Name: tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization
Uploaded: 2018-09-15T15:00:00
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Wir möchten Danke Athanasios Papangelis für kritische Anmerkungen zum Manuskript. FM wird unterstützt von der Biotechnologie und biologische Wissenschaften Research Council (BBSRC; BB/M009424/1). IP wird von der American Heart Association Wissenschaftler Development Grant (17SDG33060002) unterstützt.

Maus Herz Gewebeproben für diese Studie wurden in Übereinstimmung mit den einschlägigen Gesetzen und Richtlinien und wurden von Yale Universität institutionelle Animal Care und Use Committee genehmigt.
1. Vorbereitung der Lösung
<ol><li>RNase frei DdH2O vorbereiten, indem man 5 L DdH2O mit 5 mL 0,1 % Diethylpyrocarbonate (DEPC) über Nacht (O/N), bei Raumtemperatur (RT). Autoklaven (121 ° C), die DEPC zu deaktivieren. Verwendung DEPC-behandeltem DdH2O f...

<ol>
	<li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs:+genomics,+biogenesis,+mechanism,+and+function.">MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function.</a> Cell. 116, 281-297 (2004).</li><li>Denli, A. M., Tops, B. B., Plasterk, R. H., Ketting, R. F., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+primary+microRNAs+by+the+Microprocessor+complex.">Processing of primary microRNAs by the Microprocessor complex.</a> Nature. 432, 231-235 (2004).</li><li>Hutvagner, G., Zamore, P. 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Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+hyperfunction+of+the+heart+and+cardiac+insufficiency.">Compensatory hyperfunction of the heart and cardiac insufficiency.</a> Circulation Research. 10, 250-258 (1962).</li><li>Tardiff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy:+stressing+out+the+heart.">Cardiac hypertrophy: stressing out the heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 116, 1467-1470 (2006).</li><li>Burchfield, J. S., Xie, M., Hill, J. 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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNA+in+situ+hybridization+in+formaldehyde+and+EDC-fixed+tissues.">miRNA in situ hybridization in formaldehyde and EDC-fixed tissues.</a> Nature Methods. 6, 139-141 (2009).</li></ol>

MiRNA-Transkript-Erkennung kann durch verschiedene Techniken erreicht werden, die in Sensitivität, Spezifität und quantitative Leistung variieren. Hier zeigen wir die Kopplung von MiRNA in Situ Hybridisierung mit Immunostaining und ein Protokoll, das ermöglicht eine gleichzeitige Beurteilung der Ausdruck Niveaus von MiRNA und Protein-Moleküle, auf die gleichen Herzen Abschnitte beschreiben. Wir zeigen zunächst wie in Situ Hybridisierung von DIG-Label LNA MiRNA Sonden auf Paraffin eingebettet Herz A...

