Name: proofreading and dna repair assay using single nucleotide extension and maldi-tof mass spectrometry analysis
Uploaded: 2018-06-19T14:45:00
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Wir danken den NCFPB integrierte Core Facility für Functional Genomics (Taipei, Taiwan) und NRPB Pharmacogenomics Labor (Taipei, Taiwan) für die technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde unterstützt von Forschungsstipendien aus Taiwan Health Foundation (L-i.l.) und das Ministerium für Wissenschaft und Technologie, Taipei, Taiwan, ROC [die meisten 105-2320-B-002-047] für Hu Wei-Yao, [die meisten 105-2628-B-002-051-MY3] für Kang-Yi Su und] Most-105-2320-B-002-051-MY3] für Liang In Lin.

(1) Primer/Vorlage Vorbereitung
<ol><li>Entwerfen Sie Grundierungen/Vorlagen mit einem ausgewogenen G + C-Gehalt zwischen 40 % und 60 % wie in einem Sequenzierung oder PCR besser gekleideteres Design. Verwenden Sie Primer von 18 bis 21 nt für eine entsprechende glühen und bessere MS-Signale.</li>
	<li>Designvorlage von 50 ° C einstellen, als das Minimum, die Schmelztemperatur der duplex Region mit mindestens 7 nt des 5'-Überhangs, die Signale zwischen den Primer und die Vorlage zu trennen. Hinweis: zum Beispiel ...

