर आधारित

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

नवजात और वयस्क केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र से संवर्धन Microglia

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

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एक का प्रयोग न्यूमोकोकल औपनिवेशीकरण पर प्रोबायोटिक्स के प्रभाव की जांच<em&gt; इन विट्रो</em&gt; पालन परख

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Normal and Malignant Muscle Cell Transplantation into Immune Compromised Adult Zebrafish

इम्यून से समझौता वयस्क zebrafish में सामान्य और घातक मांसपेशी कोशिका प्रत्यारोपण

Zebrafish have become a powerful tool for assessing development, regeneration, and cancer. More recently, allograft cell transplantation protocols have ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

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की जांच के लिए एक अधिक संवेदनशील और विशिष्ट chromogenic अगर मध्यम का विकास<em&gt; विब्रियो parahaemolyticus</em&gt; और अन्य<em&gt; विब्रियो</em&gt; प्रजाति

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

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ग्रुप &#39;बी&#39; के एक murine मॉडल<em&gt; स्ट्रेप्टोकोकस</em&gt; योनि औपनिवेशीकरण

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

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के जैवप्रभावों को बनाए रखने और विभेद करने के लिए प्रयुक्त प्रयोगशाला तकनीक<em&gt; विब्रियो कोलरे</em&gt; नैदानिक ​​और पर्यावरण अलगाव

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

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बढ़ाता मानव Monocyte Chemotaxis इन विट्रो और Murine लिम्फोसाइट ्े में Vivo

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...