Mikro-RNAs (MiRNAs) sind kurz (18-25 Nukleotide), einzelsträngig, Forensisches RNAs, die als negativer Regulator der Genexpression auf Posttranskriptionale Ebene funktionieren durch Hemmung der Boten-RNA (mRNA) Übersetzung und/oder Förderung der mRNA Abbau 1. MiRNAs sind transkribiert von Introns und Exons der Codierung oder Forensisches Gene und sind im Zellkern durch DROSHA, zum Vorläufer MiRNAs (Pre-MiRNAs), die kurzen Stiel-Loop-Strukturen von 70 Nukleotide2sind gespalten. Export nach zytoplasmatischen, Pre-MiRNAs weiterverarbeitet werden von DICER in Reife MiRNAs, die 18-25 Nukleotide3,4umfassen. Anschließend enthält der RNA-induced silencing-Komplex (RISC) diese MiRNAs als einsträngige RNA, die ihre Bindung an die 3' untranslatierten Region (3'-UTR) ihre Ziel-mRNAs ermöglicht, ihren Ausdruck3,5 zu unterdrücken .
In den letzten drei Jahrzehnten da sie zuerst identifiziert wurden, entstanden MiRNAs zum master Regler der Genexpression, deren eigenen Ausdruck streng kontrollierten6sind. Rollen für MiRNAs wurden im Orgel Entwicklung7,8,9,10,11,12, Aufrechterhaltung der Homöostase13,14 beschrieben. , sowie Krankheit zusammenhängen, die neurologische15,16,17,18,19, Herz-Kreislauf-20, enthalten Autoimmunerkrankung21 ,22und Krebserkrankungen23,2425. Die zunehmende Wertschätzung für die Relevanz der MiRNA Expressionsmuster hat die Notwendigkeit einer zuverlässigen Nachweisverfahren MiRNA Transkripte vorverlegt. Solche Methoden sind Real-Time PCR, Microarrays, Nordbeflecken, in Situ Hybridisierung und andere, die in die Sensitivität, Spezifität und quantitative macht überwiegend variieren die MiRNA Transkripte von kurzen bestehen und hochgradig homologe Sequenzen6.
Wir berichteten vor kurzem eine wichtige Rolle für die MiRNA-182 in der Entwicklung der myokardialen Hypertrophie26, eine Bedingung, die Beschreibung der strukturellen Anpassungdes des Herzens als Reaktion auf erhöhten hämodynamischen Anforderungen27,28. Herzhypertrophie zeichnet sich durch die Zunahme der myokardialen Masse führen, wenn im Zusammenhang mit maladaptive umgestaltet29, erhöhtes Risiko für Herzinsuffizienz, einem Anteil von 8,5 % aller Todesfälle auf Herz-Kreislauf-Zustand kann Krankheit-30.
Hier beschreiben wir unsere Protokoll, das in Situ Hybridisierung mit Digoxigenin-markierten Sonde (DIG) gesperrt Nukleinsäure (LNA) und Immunostaining für die gleichzeitige Detektion von MiRNA und Protein-Moleküle auf Maus Herz Gewebeschnitte, verbindet unsere Modell der Herzhypertrophie.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5758</td>
			<td>DEPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB02038</td>
			<td>non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>HS-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, recombinant, PCR Grade</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3115879001</td>
			<td>ProK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S271</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride Hexahydrate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 1 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SA48</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid Solution, 12 N</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>S25358</td>
			<td>HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Methylimidazole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>336092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>39391</td>
			<td>EDC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>216763</td>
			<td>H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td>Sodium Citrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>339450</td>
			<td>scramble miRNA/U6 snRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRCURY LNA mmu-miR-182 detection probe</td>
			<td>QIagen</td>
			<td>YD00615701</td>
			<td>5&#39;-DIG and 3&#39;-DIG labelled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisol hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NBT/BCIP Tablets</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11697471001</td>
			<td>NBT-BCIP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslip</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-545E</td>
			<td>Glass coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic coverslip</td>
			<td>Grace Bio-Labs</td>
			<td>HS40 22mmX40mmX0.25mm</td>
			<td>RNA-ase free plastic coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>11093274910</td>
			<td>DIG antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td>Pap pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cardiac Troponin T antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92546</td>
			<td>cTnT antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Absorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-11011</td>
			<td>anti-rabbit-568 antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized Formamide</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB00600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Oven</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>UVP HB-1000 Hybridizer</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue-specific mirna expression profiling in mouse heart sections using in situ hybridization

Mikro-RNAs (MiRNAs) sind einsträngige RNA-Transkripte, die an Messenger-RNAs (mRNAs) binden und deren Übersetzung hemmen oder fördern ihren Abbau. Bisher waren MiRNAs in eine große Anzahl von biologischen und Krankheit Verfahren verwickelt, die die Notwendigkeit für die zuverlässige Nachweismethoden MiRNA Transkripte bezeichnet hat. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für Digoxigenin-markierten (DIG) gesperrt Nukleinsäure (LNA) testbasierte MiRNA-Erkennung, kombiniert mit Protein Immunostaining auf Maus Herz Abschnitte. Zunächst führten wir eine in Situ Hybridisierung-Technik mit der Sonde, um MiRNA-182 Ausdruck im Herzen Abschnitte von Kontrolle und Herzhypertrophie Mäuse zu identifizieren. Als nächstes führten wir Immunostaining für kardiale Troponin T (cTnT) Protein, auf die gleichen Abschnitte, MiRNA-182 mit den Cardiomyocyte Zellen Co zu lokalisieren. Unter Verwendung dieses Protokolls, konnten wir erkennen, dass MiRNA-182 durch eine alkalische Phosphatase farbmetrischen Assay und cTnT durch fluoreszierende Färbung basiert. Dieses Protokoll kann verwendet werden, den Ausdruck der jede MiRNA des Interesses durch LNA DIG-markierten Sonden und entsprechende Protein-Expression auf Maus Herz Gewebeschnitte erkennen.