<ol>
	<li>Loeb, L. A., Kunkel, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fidelity+of+DNA+synthesis.">Fidelity of DNA synthesis.</a> Annual Review of Biochemistry. 51, 429-457 (1982).</li><li>Kornberg, A., Baker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> DNA replication. , (1992).</li><li>Carroll, S. S., Benkovic, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+aspects+of+DNA+polymerases:+Escherichia+coli+DNA+polymerase+I+(Klenow+fragment)+as+a+paradigm.">Mechanistic aspects of DNA polymerases: Escherichia coli DNA polymerase I (Klenow fragment) as a paradigm.</a> Chemical Reviews. 90 (7), 1291-1307 (1990).</li><li>Echols, H., Goodman, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fidelity+Mechanisms+in+DNA+Replication.">Fidelity Mechanisms in DNA Replication.</a> Annual Review of Biochemistry. 60 (1), 477-511 (1991).</li><li>Johnson, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kinetic+and+chemical+mechanism+of+high-fidelity+DNA+polymerases.">The kinetic and chemical mechanism of high-fidelity DNA polymerases.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1804 (5), 1041-1048 (2010).</li><li>Reha-Krantz, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+polymerase+proofreading:+Multiple+roles+maintain+genome+stability.">DNA polymerase proofreading: Multiple roles maintain genome stability.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1804 (5), 1049-1063 (2010).</li><li>Fidalgo da Silva, E., Reha-Krantz, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+polymerase+proofreading:+active+site+switching+catalyzed+by+the+bacteriophage+T4+DNA+polymerase.">DNA polymerase proofreading: active site switching catalyzed by the bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Nucleic Acids Research. 35 (16), 5452-5463 (2007).</li><li>Petruska, J., Goodman, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+neighboring+bases+on+DNA+polymerase+insertion+and+proofreading+fidelity.">Influence of neighboring bases on DNA polymerase insertion and proofreading fidelity.</a> The Journal of Biological Chemistry. 260 (12), 7533-7539 (1985).</li><li>Mendelman, L. V., Petruska, J., Goodman, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Base+mispair+extension+kinetics.+Comparison+of+DNA+polymerase+&#945;+and+reverse+transcriptase.">Base mispair extension kinetics. Comparison of DNA polymerase &#945; and reverse transcriptase.</a> The Journal of Biological Chemistry. 265 (4), 2338-2346 (1990).</li><li>Lutz, S., Burgstaller, P., Benner, S. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+sensitive+G-quadruplex-based+luminescent+switch-on+probe+for+the+detection+of+polymerase+3'-5'+proofreading+activity.">A highly sensitive G-quadruplex-based luminescent switch-on probe for the detection of polymerase 3'-5' proofreading activity.</a> Methods. 64 (3), 224-228 (2013).</li><li>Song, C., Zhang, C., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+sensitive+detection+of+DNA+polymerase+fidelity+by+singly+labeled+smart+fluorescent+probes.">Rapid and sensitive detection of DNA polymerase fidelity by singly labeled smart fluorescent probes.</a> Biosensors and Bioelectronics. 26 (5), 2699-2702 (2011).</li><li>Haff, L. A., Smirnov, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-nucleotide+polymorphism+identification+assays+using+a+thermostable+DNA+polymerase+and+delayed+extraction+MALDI-TOF+mass+spectrometry.">Single-nucleotide polymorphism identification assays using a thermostable DNA polymerase and delayed extraction MALDI-TOF mass spectrometry.</a> Genome Research. 7 (4), 378-388 (1997).</li><li>Haff, L. A., Smirnov, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+genotyping+of+PCR+products+with+MassTag-labeled+primers.">Multiplex genotyping of PCR products with MassTag-labeled primers.</a> Nucleic Acids Research. 25 (18), 3749-3750 (1997).</li><li>Blondal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+MALDI-TOF+based+methodology+for+genotyping+single+nucleotide+polymorphisms.">A novel MALDI-TOF based methodology for genotyping single nucleotide polymorphisms.</a> Nucleic Acids Research. 31 (24), e155 (2003).</li><li>Su, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+(EGFR)+T790M+mutation+predicts+shorter+EGFR+tyrosine+kinase+inhibitor+response+duration+in+patients+with+non-small-cell+lung+cancer.">Pretreatment Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) T790M mutation predicts shorter EGFR tyrosine kinase inhibitor response duration in patients with non-small-cell lung cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 30 (4), 433-440 (2012).</li><li>Lee, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endonuclease+V-mediated+deoxyinosine+excision+repair+in+vitro.">Endonuclease V-mediated deoxyinosine excision repair in vitro.</a> DNA Repair. 9, 1073-1079 (2010).</li><li>Lee, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+excision+of+3'+penultimate+errors+by+DNA+polymerase+I+and+its+role+in+endonuclease+V-mediated+DNA+repair.">The excision of 3' penultimate errors by DNA polymerase I and its role in endonuclease V-mediated DNA repair.</a> DNA Repair. 12 (11), 899-911 (2013).</li><li>Kucera, R. B., Nichols, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-Dependent+DNA+Polymerases.">DNA-Dependent DNA Polymerases.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 84 (1), 3.5.1-3.5.19 (2008).</li><li>Tabor, S., Richardson, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+residue+in+DNA+polymerases+of+the+Escherichia+coli+DNA+polymerase+I+family+is+critical+for+distinguishing+between+deoxy-+and+dideoxyribonucleotides.">A single residue in DNA polymerases of the Escherichia coli DNA polymerase I family is critical for distinguishing between deoxy- and dideoxyribonucleotides.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (14), 6339-6343 (1995).</li><li>Weiss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+deoxyinosine+from+the+Escherichia+coli+chromosome+as+studied+by+oligonucleotide+transformation.">Removal of deoxyinosine from the Escherichia coli chromosome as studied by oligonucleotide transformation.</a> DNA Repair. 7 (2), 205-212 (2008).</li><li>Cao, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endonuclease+V:+an+unusual+enzyme+for+repair+of+DNA+deamination.">Endonuclease V: an unusual enzyme for repair of DNA deamination.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 70 (17), 3145-3156 (2013).</li><li>Su, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+single+nucleotide+extension+and+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+proofreading+and+DNA+repair+assay.">Application of single nucleotide extension and MALDI-TOF mass spectrometry in proofreading and DNA repair assay.</a> DNA Repair. 61, 63-75 (2018).</li><li>Carver, T. E., Hochstrasser, R. A., Millar, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proofreading+DNA:+recognition+of+aberrant+DNA+termini+by+the+Klenow+fragment+of+DNA+polymerase+I.">Proofreading DNA: recognition of aberrant DNA termini by the Klenow fragment of DNA polymerase I.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (22), 10670-10674 (1994).</li><li>Santa Lucia, J., Hicks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thermodynamics+of+DNA+structural+motifs.">The thermodynamics of DNA structural motifs.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 33, 415-440 (2004).</li><li>Su, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+polymerase+I+proofreading+exonuclease+activity+is+required+for+endonuclease+V+repair+pathway+both+in+vitro+and+in+vivo.">DNA polymerase I proofreading exonuclease activity is required for endonuclease V repair pathway both in vitro and in vivo.</a> DNA Repair. 64, 59-67 (2018).</li></ol>

Diese Studie beschrieben einen Schritt für Schritt Korrekturlesen Tätigkeit Assay von der gewählten kommerziellen Instrument analysiert (siehe die Tabelle der Materialien) mit MALDI-TOF MS. Die großen Vorteile sind, dass die Grundierung und Vorlage Etikett kostenlos und einfach zu führen, ermöglicht größere Flexibilität bei der Versuchsplanung. Ein Stream-Kalk vollständige Verarbeitung von 30 Korrekturlesen Tests 4 h, 3 h beim manuellen Abgleich der Korrekturlesen Reaktionen einschließlich neh...

Die Korrekturlesen Funktionen von DNA-Polymerasen während der DNA-Replikation sind Voraussetzung für High-Fidelity der genetischen Information, die auf Nachkommen1,2,3,4übertragen werden muss, 5,6,7. Um die Beiträge der Polymerase Korrekturlesen exonucleasen beurteilen würde die Mechanismen, die Sicherung der genetischen Stabilität klären.
Kennzeichnung von Radioisotopen und Gel-basierte Assays in Kombination mit densitometrische Analysen von Autoradiograms oder Phosphor bildgebenden8,9,10 haben traditionell verwendet, um Korrekturlesen Tätigkeit der DNA zu erkennen Polymerasen. Während funktionell, sind diese Tests aufwändig, teuer und Hochdurchsatz-Formate nicht zugänglich. Darüber hinaus leiden Radioisotope Sicherheitsfragen einschließlich Entsorgung. Alternativ haben Korrekturlesen Aktivitäten fluorometrisch Techniken analysiert wurde. Zum Beispiel kann 2-Aminopurine (2-AP) Erweiterungsprodukte bei in-vitro- Polymerase Korrekturlesen Assays um ein Fluoreszenzsignal11,12produzieren integriert werden. Leider leiden diese Ansätze eine geringe Spezifität, da 2-AP mit Thymin und Cytosin koppeln kann. Neuere Ansätze beinhalten einer sensible G-Quadruplex-basierte lumineszierenden einschalten Sonde für eine Polymerase 3' - 5' Exonuclease Assay13 sowie einzeln beschriftet fluoreszierende Sonde für eine Polymerase Korrekturlesen Assay, die einige der überwindet die genannten Nachteile14. Begeisterung für diese fluorometrischen Methoden wird aufgrund der Notwendigkeit, die spezifische Kennzeichnung von DNA-Substrate vermindert.
Im Gegensatz dazu beschäftigt ein MALDI-TOF MS für DNA-Analysen in PinPoint-Assay, wo die Grundierung Erweiterung Reaktionen mit unbeschrifteten 4 Ddntp können zur Polymorphismen bei einem bestimmten Locus15,16,17 zu identifizieren und verbreitet in der klinischen Anwendung bei Mutation Erkennungen und Krebs diagnostiziert18. Mit diesen Grundprinzipien, schufen wir einen markierungsfreie Assay zur in-vitro- Bestimmung der DNA-Polymerase Korrekturlesen Tätigkeit nutzen die hohe Auflösung, hohe Spezifität und Hochdurchsatz-Potenzial der MALDI-TOF MS. mit E. coli DNA-Polymerase ich Klenow als ein Modell-Enzym, Dideoxyribonucleotide Triphosphate (DdNTPs Fragment) wie Substrate können eine "Momentaufnahme" Korrekturlesen Produkte nach ein Einzel-Nukleotid-Erweiterung über MALDI-TOF MS (Abbildung 1).
Ebenso wurde diese Methode auch entwickelt für einen DNA-Reparatur-Assay wo assay Primer mit 3' vorletzten dI Läsionen ein Pol ausgesetzt sind, die ich reparieren, welche Mimik Endo V geklaut Reparatur Zwischenprodukte. Zwar nicht vollständig verstanden, ist der Endo V Reparatur Weg das einzige Reparatursystem bekannt, dass der Pol ich Korrekturlesen Exonuclease Tätigkeit für Läsion Exzision19,20beschäftigen. Mit MALDI-TOF MS, wir zeigen einen klar definierten Reparatur-Patch wo dI von Pol herausgeschnitten werden, kann ich in den letzten 2 auftritt nt die Grundierung vor der Zugabe der richtigen ergänzt Nukleotid.
Für die Studie der Korrekturlesen und DNA-Reparatur diese Methode ist schneller und weniger aufwändig als bisherige Methoden und bietet zusätzliche Informationen zum Mechanismus und Funktion.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1124px;" width="1125">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:331px;">Oligonucleotides</td>
			<td style="width:283px;">Mission Biotech (Taiwan)&#160;</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">phosphorothioate modified oligonucleotides</td>
			<td>&#160;Integrated DNA Technologies (Taiwan)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNA polymerase I, Large (Klenow) Fragment</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0210L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Klenow fragment (3&#39;&#8594;5&#39; exo-)</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0212L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NEBuffer 2.1 (10X)</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>B7202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2&#39;, 3&#39; ddATP</td>
			<td>Trilink Biotechnologies, CA</td>
			<td>N4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2&#39;, 3&#39; ddGTP</td>
			<td>Trilink Biotechnologies, CA</td>
			<td>N4002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2&#39;, 3&#39; ddTTP</td>
			<td>Trilink Biotechnologies, CA</td>
			<td>N4004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2&#39;, 3&#39; ddCTP</td>
			<td>Trilink Biotechnologies, CA</td>
			<td>N4005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">dATP, dGTP, dCTP, dTTP set</td>
			<td>Clubio, Taiwan</td>
			<td>CB-R0315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">SpectroCHIP array</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#01509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MassARRAY&#160;</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Typer 4.0 software</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#10145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Clean Resin Tool Kit&#160;</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#08040</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proofreading and dna repair assay using single nucleotide extension and maldi-tof mass spectrometry analysis