MiRNA in Situ Hybridisierung wurde auf Maus Herz Abschnitte mit einem Gerangel MiRNA und U6-SnRNA, diente als negativ-und Positivkontrollen bzw. optimiert. Positive Färbung wird angegeben in blau, während die negative Färbung durch die fehlende Farbentwicklung angezeigt wird (Abbildung 1A-1 b). Cardiomyocyte Konkretisierung der MiRNA-182 wurde abschnittsweise Herz von Kontrolle und PlGF überexprimierenden Mäusen bewertet. Die M?...

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Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Gewebespezifische MiRNA Expression Profiling in Maus Herz Abschnitte In Situ Hybridisierung

Mikro-RNAs (MiRNAs) sind kurz und stark homologe RNA-Sequenzen, dienen als Posttranskriptionale Regulatoren der Messenger-RNAs (mRNAs). Aktuelle MiRNA Nachweismethoden unterscheiden sich in der Sensitivität und Spezifität. Wir beschreiben eine Protokoll, die in Situ Hybridisierung und Immunostaining für die gleichzeitige Erkennung von MiRNA und Protein-Moleküle auf Maus Herz Gewebeschnitte verbindet.

micro-RNAs (miRNAs) are single-stranded RNA transcripts that bind to messenger RNAs (mRNAs) and inhibit their translation or promote their degradation. To ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im bereichmicroRNA zu beantworten, indem sie Werkzeuge bereitstellt, um die relative Lcalisierung von Protein- und MicroRNA-Molekülen zu erkennen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass Sie sowohl Protein- als auch MicroRNA-Moleküle aus demselben Gewebeabschnitt erkennen können. Dieses Protokoll beginnt mit einer Rehydrierung des auf Dergleit montierten Gewebes.Die Dias bei 60 Grad Celsius 10 Minuten im Hybridisierungsofen erwärmen. Das Paraffin sollte sichtbar schmelzen. Dann inkubieren Sie die Dias in einem Glas Coplin Glas mit handelsüblichen Clearing-Agent für 10 Minuten.Tun Sie dies zweimal. Als nächstes übertragen Sie die Rutschen von waschen zu waschen, um das Gewebe zu rehydrieren. Nach der Hydratisierung die Gewebe in Proteinase K Arbeitslösung bei 37 Grad Celsius für 15 Minuten inkubieren.Um die Proteinase K zu entfernen, waschen Sie die Dias in 1x PBS zweimal. Beheben Sie nun das Gewebe. Machen Sie zunächst Reservoirs auf den Rutschen mit einem hydrophoben Stift, um einen wasserabweisenden Kreis um die Präparate zu ziehen.Als nächstes 500 Mikroliter 4%PFA Lösung innerhalb der Barriere auftragen und die Dias in einer Dunstabzugshaube inkubieren. Um das Fixativ zu entfernen, waschen Sie die Dias in einem Coplin-Glas, das PBS enthält, zwei Minuten lang zwei Mal bei Raumtemperatur. Als nächstes waschen Sie die Dias in 0,13 molarem 1-Methylimidazol für 10 Minuten.Tun Sie dies in der Dunstabzugshaube bei Raumtemperatur, und führen Sie diese Wäsche zweimal durch. Fügen Sie das EDC Fixativ hinzu und inkubieren Sie bei Raumtemperatur eine Stunde lang in einer Dunstabzugshaube. Spülen Sie die Dias mit 50-Millimolar Tris ab.Um sich auf die Hybridisierung vorzubereiten, bauen Sie zunächst eine befeuchtete Kammer. Zwei Teile Filter- oder Tissuepapier in den Boden einer Schachtel geben und das Papier mit einer Eins-zu-Eins-Mischung aus Formamid und 1x SSC befeuchten. Als nächstes 200 Mikroliter vorgewärmter Hybridisierungslösung auf jeden Schlitten auftragen und die befeuchtete Rutschkammer für ein bis drei Stunden bei 50 Grad Celsius inkubieren.Ersetzen Sie nach der Inkubation die Hybridisierungslösung durch 250 Mikroliter Sondenlösung und bedecken Sie die Dias mit einem RNase-freien Abdeckungsschlupf. Versuchen Sie, Luftblasen unter dem Deckelschlupf zu vermeiden. Nun die Kammer vorsichtig mit Parafilm versiegeln und die Dias über Nacht bei etwa 30 Grad Celsius unter der RNA-Schmelztemperatur der Sonde bebrüten.Möglicherweise ist eine Optimierung erforderlich. Neben der Einstellung der richtigen Inkubationstemperatur werden verschiedene microRNAs auf unterschiedlichen Ebenen ausgedrückt, so dass auch eine Optimierung der Sondenkonzentration erforderlich sein kann, um das optimale Signal zu erhalten. Führen Sie nach der Hybridisierung die Stringenz-Wähvorgänge aus.Zuerst war in 2x SSC bei 50 Grad Celsius für fünf Minuten, oder bis die Abdeckung rutscht lockern. Führen Sie dann zwei Wässer in 2x SSC bei Raumtemperatur, jeweils für fünf Minuten. Dann, weiter bei Raumtemperatur, waschen Sie die Rutschen für fünf Minuten in 0.2x SSC, gefolgt von fünf Minuten in PBST, und schließlich, fünf Minuten in 1x PBS.Zu diesem Zeitpunkt sind die RNA-RNA-Hybriden stabil, und RNA-strenge Bedingungen werden nicht mehr benötigt. Für die DIG-Antikörperdetektion können Sie zunächst die hydrophoben Barrieren hochgreifen und 30 Minuten lang 500 Mikroliter Blockierlösung anwenden. Inkubieren Sie die Dias bei Raumtemperatur in einer befeuchteten Kammer.Entfernen Sie als Nächstes die Blockierlösung und ersetzen Sie sie durch 500 Mikroliter DIG-Antikörperlösung. Inkubieren Sie die Dias bei Raumtemperatur in einer befeuchteten Kammer für eine Stunde. Dann, mit Coplin Gläser, waschen Sie die Dias dreimal in PBST für fünf Minuten pro Wäsche.Als nächstes waschen Sie die Dias zweimal in Vorfärbelösung für fünf Minuten. Übertragen Sie dann die Dias in ein Polypropylen-Dia-Mailer-Glas, und fügen Sie 20 Milliliter AP-Substratlösung hinzu. Jetzt inkubieren Sie die Rutschen bei 37 Grad Celsius für sechs bis 24 Stunden, vor dem Licht geschützt.Bei der ersten Verwendung von AP-Substrat ist es wichtig, der Reaktion zu folgen. Überprüfen Sie in Zwei-Stunden-Intervallen die Farbentwicklung auf den Dias mit einem Mikroskop, bis eine optimale Inkubationszeit bestimmt ist. Um das überschüssige AP-Substrat zu entfernen, waschen Sie die Dias zweimal in KTBT-Lösung für fünf Minuten pro Wäsche, gefolgt von einer Wäsche in PBS für fünf Minuten.Um den cTNT-Antikörper zu erkennen, blockieren Sie zunächst das Gewebe für eine Stunde. Dann 200 Mikroliter cTNT-Antikörperlösung auftragen und die Dias über Nacht bei 4 Grad Celsius in einer befeuchteten Kammer bebrüten. Am nächsten Tag die Dias in einem Coplin-Glas mit PBS für fünf Minuten waschen.Tun Sie dies dreimal. Dann 250 Mikroliter Anti-Kaninchen 568 Antikörperlösung auftragen und die Dias eine Stunde bei Raumtemperatur in einer befeuchteten Kammer bebrüten. Um den überschüssigen Sekundärantikörper auszuwaschen, verwenden Sie drei fünfminütige Wähschüsse in PBS.Dann, wenn gewünscht, 250 Mikroliter DAPI-Arbeitslösung anwenden und die Dias für eine Minute inkubieren, vor Licht geschützt. Um den überschüssigen DAPI-Fleck zu entfernen, verwenden Sie zwei fünfminütige PBS-Wärungen, und montieren Sie nach dem Einheben der Folien die Folien. Die MicroRNA-In-situ-Hybridisierung wurde für Mausherzabschnitte optimiert, indem eine gewürfelte microRNA für negative Kontrolle und eine U6 snRNA als positive Kontrolle verwendet wurden.Die Kardiomyozyten-spezifische Expression von microRNA-182 wurde in Herzabschnitten von Kontroll- und PlGF-überexzierenden Mäusen untersucht. Die Mäuse trugen ein PlGF-Transgen unter einem Alpha-MHC-Promotor und entwickelten eine Kardialhypertrophie, sekundär zur erhöhten Angiogenese, innerhalb von sechs Wochen nach der Transgenaktivierung. Das Färbeprotokoll zeigte eine erhöhte Expression von microRNA-182 in den Herzen von PlGF-Mäusen.Um zu bestimmen, welche Zelltypen microRNA-182 exprimierten, wurden dieselben Abschnitte für cTNT immunstainiert. DAPI-Färbung wurde ebenfalls verwendet. Sowohl in Kontroll- als auch in PlGF-Mausherzabschnitten wurde microRNA-182 im Kernraum von cTNT-positiven Kardiomyozytenzellen gefunden.Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine MikroRNAse-Hybridisierung durchführen können, gefolgt von Protein-Immunostaining. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es sehr wichtig, daran zu denken, RNAse-freie Bedingungen während aller Schritte, die zur Prop-Hybridisierung führen, den ersten Tag über zu behalten. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie Western Blot in einer Echtzeit-PCR durchgeführt werden, um Fragen wie, was sind die relativen Expressionsniveaus dieser bestimmten microRNA in verschiedenen Geweben, oder dieses besondere Protein in der gleichen Gewebeabschnitt zu beantworten.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Fixativen wie PFA und ADC extrem gefährlich sein kann. Vorsichtsmaßnahmen, einschließlich des Tragens von Handschuhen und Labormänteln sowie der Verwendung von Dunstabzugshauben, sollten immer bei der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden.