Die Wartung des Genoms und seine treuen Replikation ist von größter Bedeutung für die Erhaltung der genetischen Information. Um High-Fidelity-Replikation zu bewerten, haben wir eine einfache, nicht beschriftet und nicht-Radio-Isotopen-Methode mit einer Matrix-assisted Laser Desorption ionisation mit Time-of-Flight (MALDI-TOF) Masse Massenspektrometrie (MS)-Analyse für ein Lektorat Studie. Hier, eine DNA-Polymerase [z. B. das Klenow-Fragment (KF) von Escherichia coli DNA-Polymerase ich (Pol ich) in dieser Studie] in Anwesenheit aller vier Dideoxyribonucleotide Triphosphate wird verwendet, um eine nicht übereinstimmende Grundierung-Vorlage Maisonette verarbeiten. Die nicht übereinstimmende Grundierung ist dann erweitert/Korrekturlesen und MALDI-TOF MS unterzogen. Die Produkte zeichnen sich durch die Massenänderung der Grundierung auf Einzel-Nukleotid-Variationen. Wichtig ist, kann eine Korrektur auch für interne einzelnen Fehlanpassungen, wenn auch mit unterschiedlicher Effizienz ermittelt werden. Fehlanpassungen gelegen in 2-4-Nukleotide (nt) von 3'-Ende waren effizient Korrekturlesen von Pol ich, und ein Missverhältnis bei 5 nt von der Grundierung Endstation zeigte nur eine partielle Korrektur. Keine Korrektur erfolgte für interne Konflikte am 6-9 nt vom Primer 3' Ende. Diese Methode kann auch zur DNA-Reparatur-Assays (z. B. Beurteilung eine Basis-Läsion Reparatur von Substraten für den Endo V Reparatur Weg) angewendet werden. Primer mit 3' vorletzten Deoxyinosine (dI) Läsionen durch Pol korrigiert werden könnte ich. In der Tat vorletzten T-I, G-I und A-ich Substrate hatte ihre letzte 2 dI-haltigen Nukleotide herausgeschnitten von Pol ich vor dem Hinzufügen eines richtigen DdN 5'-Monophosphate (DdNMP) beim vorletzten C-ich Diskrepanzen wurden toleriert, von Pol I, so dass die Grundierung ohne erweitert werden Reparatur, zeigen, dass die Empfindlichkeit und Auflösung der MS Test zur Messung der DNA-Reparatur.

Vorlagen und Grundierungen:
Mithilfe des Verfahrens präsentiert hier gleich molare synthetisches Oligonukleotid-Vorlagen und Primer der entsprechenden Sequenzen aus kommerziellen Quellen gewonnen wurden überprüft, für Reinheit und Qualität (Abbildung 3A; beachten Sie, dass die Signale die angegebene Masse abgestimmt und dem niedrigen Hintergrund) als auch für die Beziehung zwi...

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Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Korrekturlesen und DNA-Reparatur-Assay mit Einzel-Nukleotid-Erweiterung und MALDI-TOF Massenspektrometrie-Analyse

Eine nicht beschriftet, nicht-Radio-Isotopen Methode zur DNA-Polymerase Korrekturlesen und eine DNA-Reparatur-Assay wurde mithilfe von hochauflösenden MALDI-TOF-Massenspektrometrie und eine Einzel-Nukleotid-Erweiterung-Strategie entwickelt. Der Test erwies sich als zu sehr spezifischen, einfache, schnelle und einfach durchzuführen, für das Korrekturlesen und reparieren kürzer als 9-Nukleotide patches.

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

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