Research

JoVE Journal

Genetics

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

In Situ Labeling of Mitochondrial DNA Replication in Drosophila Adult Ovaries by EdU Staining

In Situ Labeling der mitochondrialen DNA - Replikation in Drosophila Adult Ovarien von EdU Anfärben

The mitochondrial genome is inherited exclusively through the maternal line. Understanding of how the mitochondrion and its genome are proliferated and ...

Forschung

Genetik

Parallel Measurement of Circadian Clock Gene Expression and Hormone Secretion in Human Primary Cell Cultures

Parallel Messung von Circadian Clock Genexpression und Hormon-Sekretion in primären humanen Zellkulturen

Circadian clocks are functional in all light-sensitive organisms, allowing for an adaptation to the external world by anticipating daily environmental ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetische Zufallsmutagenese Mit Histon-miniSOG in<em&gt; C. elegans</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

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Der Nachweis von Inter-chromosomale Stable Abberationen durch Mehrfachfluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung (MFISH) und Spektrale Karyotypisierung (SKY) in Bestrahlte Mäuse

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

Single-cell Gene Expression Profiling Using FACS and qPCR with Internal Standards

Einzellige Genexpressionsprofile mittels FACS und qPCR mit internen Standards

Gene expression measurements from bulk populations of cells can obscure the considerable transcriptomic variation of individual cells within those ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

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Hochauflösender Fluoreszenz In Situ Hybridisierung in Drosophila Embryos und Gewebe mit Tyramide Signalverstärkung

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

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DNA-Replikation Timing mit Zebrafisch als ein In Vivo Modell-System-Profiling

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Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

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Visualisierung der Mikrobiota in Tick Mut durch ganze-Mount In Situ Hybridisierung

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Single Molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH) Analysis in Budding Yeast Vegetative Growth and Meiosis

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Einzigen Molekül Fluoreszenz In Situ Hybridisierung (SmFISH) Analyse in Knospen Hefe vegetativen Wachstums und Meiose

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Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

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Quantitative Analyse der alternativen Pre-mRNA Spleißen in Maus Gehirn Abschnitten mit RNA In Situ Hybridisierung Assay

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...